Боронина Л.Г.

Кафедра клинической лабораторной диагностики и бактериологии ФПК и ПП Уральской государственной медицинской академии Минздрава России, Екатеринбург; 2. Областная ДКБ №1

Саматова Е.В.

Кафедра клинической лабораторной диагностики и бактериологии ФПК и ПП Уральской государственной медицинской академии Минздрава России, Екатеринбург; 2. Областная ДКБ №1

Друй А.Е.

Кафедра клинической лабораторной диагностики и бактериологии ФПК и ПП Уральской государственной медицинской академии Минздрава России, Екатеринбург; 2. Областная ДКБ №1

Панина Е.Ю.

ГКБ №40

Кочнева Н.А.

ДГКБ №11, Екатеринбург

Водовоз Н.Ю.

ДГБ №1, Нижний Тагил

Мурунова Н.В.

ГБ №7, Каменск-Уральск

Груздев А.И.

ДГБ, Асбест

Лахно Т.И.

Кафедра клинической лабораторной диагностики и бактериологии ФПК и ПП Уральской государственной медицинской академии Минздрава России, Екатеринбург

Распространенность серотипов Streptococcus pneumoniae при инфекциях ЛОР-органов и носоглоточном бактерионосительстве у детей

Журнал: Вестник оториноларингологии. 2013;78(5): 54-58

Просмотров : 9

Загрузок :

Как цитировать

Боронина Л. Г., Саматова Е. В., Друй А. Е., Панина Е. Ю., Кочнева Н. А., Водовоз Н. Ю., Мурунова Н. В., Груздев А. И., Лахно Т. И. Распространенность серотипов Streptococcus pneumoniae при инфекциях ЛОР-органов и носоглоточном бактерионосительстве у детей. Вестник оториноларингологии. 2013;78(5):54-58.

Авторы:

Боронина Л.Г.

Кафедра клинической лабораторной диагностики и бактериологии ФПК и ПП Уральской государственной медицинской академии Минздрава России, Екатеринбург; 2. Областная ДКБ №1

Все авторы (9)

Инфекции ЛОР-органов являются самыми распространенными заболеваниями человека, они регистрируются во всех возрастных группах. У детей заболеваемость хроническим тонзиллитом составляет около 27%, носа и околоносовых пазух — 35—37% среди всех заболеваний верхнего отдела дыхательных путей. Более 62% детей в возрасте до одного года переносят острый средний отит один раз, а к трем годам частота составляет 80% [1, 2]. Среди возбудителей инфекций ЛОР-органов наиболее значимыми в настоящее время являются Streptococcus pneumoniae, Haemophilusinfluenzae, реже встречается Moraxella catarrhalis [3, 4]. Исходя из антигенных свойств полисахаридной капсулы, выделяют 46 серогрупп и 91 серотип пневмококка. Спектр преобладающих серотипов S. pneumoniae варьирует в зависимости от возраста, временно`го фактора и географического региона [5— 9].

Одним из важных направлений в предупреждении пневмококковой инфекции является вакцинация. В настоящее время разработаны и разрешены к применению следующие пневмококковые вакцины: 1) конъюгированные: 7-валентная (зарегистрирована в 90 странах, включая США, страны ЕС, РФ), 10-валентная (зарегистрирована в странах ЕС, готовится к регистрации в РФ), 11-валентная (которую начали использовать в США, Великобритании, Австрии), 13-валентная (зарегистрирована в странах ЕС, США, РФ); 2) полисахаридная 23-валентная (зарегистрирована в РФ) [9—11]. Конъюгированные вакцины отличаются числом серотипов пневмококка, входящих в их состав, белками-конъюгантами и количеством полисахаридов для каждого конъюганта. В состав 7-валентной пневмококковой конъюгированной вакцины (PCV, pneumococcal conjugate vaccine) включены 4, 6B, 9V, 14, 18С, 19F и 23 F серотипы, в 10-валентную вакцину входят дополнительно серотипы 1, 5 и 7F к существующей группе серотипов, включенных в PCV7, в PCV11 добавлен 3, в PCV13 добавлены также 3 и 6А, 19А серотипы пневмококков [9]. Полисахаридная 23-валентная пневмококковая вакцина содержит очищенные капсульные полисахариды S. pneumoniae 23 серотипов: 1, 2, 3, 4, 5, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19F, 19A, 20, 22F, 23F, 33F [12].

