Введение

Съемные протезы в настоящее время широко используются в ортопедической стоматологии для лечения адентии [1, 2]. Одним из ключевых моментов с точки зрения развития различных осложнений и побочных эффектов у таких пациентов является возможное формирование дисбиотических изменений слизистой оболочки полости рта [3—5]. При дентальной имплантации и использовании различных элементов фиксации съемных протезов может происходить частичное нарушение клиренса слизистой оболочки полости рта, не проявляющегося при нормальном физиологическом строении зубочелюстной системы [6]. С другой стороны, использование некачественных средств для очищения зубных протезов может привести к нарушению структуры последних [7]. Например, в случае использования веществ, содержащих абразивные компоненты, которые могут нанести механические повреждения поверхности зубного протеза [8]. В этом случае, благодаря широкому распространению бактерий на слизистой оболочке полости рта, имеются факторы риска формирования микробных биопленок на зубном протезе и формирования воспалительных процессов различной локализации, что, возможно, негативно повлияет на длительность применения пациентами съемных ортопедических конструкций [9—12].

В работе проводилось исследование микробного состава эпителия слизистой оболочки полости рта и изучение влияния средства для очищения зубных протезов на потенциально клинически значимую микрофлору, выделенную у пациентов, использующих съемные протезы. Отдельное внимание уделялось условно-патогенным микроорганизмам, имеющим клиническое значение в случае выделения их со слизистой оболочки полости рта, и микроорганизмам, входящим в различные пародонтопатогенные комплексы, колонизирующие ротовую полость, которые могут принимать участие в развитии периимплантитов.

Цель исследования — провести оценку видового разнообразия микроорганизмов, выделенных с эпителия слизистой оболочки полости рта у пациентов со съемными ортопедическими конструкциями с опорой на дентальные имплантаты.

Материал и методы

Ортопедическое лечение пациентов проводили на кафедре ортопедической стоматологии ФГБОУ ВО «СамГМУ» Минздрава России. Основную группу клинического исследования составил 21 пациент, лечение которых проводилось с использованием предложенных нами съемных ортопедических конструкций с опорой на дентальные имплантаты (патент на изобретение №2708828). В контрольную группу вошли 15 пациентов, проходящих ортопедическое лечение традиционными методами протезирования с опорой на дентальные имплантаты. В исследовании проводилось ортопедическое лечение 36 пациентов, среди них 24 женщины и 12 мужчин, в возрасте 55—65 лет.

Оценку видового разнообразия микроорганизмов, выделенных с эпителия слизистой оболочки полости рта пациентов основной и контрольной групп, проводили через шесть месяцев после ортопедического лечения. Сбор материала для микробиологического исследования проводили стерильными ватными тампонами со слизистой оболочки полости рта. Материал транспортировали в изотермических условиях в течение двух часов в жидкой транспортной среде Эймса (Cliniswab, Италия) для сохранения витальных свойств микроорганизмов. После доставки в лабораторию полученный материал засеивали на плотные питательные среды: кровяной агар с бараньей кровью (HiMedia, Индия), универсальную хромогенную среду (HiMedia, Индия), селективную среду для выделения вейлонелл (HiMedia, Индия), селективную среду для выделения облигатных анаэробов (HiMedia, Индия), селективную среду для выделения клостридий (HiMedia, Индия), селективную среду для выявления бифидо- и лактобактерий (HiMedia, Индия). Посевы культивировали в течение 5 дней при температуре 37 °C с созданием аэробных и анаэробных условий. Анаэробные условия создавали с использованием газогенерирующих пакетов «Анаэрогаз» (Инко, Россия).

