Семенов Ф.В.

Кафедра болезней уха, горла и носа Кубанского государственного медицинского университета Минздравсоцразвития России, Краснодар

Скибицкая Н.Ф.

Кафедра болезней уха горла и носа Кубанского государственного медицинского университета Минздрава России, Краснодар, Россия, 350063

Влияние биосовместимого клея на основе цианакрилата на регенерацию хрящевой ткани

Журнал: Вестник оториноларингологии. 2017;82(5): 22-25

Просмотров : 8

Загрузок :

Как цитировать

Семенов Ф. В., Скибицкая Н. Ф. Влияние биосовместимого клея на основе цианакрилата на регенерацию хрящевой ткани. Вестник оториноларингологии. 2017;82(5):22-25. https://doi.org/10.17116/otorino201782522-25

Авторы:

Семенов Ф.В.

Кафедра болезней уха, горла и носа Кубанского государственного медицинского университета Минздравсоцразвития России, Краснодар

Все авторы (2)

Современное хирургическое лечение больных хроническим гнойным средним отитом (ХГСО) ставит своей конечной целью ликвидацию воспалительного процесса и создание нормальных анатомических взаимоотношений среднего и наружного уха, что позволяет достигнуть максимально возможного восстановления слуха. С этой целю выполняются такие технические этапы операции, как тимпанопластика, оссикулопластика, мастоидопластика и др. Для замещения утраченных в результате болезни или удаленных в процессе операции анатомических структур среднего уха зачастую используются различные виды соединительной ткани (фасция, хрящ, периост).

Одним из главных факторов, влияющих на хороший функциональный результат, является не только восстановление звукопроводящих структур, но и фиксация их в заданном положении [1—3]. Поиск оптимального способа стабилизации неотимпанального лоскута, реконструированных элементов слуховых косточек, костнозамещающего вещества или ткани при облитерации сосцевидного отростка является предметом научных исследований многих специалистов. В большом количестве случаев отохирургами используются клеевые композиции: популярным является биоклей Тиссукол. Существенным недостатком этого биоклея являются риск развития нежелательной ответной реакции у пациента с последующими осложнениями, а также сложность изготовления и высокая цена. Отечественные и зарубежные синтетические клеевые композиции Биоклей — ЛАБ, ПЭЦЛ, МК-2, МК-6, МК-7, МК-7М, МК-9, МК-14И, Истмен-адгезив-910 фирмы «Этикон» (США), Гистоакрил фирмы «Браун» (Германия), Афон-2 и Циако-бод (Япония), Акутон фирмы «Спофа» (Польша) и др. прошли экспериментальную и клиническую апробацию и были рекомендованы для широкого использования в хирургии желудочно-кишечного тракта, печени, желчных путей, сердечно-сосудистой хирургии, при операциях на почках, мочеточниках, щитовидной железе, в хирургии органов дыхания, для склеивания мышц и пластики связок. В то же время одни из них вызывали воспалительный процесс в тканях, другие оказывались хрупкими и малоэластичными, третьи не могли обеспечить механическую прочность и создать необходимую герметичность в зоне подклеивания.

В своей работе мы решили исследовать возможности использования биосовместимого клея Сульфакрилат для укрепления реконструированных элементов среднего уха. Биосовместимый клей представляет собой клеевую композицию на основе цианакрилата, в которую включены пластифицирующие, противовоспалительные и антимикробные компоненты. При контакте с живой тканью и водными растворами клеевая композиция полимеризуется в течение 10—120 с. Образуемая полимерная пленка рассасывается 30—40 сут [4].

В отличие от клеевых композиций, перечисленных выше, биосовместимый клей на основе цианакрилата дешев, обладает бактерицидным и кровоостанавливающим действием, сочетает необходимую прочность и эластичность. Разработчиками проведены бактериологические исследования клея с культурами бактерий Staphylococcus aureus, Escherichia coli, и было доказано, что присутствие клеевой композиции подавляет рост микробных штаммов [5]. Клей аутостерилен, представлен в готовом для употребления виде в полиэтиленовых ампулах-тюбиках по 1 мл с герметично запаянной горловиной. Клей обладает хорошей текучестью, при необходимости легко набирается в шприц через инъекционную иглу.

Цель работы — экспериментальное исследование влияния биосовместимого клея на основе цианакрилата на регенерацию хрящевой ткани.