Цель работы — определить этиологическую роль различных серотипов S. pneumoniae при инфекциях ЛОР-органов и носоглоточном бактерионосительстве у детей.

Материал и методы

С января 2002 г. по август 2011 г. исследован биоматериал на носительство пневмококка от 333 больных с диагнозом: острый и хронический гнойный средний отит, 178 — с диагнозом острый и хронический риносинусит и 77 детей без признаков тонзиллита, проживающих в Екатеринбурге и городах Свердловской области (Нижнем Тагиле, Каменск-Уральске, Асбесте). Возраст детей от 3 мес до 17 лет. Проведено микробиологическое исследование 407 проб отделяемого из среднего уха (полученного при тимпаноцентезе или самопроизвольной перфорации барабанной перепонки), 188 проб отделяемого из полости носа и 77 мазков со слизистой оболочки глотки.

Доставку и исследование клинических материалов проводили согласно МУ 4.2.2039-05 «Техника сбора и транспортирования биоматериалов в микробиологические лаборатории» и Приказу МЗ СССР №535 от 22.04.85 [13, 14]. Методика посева и набор питательных сред определялся видом исследуемого клинического материала. Идентификация выделенных и реидентификация присланных штаммов S. pneumoniae осуществлялась на основании характера колоний на кровяно-сывороточном агаре (КСА, заявка на патент от 08.07.11, регистрационный №2011128466) после инкубации в обычной атмосфере при температуре 37 °С в течение 18—24 ч, наличия α-гемолиза, чувствительности к оптохину, характеру роста в сахарном и сахарно-сывороточном бульонах, каталазной реакции, положительных результатов латекс-агглютинации с использованием набора Slidex pneumo-Kit («bioMerieux», Франция). Выделенные штаммы пневмококков хранили при –70 °С.

У 62 штаммов S. pneumoniae осуществлялось определение серологических типов методом мультиплексной ПЦР (табл. 1).

Праймеры (Syntol, Россия), специфичные для различных генов S. pneumoniae, синтезированы на основании нуклеотидных последовательностей, приведенных в статье D. Brito и соавт. [11], где также подробно описана методика молекулярного типирования пневмококков, поэтому нами кратко приведена суть технологии. ПЦР-смесь в объеме 25 мкл включала дезоксинуклеотидтрифосфаты («Fermentas», Германия) в конечной концентрации 0,1 ммоль, прямой и обратный праймеры 0,3 pM, сульфат магния (ЦНИИЭ, Россия) 3,5 ммоль, химически-инактивированную TaqF ДНК-полимеразу (ЦНИИЭ, Россия) — 2 ЕД, деионизированную воду в объеме, необходимом для достижения 22,5 мкл. Исследуемый материал в виде бактериальной суспензии в транспортной среде вносился в объеме 2,5 мкл. ПЦР проводилась в амплификаторе Терцик («ДНК-технология», Россия) при следующих условиях: 15 мин при 95 °С, 30 циклов, 10 с при 95 °С, 15 с при 60 °С, 15 с при 72 °С, 5 мин при 72 °С. Детекция результатов ПЦР осуществлялась с помощью электрофореза. 10 мкл ПЦР-продукта вносили в 2% агарозный гель, окрашенный бромистым этидием. В каждую серию ставили маркер молекулярной массы размером 100 пар нуклеотидов (п.н.; «СибЭнзим», Россия). Документирование результатов электрофореза и интерпретация результатов проводилась с использованием системы Gel DocXR («Bio-Rad», США) в программе Quantity One («Bio-Rad», США).