Идентификация всех выделенных микроорганизмов выполнялась с использованием времяпролетной MALDI-ToF масс-спектрометрии на приборе Microflex LT (Bruker, Германия). Дополнительно в отношении бактерий, имеющих потенциальное или доказанное клиническое значение в качестве возбудителей инфекций слизистой оболочки полости рта, определяли эффективность исследуемого раствора очищающих таблеток для зубных протезов Корега Биоформула (Глаксосмиткляйн Хелскер, Великобритания), а также его двукратного и четырехкратного разведений. Для этого готовили инокулюм выделенных микроорганизмов методом прямого суспендирования колоний в стерильном изотоническом растворе до плотности 0,5 по стандарту мутности МакФарланда, что приблизительно соответствовало нагрузке 1—2´10⁸ КОЕ/мл. После этого проводилось приготовление исследуемого раствора очищающих таблеток для съемных зубных протезов Корега Биоформула согласно инструкции по применению препарата и его двукратные и четырехкратные разведения с использованием метода серийных микроразведений в бульоне Мюллера—Хинтона. Исследуемый раствор разводили в 2 раза и в 4 раза, используя 96-луночные микропланшеты с последующим инкубированием в них бактерий в течение суток при температуре 37 °C. Процедуры приготовления инокулюма и процедур двойных серийных разведений готовили в соответствии с рекомендациями ГОСТ Р ИСО 20776-1—2010. В качестве контрольного штамма использовался штамм S. aureus ATCC 25923 и S. pneumoniae ATCC 49619. Результаты оценивали по наличию или отсутствию роста микроорганизмов в проходящем свете в каждой лунке.

При оценке клинического значения микроорганизмов использовали классификацию пародонтопатогенов по комплексам:

— «красный» комплекс включает Porphyromonas gingivalis, Treponema denticola и Tannerella forsythia (ранее Bacteroides forsythus) [13].

— «оранжевый» комплекс состоит из Campylobacter spp., Fusobacterium nucleatum, Prevotella intermedia/nigrescens, Peptostreptococcus micros, Eubacterium nodatum, S. constellatus [14].

— «зеленый» комплекс состоит из Aggregatibacter actinomycetemcomitans serotype A, Campylobacter concisus и Eikenella corrodens, Capnocytophaga spp. [15].

— «желтый» комплекс: S. sanguis, S. mitis, S. intermedius, S. gordonii. «пурпурный» комплекс: Veillonella parvula, Actinomyces odontolyticus; A. actinomycetemcomitans serotype B, Selenomonus noxia, Actinomyces naeslundii [16].

Для статистической оценки распространенности видов и родов микроорганизмов, выделенных с эпителия слизистой оболочки полости рта участников исследования в контрольной и основной группах, вычисляли критерий χ² и уровень значимости для точного критерия Фишера (p), используемые при анализе сопряженности таблиц. Связь между признаками расценивали как статистически значимую при p<0,05.

Видовое разнообразие микроорганизмов, выделенных с эпителия слизистой оболочки полости рта у пациентов основной и контрольной групп

Примечание. * — различия статистически достоверны.

Результаты

Способ изготовления перекрывающих, каркасных протезов с опорой на зубы и дентальные имплантаты использовали для ортопедического лечения 21 пациента основной группы. При изготовлении перекрывающих, каркасных протезов с опорой на дентальные имплантаты получали оттиски. По оттиску изготавливали аналог замкового крепления с помощью беззольной пластмассы. На аналоге дентального имплантата проводили моделирование ответной части замкового крепления, телескопической системы фиксации, располагали их в металлическом бункере, который за счет ретенционных пунктов на своей поверхности обеспечивал надежную фиксацию в базисе протеза из термопластической массы. Термопластическая масса базиса перекрывающего протеза соединялась с металлическим бункером, каркасом, посредством ретенционных пунктов. Форма и размеры бункера позволяли расположить в нем замковую и телескопическую систему фиксации, не превышая размеры базиса перекрывающего протеза.

