Сайт издательства «Медиа Сфера»
содержит материалы, предназначенные исключительно для работников здравоохранения. Закрывая это сообщение, Вы подтверждаете, что являетесь дипломированным медицинским работником или студентом медицинского образовательного учреждения.

Смирнова Н.Г.

Кафедра патофизиологии

Чефу С.Г.

лаборатория экспериментальных исследований центра лазерной медицины Санкт-Петербургского государственного медицинского университета им. акад. И.П. Павлова

Коваленко А.Л.

Дирекция по науке ООО "НТФФ "Полисан", Санкт-Петербург

Ягмуров О.Д.

кафедра судебной медицины и правоведения

Власов Т.Д.

Кафедра патофизиологии

Влияние инфузионных гепатопротекторов на функ­циональное состояние печени при эксперимен­тальном холестазе

Авторы:

Смирнова Н.Г., Чефу С.Г., Коваленко А.Л., Ягмуров О.Д., Власов Т.Д.

Подробнее об авторах

Журнал: Хирургия. Журнал им. Н.И. Пирогова. 2010;(10): 83‑88

Просмотров: 203

Загрузок: 1

Как цитировать:

Смирнова Н.Г., Чефу С.Г., Коваленко А.Л., Ягмуров О.Д., Власов Т.Д. Влияние инфузионных гепатопротекторов на функ­циональное состояние печени при эксперимен­тальном холестазе. Хирургия. Журнал им. Н.И. Пирогова. 2010;(10):83‑88.
Smirnova NG, Chefu SG, Kovalenko AL, Iagmurov OD, Vlasov TD. Effect of infusion hepatoprotectors on hepatic function in experimental cholestasis. Pirogov Russian Journal of Surgery = Khirurgiya. Zurnal im. N.I. Pirogova. 2010;(10):83‑88. (In Russ.).

?>

Введение

Обструктивная желтуха возникает вследствие механического препятствия току желчи на каком-либо участке от гепатоцита до фатерова соска и значительно ухудшает течение основного заболевания, при котором она развивается. Она характеризуется развитием синдрома внепеченочного холестаза, при котором нарушены процессы образования и выделения желчи с уменьшением или полным прекращением поступления желчи в двенадцатиперстную кишку [3, 4, 8, 9].

Наиболее частой причиной развития обструктивной желтухи является рак органов билиопанкреатодуоденальной зоны, который включает в себя злокачественные новообразования внепеченочных желчных протоков, желчного пузыря, большого дуоденального сосочка и головки поджелудочной железы и составляет до 10% всех злокачественных новообразований [5].

Другой причиной развития обструктивной желтухи является желчнокаменная болезнь. В последние десятилетия заболеваемость желчнокаменной болезнью резко повысилась, по данным National Institute of Health (1992 г.), этим заболеванием страдает 10-15% взрослого населения [1].

Клиническая картина холестаза связана с задержкой в крови компонентов, в норме экскретируемых в желчь (билирубин, соли желчных кислот, холестерин) [3, 8, 9]. Накоплением в крови желчных кислот объясняется кожный зуд у пациентов с обтурационной желтухой, наиболее выраженный при длительно существующей желтухе у пациентов со злокачественными новообразованиями [3]. Вследствие нарушения всасывания и переваривания пищи у больных развиваются симптомы стеатореи, из-за нарушения всасывания витамина К - геморрагические осложнения [1, 3, 8, 9].

При биохимическом анализе крови отмечается повышение уровня билирубина в основном за счет конъюгированного, повышение уровня экскреторных ферментов: щелочной фосфатазы, гамма-глутамилтранспептидазы.

При длительно существующем холестазе в процесс вторично вовлекается паренхима печени, что приводит к частичному нарушению захватывания и связывания неконъюгированного билирубина и к повышению его содержания в сыворотке крови. Одновременно изменяются и другие лабораторные показатели, свойственные поражению паренхимы печени, - аспартатаминотрансфераза, аланинаминотрансфераза [1, 4, 8].

Новый инфузионный гепатопротектор ремаксол (ООО «НТФФ «Полисан») является сбалансированным полиионным инфузионным раствором, оказывающим гепатопротекторное действие. Препарат содержит в своем составе активные компоненты - янтарную кислоту, рибоксин, никотинамид, метионин, а также электролиты - натрия хлорид, магния хлорид, калия хлорид и сольстабилизирующий агент N-метилглюкамин.

