Изменение биохимических и химико-токсикологических показателей перикардиальной жидкости при смертельных отравлениях наркотиками

Статистические данные по наркомании в Алматинском регионе Республики Казахстан характеризуются прогрессирующим количеством летальных исходов от отравления наркотиками, преимущественно лиц мужского пола в молодом возрасте [1, 2]. Это связано как с увеличением заболеваемости наркоманией [3], так и внутриполостной транспортировкой при наркотрафике [4]. Так, согласно данным годовых отчетов Алматинского филиала РГКП «Центр судебной медицины» Минздрава Республики Казахстан, смертность от отравления наркотическими веществами за последние 5 лет возросла с 4,5 до 9,8% от общего количества вскрытий [5]. Для совершенствования судебно-медицинской экспертизы отравления наркотиками необходим комплексный подход с изучением не только морфологических изменений органов (тканей), но и химико-токсикологических и биохимических показателей биологических жидкостей [6]. На сегодняшний день неисследованными являются биохимические и химико-токсикологические изменения перикардиальной жидкости (ПЖ) при смерти от отравления наркотическими веществами [7]. В связи с этим данное исследование является актуальным и поможет в разработке критериев судебно-медицинской диагностики смертельных отравлений наркотическими веществами.

Цель исследования - биохимическое и химико-токсикологическое изучение ПЖ для совершенствования судебно-медицинской диагностики смерти от отравления наркотиками.

В соответствии с поставленной целью определены следующие задачи.

1. Установить наличие и определить вид наркотического вещества в ПЖ методом тонкослойной хроматографии у лиц, умерших от отравления наркотическими веществами.

2. Изучить изменения некоторых биохимических показателей ПЖ у лиц, умерших от отравления наркотическими веществами.

3. Разработать критерии судебно-медицинской диагностики смертельных отравлений наркотическими веществами по биохимическим и химико-токсикологическим показателям в ПЖ.

Исследовали ПЖ и кровь, изъятые при судебно-медицинской экспертизе 247 трупов (87,04% мужчин и 12,96% женщин), умерших в возрасте от 13 до 35 лет. Выделили две группы: «отравление» - 142 умерших от отравления наркотиками и «контроль» - 105 умерших от других причин.

Вскрытие трупов проводили по методу Шора. В обеих группах для сравнительного исследования брали кровь (КР) и ПЖ одноразовыми стерильными шприцами вместимостью 5-10 мл или в стерильные пластиковые пробирки с герметичной крышкой. Объекты в течение 1 ч отправляли в лабораторию для химико-токсикологических и биохимических исследований.

Для обнаружения наркотических веществ и установления их вида использовали химико-токсикологический метод тонкослойной хроматографии: 10 мл ПЖ подкисляли 10% раствором щавелевой кислоты до pH 2,0, перемешивали и извлекали хлороформом по 5×10×10 мл сначала из кислого раствора, затем из щелочного. Подщелачивание проводили 25% раствором аммиака до pH 9,0-10,0 по УИ. Затем 1/10 часть кислого хлороформного извлечения, полученного из объекта, после предварительного упаривания током теплого воздуха до 0,5 мл, наносили в ряд точек на две хроматографические пластинки с закрепленным слоем силикагеля КСК, забуференного 0,1 н. раствором борной кислоты. Рядом на те же пластинки наносили спиртовые 0,05% растворы свидетелей фенобарбитала и этаминал-натрия. Пластинки хроматографировали в двух системах: хлороформ - н-бутанол - 25% раствор аммиака (70:40:5) и ацетон-хлороформ (1:9). После высушивания обе пластинки последовательно опрыскивали 0,02% раствором дифенилкарбазона в хлороформе и 2% раствором сульфата ртути в 8% растворе серной кислоты. В зонах исследуемых проб красно-фиолетовых пятен не наблюдали. У свидетелей отмечали красно-фиолетовые пятна: с Rf 0,44 у фенобарбитала и с Rf 0,93 у этаминал-натрия (1-я пластинка) и с Rf 21 у фенобарбитала, и с Rf 0,38 у этаминал-натрия (2-я пластинка). После этого 1 мл щелочного хлороформного извлечения из объекта наносили в ряды точек на предметном стекле, хлороформ испаряли, сухие остатки растворяли в капле 0,01 н. раствора соляной кислоты. В 1-й ряд точек добавляли по капле раствора йодида висмута в йодиде калия (реактив Драгендорфа); во 2-й - по капле раствора йода в йодиде калия и наблюдали помутнение капель в извлечении ПЖ. Далее 1/10 часть щелочного хлороформного извлечения из ПЖ после предварительного упаривания током теплого воздуха до 0,5 мл наносили в ряд точек на две хроматографические пластинки с закрепленным слоем силикагеля КСК, забуференного 0,1 н. раствором едкого натра, и на пластинку Sorbfil.