Материал и методы

В качестве объекта исследования были взяты кролики-самцы калифорнийской породы (3 животных, 6 ушных раковин). Исследования выполнялись в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных», разработанными и утвержденными Минздравом в 1977 г. После анестезии на выбритом от шерсти участке наружной поверхности каждой ушной раковины производили дугообразный разрез кожи до хряща. Из ушной раковины вырезали кусочек хряща округлой формы диаметром около 1,5 см. Ушной хрящ подвергали деструкции в стандартном прессе, используемом для размягчения аутохряща носовой перегородки перед его реимплантацией во время септопластики. Половину раздробленного хряща имплантировали в левую ушную раковину, хрящ которой был выбран в качестве группы контроля у каждого кролика, а остаток с добавлением биосовместимого клея — в правую ушную раковину, хрящ которой у каждого животного в ходе эксперимента рассматривали как материал опытной группы. Раны зашивали. Животным обеих групп накладывали асептические повязки, в дальнейшем проводилась ежедневная обработка разреза антисептическими растворами, швы снимали на 7-е сутки. На 10-е сутки, через 1 мес и через 2 мес животных выводили из эксперимента, а материал подвергали морфологическому исследованию.

Материал фиксировали в 10% забуференном формалине, после проводки на гистопроцессоре замкнутого цикла TISSUE-ter VIP 5Jr с вакуумом образцы заливали в гистомикс Extra с использованием станции парафиновой заливки TISSUE-tek TEC 5 с температурой плавления 56—58 °С. Срезы толщиной 5 мкм готовили на ротационном микротоме Accu-Cut SRM м200, помещали на предметные стекла с матовым краем Menzel, окрашивали гематоксилином и эозином по общепринятой методике. Окрашенные срезы подвергали визуальному патоморфологическому изучению с помощью светового микроскопа с использованием сухих апохроматических систем с общим увеличением 100. Дополнительно срезы фотографировали в стандартных условиях с помощью цифровой камеры DCM-310 c разрешением 3 мегапикселя в формате TIF. Полученные изображения подвергали морфометрии методом равноудаленных точек по Ташке с определением объемной плотности 16 градационных параметров микрофотограмм с последующим расчетом уровня интегральной энтропии, которая характеризует меру структурной неупорядоченности тканевой системы [6, 7]. При этом следует учитывать, что чем меньше элементы системы подчинены какому-либо порядку, тем выше энтропия, а при достижении энтропией максимальной величины система перестает функционировать адекватно и все ее элементы теряют функциональную взаимосвязь, превращаясь в ничем не связанный набор элементов, т. е. погибает. Таким образом, мера неупорядоченности (энтропия) морфологических систем в условиях нормы и патологии, в отличие от традиционной описательной морфологии, позволяет объективно судить о динамике процессов, происходящих в тканях. Полученные результаты обрабатывали методами вариационной статистики с использованием программы Statistica 6.1.

Результаты и обсуждение

На 10-й день исследования в гистологическом материале, полученном от животных контрольной группы, ушная раковина в месте повреждения имеет существенные нарушения послойного строения за счет разрушенного хряща. В месте повреждения наблюдается выраженное гнойное воспаление, сопровождающееся образованием полостей, заполненных гнойным экссудатом, состоящим из скоплений полиморфно-ядерных лейкоцитов. По периферии наблюдается большое количество фибробластов. Определяются очаговые кровоизлияния со скоплением эритроцитов, заметны скопления гемосидерина (рис. 1, а). Уровень интегральной энтропии составил 2,8±0,2.

Рис. 1. Гистологическая характеристика очага повреждения ушной раковины животных контрольной (а) и опытной (б) групп на 10-й день от начала эксперимента. Окраска гематоксилином и эозином. Ув. 200.

В опытной группе морфологическая картина в целом аналогична наблюдаемой в контрольной группе. У животных опытной группы в гистологическом материале на 10-й день от начала эксперимента в ушной раковине в месте повреждения также наблюдаются нарушения послойного строения, возникшие за счет разрушения хряща, а также изъязвления кожи. В месте повреждения наблюдается аутолиз мягких тканей и хряща, выраженное гнойное воспаление, скопление полиморфно-ядерных лейкоцитов, пропитывающее и расслаивающее ткани. По периферии очага наблюдаются пролиферация фибробластов, рост микрососудов (рис. 1, б). Уровень интегральной энтропии оказался существенно выше значений, характерных для животных контрольной группы, и составил 3,7±0,3 (p<0,05).