Препарат способствует снижению уровня билирубина и его фракций, улучшает экскрецию прямого билирубина в желчь. Показанием к назначению ремаксола являются нарушения функции печени вследствие острого или хронического ее повреждения (токсические, алкогольные, лекарственные гепатиты) [6, 7].

Гептрал - гепатопротекторное средство, которое оказывает холеретическое и холекинетическое действие. Препарат эффективен при внутридольковом варианте холестаза (нарушение синтеза и тока желчи). Показаниями к назначению гептрала являются хронический холецистит, холангит, внутрипеченочный холестаз и токсические поражения печени.

В настоящем исследовании изучалось влияние гепатопротекторов ремаксола и гептрала на функциональное состояние печени на модели экспериментальной обтурационной механической желтухи у крыс.

Материал и методы

Исследование выполнялось на 70 крысах-самцах линии Вистар (возраст 18 нед, масса 270-300 г), полученных из питомника «Рапполово» РАМН (Санкт-Петербург).

До экспериментов животных подвергали 14- дневному карантину и рандомизации. Животных содержали в условиях вивария на стандартном рационе. Экспериментальных животных не ограничивали в потреблении корма и воды.

Все эксперименты выполняли под анестезией (натрия тиопентал 50 мг/кг внутрибрюшинно).

Экспериментальный холестаз моделировали путем перевязки общего желчного протока [10]. Крысам под общей анестезией проводили срединную лапаротомию, органы брюшной полости сдвигали и выделяли общий желчный проток. Последний перевязывали лигатурой 4-0, после чего органы брюшной полости крысы аккуратно возвращали в прежнее положение и послойно ушивали операционную рану.

В дальнейшем всем животным со 2-го дня после операции в хвостовую вену вводили исследуемые препараты в течение 5 дней.

Все экспериментальные животные были разделены на 8 групп: ложнооперированные, которым осуществляли полную процедуру воспроизведения холестаза без перевязки общего желчного протока, со сроком после операции 1 и 2 нед (группы №1 и 2 соответственно); группа №3 - холестаз сроком 1 нед и введение 0,9% NaCl в объеме 1 мл/100 г; группа №4 - холестаз сроком 2 нед и введение 0,9% NaCl в объеме 1 мл/100 г; группа №5 - холестаз сроком 1 нед и введение ремаксола в объеме 1 мл/100 г; группа №6 - холестаз сроком 2 нед и введение ремаксола в объеме 1 мл/100 г; группа №7 - холестаз сроком 1 нед и введение гептрала в объеме 1 мл/100 г; группа №8 - холестаз сроком 2 нед и введение гептрала в объеме 1 мл/100 г. Гептрал, лиофилизат для внутривенного и внутримышечного введения (400 мг) растворяли в специальном прилагаемом растворителе (раствор L-лизина) и затем разводили в 400 мл раствора NaCl 0,9%.

Внутривенное введение растворов в хвостовую вену экспериментальных животных производили со скоростью 1 мл/мин.

В течение исследования каждое животное осматривалось ежедневно. Осмотр включал оценку общего поведения, состояния животных, степени желтушности видимых слизистых и склер, массы крыс.

Крыс выводили из эксперимента через 1 или 2 нед после операции в зависимости от распределения по группам.

Забор крови проводили перед непосредственным выведением животного из опыта под анестезией (натрия тиопентал 50 мг/кг внутрибрюшинно). Кровь без консерванта набирали в пластиковые пробирки и оставляли на 30 мин. После этого кровь центрифугировали при 1500 оборотов в течение 15 мин. Оценивали следующие биохимические показатели сыворотки крови: аланинаминотрансферазу, аспартатаминотрансферазу, билирубин общий, билирубин прямой, билирубин непрямой, щелочную фосфатазу, амилаза, гамма-глютамилтранспептидазу, альбумин. Все биохимические исследования выполняли на автоматическом анализаторе Synchron («Beckman Coulter», США).