Для статистического анализа полученных результатов использована программа Statistica 6 («StatSoft»).

Результаты и обсуждение

В 7,4% проб выявлены микроорганизмы-контаминанты — Staphylococcus epidermidis, Corynebacterium sp., Streptococcus viridans, что скорее всего связано с нарушением правил сбора материала, и при оценке результатов они не учитывались. На рис. 1

Рисунок 1. Этиология и частота выделения возбудителей при гнойном среднем отите (n=181).
представлена частота выделения пневмококка при гнойном среднем отите.

Из отделяемого полости носа среди этиологически значимых микроорганизмов на первом месте H. influenzae — 32,7%, затем S. pneumoniae — 30,7% и Staphylococcus аureus — 20,3% (рис. 2).

Рисунок 2. Этиология и частота выделения возбудителей при риносинусите (n=153).

Из 62 штаммов S. pneumoniae, протестированных методом мультиплексной ПЦР, серотип определен у 55 штаммов (см. табл. 1). 7 штаммов (11,2%) дали отрицательный результат в ПЦР с праймерами cpsA-f и cpsA-r. Количество нетипируемых штаммов, определяемых молекулярными методами, по данным литературы, варьирует от 0,7 до 15% [6, 9, 11, 15].

Серотиповое разнообразие у детей с риносинуситом представлено в табл. 1 и на рис. 3,

Рисунок 3. Сероварианты S. pneumoniae, выделенные у детей с диагнозом риносинусит (n=42) и при носоглоточном бактерионосительстве (n=15). НТ — нетипируемые штаммы.
где первенство было разделено между серотипами 6A/6B и 3 (в сумме 40,5%). Серотип 14 по одному штамму встречался у бактерионосителей и детей с риносинуситом. При этом к особенностям можно отнести присутствие серотипов 18F; 19F и неделимых совокупностей серотипов — 5, 10А; 9L, 9N, 15B, 15C; 2, 15F, 17F, 22F, 23B; 7F, 19B, 19C, 23A, которые не встречались у бактерионосителей. Наоборот, штамм серотипа 20 выделился только у носителей, хотя лидирующее место, как и у детей с диагнозом риносинусит, занимает третий серотип (26,5%). У детей при носоглоточном бактериносительстве реже выявлены серотипы 23F (13,4%), неделимая совокупность — 8, 9V, 9A, 11F, 11A, 11B, 11C, 11D, 12F, 15A, 33F (13,4%); 20 (6,7%); 19А (6,7%); 14 (6,7%); 6А,6В (6,7%). В России среди носителей у детей в возрасте до 5 лет доминируют серотипы 19, 6, 23, 14, 3, 9, в меньшей степени — 18 и 7 [9, 16].

Серотипы 1, 14, 3, 5 относят к наиболее вирулентным, кроме того, 1 и 5 еще называют эпидемическими серотипами, так как они нередко вызывают вспышки пневмококковых инфекций в развивающихся странах [15]. Предположительно причина повышенной вирулентности пневмококков серотипа 3 связана с более активной продукцией ими капсульного вещества с антикомплементарными свойствами, а следовательно, они надежнее других защищены от фагоцитоза [17]. Другие авторы связывают 4 и 14 серотипы, а также серогруппы 6, 7, 9, 18, 19, 23 с инфекциями у детей [7, 11].

Доля патогенных серотипов пневмококка у детей с инфекцией ЛОР-органов составила 61,7% (р<0,05), а при носоглоточном бактерионосительстве — 60% (р<0,05) (см. табл. 1).