На 1-й пластинке рядом с пробами в качестве свидетелей наносили 0,05% хлороформные растворы морфина, кодеина, димедрола и героина. Пластинку хроматографировали в системе толуол-ацетон-этанол - 25% раствор аммиака (45:45:7:3), после высушивания опрыскивали реактивом Драгендорфа (приготовлен по прописи ГФ Х издания) и наблюдали оранжевые пятна во всех извлечениях с Rf 0,24. Отмечали также аналогичного цвета пятна у свидетелей морфина с Rf 0,26, кодеина с Rf 0,32, димедрола с Rf 0,75 и героина с Rf 0,60. На 2-й пластинке в качестве свидетелей использовали 0,05% хлороформные растворы морфина и димедрола. Пластинку хроматографировали в системе этилацетат-этанол- 25% раствор аммиака (85:10:5), после высушивания обрабатывали реактивом Марки (формалинсерная кислота) и наблюдали фиолетовое окрашивание пятен с Rf 0,33 в извлечении ПЖ. У свидетелей выявили красно-фиолетовое окрашивание пятен у морфина с Rf 0,33 и лимонно-желтое у димедрола с Rf 0,85.

На пластинке «Sorbfil» в качестве свидетелей использовали спиртовые 0,01% растворы эфедрина и эфедрона. Пластинку хроматографировали в системе бензол-этанол-диэтиламид (9:1:1). После высушивания пластинку опрыскивали свежеприготовленным 0,5% раствором нингидрина в ацетоне с последующим нагреванием при температуре 80 °C 5 мин. Сине-фиолетовых пятен в пробах не наблюдали, зафиксировали только сине-фиолетовые пятна эфедрина с Rf 0,45 и эфедрона с Rf 0,74.

Для определения содержания ферментов АсТ, АлТ, КФК использовали колориметрический метод. Сравнивали количество ферментов в ПЖ с нормальными показателями ферментов в крови.

По результатам тонкослойной хроматографии в группе «контроль» не обнаружили наркотических веществ или следов их метаболитов. В группе «отравление» в образцах ПЖ и крови от 142 трупов зафиксировали положительный результат: морфин обнаружили у 119 (83,81%), морфин+этиловый спирт - у 11 (7,75%), морфин+димедрол  - у 4 (2,82%), морфин+кодеин - у 1 (0,70%), морфин+фенобарбитал - у 1 (0,70%), димедрол+кодеин - у 1 (0,70%), димедрол - у 4 (2,82%), кодеин - у 1 (0,70%). По результатам химико-токсикологических исследований выявили преобладание случаев смертельных отравлений морфином (83,81%), а также комбинированные отравления наркотиками с алкоголем или лекарственными препаратами.

Достоверно установлены изменения показателей биохимического состава ПЖ и крови при смертельном отравлении наркотическими веществами, в частности таких ферментов, как АсТ, АлТ и КФК. В группе «контроль» показатели количества ферментов не превышали норму (табл. 1)

В группе «отравление» выявили значительное содержание ферментов АсТ, АлТ и КФК в ПЖ и крови по сравнению с нормой в крови (табл. 2).

Как видно из данных табл. 2, в группе «отравление» в ПЖ и крови выявили трехкратное увеличение количества ферментов: АсТ - в 3,61 раза, АлТ - 3,32 раза и КФК - 3,15 раза, тогда как в группе «контроль» показатели оставались в пределах нормы. Достоверность различий показателей в группах составила р≥0,01.

Содержание фермента КФК у мужчин и женщин в обеих группах не исследовали, так как подавляющее большинство составляли мужчины (87,04%), что не позволило объективно оценить полученные результаты.

1. Методом тонкослойной хроматографии в группе умерших от отравления наркотическими веществами «отравление» в ПЖ обнаружили и установили виды отдельных наркотических веществ и в комбинации с алкоголем и лекарственными препаратами. Преобладали случаи смертельного отравления морфином (83,81%). В группе «контроль» наркотических веществ не обнаружили. Следовательно, достоверность различий в исследуемой и контрольной группах составляет р≥0,01.

2. В группе «отравление» в ПЖ и крови выявлены трехкратное увеличение количества ферментов АсТ (180,5±4,5), АлТ (132,5±2,4) и КФК (598,5±12,3) относительно нормальных показателей в крови, при этом показатели в ПЖ были несколько выше, чем в крови. В группе «контроль» изменений биохимических показателей ферментов не выявили, что свидетельствует о достоверности различий (р≥0,01).

3. Таким образом, обнаружение наркотиков и трехкратное увеличение содержания ферментов АсТ, АлТ и КФК в ПЖ можно считать достоверными критериями диагностики смерти от отравления наркотическими веществами. Следовательно, при судебно-медицинской экспертизе смертельных отравлений наркотическими веществами необходимо использовать ПЖ в качестве объекта экспертизы как для химико-токсикологических, так и для биохимических исследований.