Патоморфологическое исследование включало некропсию, макроскопическое исследование, взвешивание и гистологическое исследование печени. Оценивали размер и массу печени, степень асцита. Было проведено исследование состояния брюшной полости и макро- и микроскопическое исследование печени. Гистологический материал заливали в парафин. Парафиновые блоки обрабатывали на санном микротоме МС-2. Препараты после окраски гематоксилином и эозином просматривали на световом микроскопе МБИ-15 с бинокулярной насадкой. Исследовали образцы ткани печени (степень повреждения, фибротический процесс, ангиогенез).

Статистическую обработку результатов исследования проводили с помощью программы Statistica (непараметрический U-критерий Вилкоксона-Манна-Уитни). Оценивали достоверность различий между группами: физиологический раствор 1 нед и ложнооперированные 1 нед; физиологический раствор 2 нед и ложнооперированные 2 нед; ремаксол 1 нед и физиологический раствор 1 нед; ремаксол 2 нед и физиологический раствор 2 нед; гептрал 1 нед и физиологический раствор 1 нед; гептрал 2 нед и физиологический раствор 2 нед.

Результаты и обсуждение

У всех животных операция по воспроизведению экспериментального холестаза не влияла на потребление корма и воды. И ложнооперированные, и экспериментальные животные имели положительную динамику в массе, достоверно не различавшуюся между группами (р<0,05).

У животных во всех экспериментальных группах наблюдалась выраженная желтушность слизистых и внутренних органов, что выявлялось на вскрытии брюшной полости при выведении животных из опыта. У части животных (в среднем около 30% по всем группам) отмечался асцит, но различий по частоте асцита и объему асцитической жидкости не было.

При оценке биохимических показателей были достоверно увеличены показатели, отражающие холестатический синдром: общий, прямой и непрямой билирубин, гамма-глютамилтранспептидаза и щелочная фосфатаза (см. таблицу).

Максимальные различия в уровне билирубина отмечались на 7-й день после операции, в то время как на 14-й день они были несколько ниже, чем на 7-й, но по-прежнему, сохранялись на значительно более высоком уровне, чем в группе ложнооперированных животных.

При сравнении инфузионных гепатопротекторов на уровень общего билирубина, влияние гептрала на снижение его уровня при холестазе 1 нед по сравнению с группой физиологического раствора достоверно более выраженным (р=0,041), чем в группе с ремаксолом (р=0,226).

Также достоверно более выраженным было снижение уровня конъюгированного билирубина в группе с гептралом (р=0,002), чем в группе с ремаксолом (р=0,023) при холестазе сроком 1 нед, что говорит о более выраженном антихолестатическом эффекте гептрала.

Уровни индикаторных ферментов аспартатаминотрансферазы и аланинаминотрансферазы в контрольной группе (с NaCl 0,9%) были максимально повышены по сравнению с группой ложнооперированных животных через 2 нед после перевязки общего желчного протока (р=0,003 и 0,005 соответственно), что можно расценить как повреждение паренхимы печени при длительно существующем холестазе.

При сравнении этих показателей в группах гепатопротекторов было показано, что уровень аспартатаминотрансферазы и аланинаминотрансферазы в группе с ремаксолом имел тенденцию к снижению (р=0,023 и 0,129 соответственно) и повышению в группе с гептралом (р=0,257 и 0,544 соответственно) на сроке 2 нед по сравнению со сроком 1 нед.

При оценке влияния гепатопротекторов на динамику индикаторных ферментов ремаксол оказал достоверно более выраженное гепатопротективное действие на уровень аспартатаминотрансферазы (р=0,023) по сравнению с гептралом (р=0,257) и продемонстрировал тенденцию к более выраженному снижению уровня аланинаминотрансферазы (АЛТ), (р=0,129) по сравнению с гептралом (р=0,544), хотя уровни этого показателя были недостоверными у обоих препаратов, что связано с большим разбросом данных. Более выраженное влияние ремаксола на уровень индикаторных ферментов, отражающих повреждение паренхимы печени, может быть связано с мембранопротективным влиянием препарата на клеточные структуры гепатоцита [2].

При оценке морфологических изменений на фоне введения NaCl 0,9% при холестазе сроком 1 нед было показано, что дольковое строение печени в целом было сохранено. Артерии и вены печеночных триад полнокровны. Отмечалась пролиферация желчных протоков и лимфоплазмоцитарная инфильтрация. На месте некоторых триад крупноочаговые кровоизлияния с умеренной лимфоплазмоцитарной инфильтрацией. Имела место тенденция к формированию ложных желчных ходов.