Несомненно, серотиповой спектр S. pneumoniae имеет отличия в зависимости от разных причин: территории, времени проведения исследования, возраста пациентов, клинического материала, из которого выделен пневмококк и, вероятно, от нозологических форм, а также методик, используемых для серотипирования. Даже в пределах одной семьи серотипы S. pneumoniae могут отличаться у ее членов. Это, возможно, связано с возрастом пациентов. Так, у сестер двух и четырех лет из отделяемого полости носа при риносинусите выявлены различные неделимые совокупности серотипов: 8, 9V, 9A, 11F, 11A, 11B, 11C, 11D, 12F, 15A, 33F и 5, 10A.

У 8 детей с риносинуситом, кроме посева отделяемого из полости носа, делался посев со слизистой оболочки глотки, где также выделен пневмококк. В результате у 6 детей серотипы S. pneumoniae, выделенные из глотки и носа, были различны, лишь у одного ребенка они совпали. Интересен тот факт, что еще у одного ребенка с риносинуситом из ротоглотки выделено два штамма пневмококка и один штамм из носа, которые отличались морфологией колоний, зонами подавления роста вокруг диска с оптохином и чувствительностью к различным классам антибиотиков. Один штамм пневмококка со слизистой оболочки глотки совпал по серотипу со штаммом из полости носа — 6A/6B, а второй штамм из глотки относился к третьему серотипу.

При гнойном среднем отите выявлены следующие серотипы: 6A/6B; 19F и неделимые совокупности: 2, 15F, 17F, 22F, 23B и 8, 9V, 9A, 11F, 11A, 11B, 11C, 11D, 12F, 15A, 33F (по 20% соответственно). По данным Р.С. Козлова и соавт. [9], у детей с острым средним отитом с наибольшей частотой выделялся серотип 19 (31%), реже обнаруживались серотипы 3 (10,2%), 14 (7,7%), 15, 23, 4, 6 (по 5,1% соответственно), 8, 9, 20, 22 (по 2,5% соответственно). В целом по России, так же как и в США, при данной патологии превалируют 19, 6, 23, 14, 3 и 18 серотипы [6, 9, 18].

По данным Р.С. Козлова и соавт. [9], при инвазивных инфекциях (менингит, сепсис) к наиболее часто встречаемым серотипам относят 19 (50%) и 23 (14,3%). При инфекциях ЛОР-органов у детей по результатам настоящего исследования доля этих серотипов составила 19%.

В связи с тем, что пневмококковые вакцины являются частью программы плановой иммунизации детей, поддерживаемой многими странами, необходимо проводить иммунизацию с учетом результатов серотипирования S. pneumoniae на конкретных территориях [7, 19, 20]. Так, при сопоставлении серотипов, входящих в состав конъюгированных пневмококковых вакцин, с серотипами S. pneumoniae, выделенными от детей с риносинуситом, выявлено совпадение серотипового спектра на 55,3% с 7-валентной, 63,2% с 10-валентной, 81,6% с 11-валентной и 84,2% с 13-валентной вакциной (табл. 2).

Выводы

1. Частота носоглоточного бактерионосительства S. pneumoniae у детей — 19,5%, при этом выявлено всего семь серотипов, где преобладал третий (26,5%), реже встречались серотипы 23F (13,4%), неделимая совокупность — 8, 9V, 9A, 11F, 11A, 11B, 11C, 11D, 12F, 15A, 33F (13,4%); 20 (6,7%); 19А (6,7%); 14 (6,7%); 6А,6В (6,7%).

2. У детей с риносинуситом частота выделения пневмококка — 30,7%, среди них выявлено двенадцать серотипов, где превалировали 6A/6B и 3 (40,5%).

3. Сероварианты S. pneumoniae, выделенные при риносинусите, совпадают с серотипами, входящими в состав конъюгированных пневмококковых вакцин: с 7-валентной — на 55,3%, 10-валентной — на 63,2%, 11-валентной — на 81,6%, 13-валентной — на 84,2%.

Подтверждение e-mail

На test@yandex.ru отправлено письмо с ссылкой для подтверждения e-mail. Перейдите по ссылке из письма, чтобы завершить регистрацию на сайте.

Подтверждение e-mail