Через 1 мес от начала эксперимента в гистологическом материале животных контрольной группы ушная раковина в месте повреждения сохраняет нарушение послойного строения, происходящее за счет разрушения хряща и разрастания соединительной ткани. Хрящ в месте повреждения определяется в виде удлиненных пластинок правильной формы. Эти пластинки, располагаясь близко друг к другу, окружены большим количеством соединительной ткани с упорядоченным параллельным ходом волокон соединительной ткани, содержащей фибробласты и мелкие капилляры (рис. 2, а). Уровень интегральной энтропии тканей остается по-прежнему высоким и практически не отличается от зарегистрированного на 10-е сутки от начала эксперимента, составляя в среднем 2,6±0,4 (p>0,05).

Рис. 2. Гистологическая характеристика очага повреждения ушной раковины животных контрольной (а) и опытной (б) групп через 1 мес от начала эксперимента. Окраска гематоксилином и эозином. Ув.200.

В опытной группе через 1 мес от начала эксперимента ушная раковина в месте повреждения сохраняет нарушение послойного строения за счет разрушенного хряща и разрастания большого количества соединительной ткани. Хрящ в виде пластинок неправильной формы, состоит из зрелых и незрелых хондроцитов, местами хондроциты в виде «теней» окружены большим количеством соединительной ткани, содержащей большое количество фибробластов, определяются мелкие капилляры, многоядерные клетки, стаз крови и умеренная лимфоцитарная инфильтрация (рис. 2, б). Уровень интегральной этропии ткани, оставаясь достаточно высоким, несколько снизился по сравнению с исходными значениями и составил 3,1±0,1, однако данное снижение не было статистически значимо (p>0,05).

На 2-й месяц от начала эксперимента в гистологическом материале, полученном от животных контрольной группы, наблюдается четкое послойное гистологическое строение ушной раковины. Хрящ в месте вмешательства значительно утолщен, отмечается пролиферация хрящевых клеток, сопровождающаяся увеличением объема хрящевого матрикса. Хондроциты собраны в изогенные группы, располагаются неравномерно, наслаиваются друг на друга (рис. 3, а). Уровень интегральной энтропии тканей существенно снизился по сравнению с предыдущим сроком исследования и составил в среднем 1,6±0,1 (p<0,05).

Рис. 3. Гистологическая характеристика очага повреждения ушной раковины животных опытной и контрольной групп через 2 мес от начала эксперимента. Окраска гематоксилином и эозином. Ув. 200.

В опытной группе также наблюдается четкое послойное гистологическое строение ушной раковины. Хрящ в виде пластинки незначительно утолщен с пролиферацией хондроцитов в месте вмешательства. Хондроциты собраны в изогенные группы, располагаются равномерно, местами наслаиваются друг на друга (рис. 3, б). Уровень интегральной энтропии тканей в зоне альтерации значительно снизился по сравнению с предыдущим сроком исследования и составил 2,4±0,2 (p<0,05).

Таким образом, через 2 мес в опытной и контрольной группах наблюдалась существенная активация репаративных процессов в очаге повреждения. Гистологическая структура тканей приблизилась к характерной для неповрежденной ушной раковины. В процессе репарации визуально отмечено преимущество при использовании исследуемого биосовместимого клея, несмотря на то что в начальный период репаративного процесса (10-й день от начала эксперимента) в опытном материале воспалительный процесс в очаге повреждения носил более агрессивный характер. В то же время изучение динамики уровня интегральной энтропии, характеризующей меру структурной неупорядоченности тканевой системы, свидетельствует о том, что даже через 2 мес после начала эксперимента ее уровень остается высоким, что может быть связано с незавершенностью репаративного процесса (рис. 4).

Рис. 4. Динамика показателя интегральной энтропии тканей в процессе репарации тканей в эксперименте.

Вывод

В результате проведенного эксперимента удалось подтвердить отсутствие токсического действия биосовместимого клея на основе цианакрилата на регенерацию хрящевой ткани, что позволяет применять его в хирургии среднего уха, а также во всех видах оперативных вмешательств на хрящевой и соединительной ткани, при необходимости дополнительной интраоперационной фиксации аутотканей и замещающих их протезов.

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Подтверждение e-mail

На test@yandex.ru отправлено письмо с ссылкой для подтверждения e-mail. Перейдите по ссылке из письма, чтобы завершить регистрацию на сайте.

Подтверждение e-mail