При холестазе сроком 2 нед на фоне введения NaCl 0,9% изменения были более выраженными по сравнению с группой ложнооперированных (рис. 1 и 2).

Рисунок 1. Морфологическая картина печени крыс контрольной группы - ложнооперированные, которым осуществляли полную процедуру воспроизведения холестаза без перевязки общего желчного протока, со сроком после операции 2 нед. Ув. 10×20. Строение печени у ложнооперированных животных не изменено. Хорошо выражено дольковое строение печени, не изменен сосудистый рисунок. Отсутствуют видимые изменения желчных протоков.
Рисунок 2. Морфологическая картина печени крыс группы №4 - холестаз сроком 2 нед и введение 0,9% NaCl в объеме 1 мл/100 г. Ув. 10×20. Дольковое строение печени местами стерто. Отмечается резко выраженное полнокровие венозного русла. Крупные желчные протоки резко расширены, просвет пуст. Имеются сформированные ложные желчные ходы, наблюдаются паретическое расширение отдельных вен и желчных протоков, множественные кровоизлияния и некроз отдельных печеночных триад с выраженной лимфоплазмоцитарной инфильтрацией.
Дольковое строение печени местами стерто. Отмечалось резко выраженное полнокровие венозного русла. Крупные желчные протоки резко расширены, просвет пуст. Имелись сформированные ложные желчные ходы, наблюдались паретическое расширение отдельных вен и желчных протоков, множественные кровоизлияния и некроз отдельных печеночных триад с выраженной лимфоплазмоцитарной инфильтрацией.

При оценке морфологических изменений на фоне введения ремаксола и гептрала при холестазе сроком 1 и 2 нед была показана в целом сходная картина (рис. 3 и 4).

Рисунок 3. Морфологическая картина печени крыс группы №6 - холестаз сроком 2 нед и введение ремаксола в объеме 1 мл/100 г. Ув. 10×20. Дольковое строение печени в целом сохранно. Центральные вены расширены, междольковые расширены и резко полнокровны, желчные протоки пролиферируют, с тенденцией к формированию ложных желчных ходов, просвет протоков пуст. В отдельных триадах слабая лимфоплазмоцитарная инфильтрация и старые очаговые кровоизлияния.
Рисунок 4. Морфологическая картина печени крыс группы №8 - холестаз сроком 2 нед и введение гептрала в объеме 1 мл/100 г. Ув. 10×20. Дольковое строение сохранено, отмечается расширение центральных вен с неравномерным их полнокровием. Наблюдается незначительная пролиферация желчных протоков с тенденцией к формированию ложных желчных ходов, в проекции отдельных триад кровоизлияния и умеренная лимфоплазмоцитарная инфильтрация.
Морфологические изменения были менее выражены, чем в группе с NaCl 0,9%, что проявлялось сохранностью долькового строения печени, менее выраженной дилатацией вен и лимфоплазмоцитарной инфильтрацией.

На морфологическом уровне гепатопротективное действие в отдельных препаратах в небольшой степени оказалось выше в группе ремаксола, однако в целом характер и интенсивность изменений были однотипны и сопоставимы в двух группах без явно выраженных морфологических различий.

В проведенном нами эксперименте воспроизведенная модель холестаза является довольно искусственным отражением клинической модели обтурационной желтухи, так как в клинике хирургических болезней обтурационная желтуха является показанием к ее хирургическому лечению для восстановления нарушенного желчеоттока.

Оба препарата, изучаемых в эксперименте, оказали гепатопротективное действие как при оценке биохимических показателей, так и при изучении морфологической картины печени и отмечались на обоих сроках холестаза.

Влияние гептрала было достоверно более выраженным на биохимические показатели холестаза, в то время как ремаксол более отчетливо влиял на биохимические показатели, отражающие паренхиматозное повреждение печени.

Подтверждение e-mail

На test@yandex.ru отправлено письмо с ссылкой для подтверждения e-mail. Перейдите по ссылке из письма, чтобы завершить регистрацию на сайте.

Подтверждение e-mail