Всего за весь период исследования было выделено 179 штаммов различных микроорганизмов с поверхности эпителия слизистой оболочки полости рта. В основной группе всего было выделено 72 штамма (40,2% от общего количества), при расчете видового разнообразия микроорганизмов в среднем было выделено и идентифицировано по 7,2 штамма с поверхности эпителия от одного пациента. В контрольной группе было выделено 107 штаммов (59,8% от общего количества) бактерий, в среднем количество микроорганизмов, выделенных и идентифицированных с эпителия слизистой оболочки полости рта у одного пациента составило 10,7 штаммов. В основной группе среди условно-патогенных микроорганизмов полости рта, возможных участников развития инфекционного процесса, в большей степени были выделены следующие виды микроорганизмов, среди которых оказались доминирующими штаммы: Staphylococcus aureus (4 штамма), Candida albicans (5 штаммов) и Candida glabrata (2 штамма), также был получен рост Streptococcus anginosus (1 штамм). Дополнительно были выделены бактерии, которые относятся к «желтому» пародонтопатогенному комплексу, который в совокупности с «пурпурным» комплексом действует в качестве протективного агента, однако не стоит исключать их роль в качестве возможного участника патологического процесса. Среди этого комплекса были выделены: Streptococcus gordonii (2 штамма), Streptococcus mitis (4 штама), Streptococcus sanguinis (4 штамма), Streptococcus intermedius (1 штамм). Остальные 49 штаммов, идентифицированных в образцах клинического материала в этой группе пациентов, относятся к родам Streptococcus, Staphylococcus, Lactobacillus, Rothia, Neisseria, Actinomyces, Gemella, являющимся представителями нормальной микрофлоры слизистой оболочки полости рта. В данной исследуемой группе только у одного пациента не было выделено патогенных микроорганизмов, в отличие от контрольной группы, в которой наличие пациентов с нормальной микрофлорой полости рта без потенциально клинически значимой не наблюдалось. В контрольной группе среди условно-патогенных микроорганизмов превалировали бактерии, относящиеся к роду Streptococcus, в котором чаще всего выделялся Streptococcus anginosus (8 штаммов) и Streptococcus pneumoniae (1 штамм). Также были выделены Staphylococcus aureus (1 штамм), Candida albicans (4 штамма) и Candida tropicalis (1 штамм). При этом стоит отметить увеличение видового разнообразия представителей пародонтопатогенного комплекса: в исследуемой группе был получен рост микроорганизмов из 3 комплексов. Из «желтого» комплекса были выделены Streptococcus mitis (7 штаммов) и Streptococcus sanguinis (2 штамма), из «пурпурного» комплекса — Veilonella parvula (2 штамма) и из «оранжевого» комплекса — Streptococcus constellatus (6 штаммов).

Таким образом, стоит отметить, что в контрольной группе наблюдались явные дисбиотические изменения состава микрофлоры, выделенной с эпителия слизистой оболочки полости рта в сравнении с основной группой, исходя из наличия большего количества условно-патогенных бактерий и видов, относящихся к пародонтопатогенам. Для двух представителей рода Streptococcus были получены статистически достоверные различия по частоте встречаемости с преобладанием этих микроорганизмов в контрольной группе. Один из видов — Streptococcus constellatus — входит в состав «оранжевого» пародонтопатогенного комплекса. Оба вида выделенных стрептококков имеют достаточно выраженный патогенный потенциал и описаны как возбудители раневых инфекций, в том числе и возможной причины периимплантитов, что следует учитывать при проведении профилактических мероприятий, а также обосновывает с микробиологической точки зрения разработку и использование новых механизмов крепления съемных протезов.

Дополнительно в соответствии с задачами исследования проводилась оценка эффективности исследуемого раствора таблеток для очищения зубных протезов Корега Биоформула в отношении выделенных штаммов микроорганизмов от пациентов основной и контрольной групп. В результате оценки и определения чувствительности микроорганизмов к исследуемому раствору таблеток для очищения зубных протезов Корега Биоформула оказалось, что раствор был эффективным в отношении всех исследуемых штаммов бактерий. При двукратном разведении раствор Кореги оказался менее эффективным, что подтверждалось ростом нескольких видов микроорганизмов, а именно 2 штамма грибов рода Candida и по 1 штамму Streptococcus anginosus и Streptococcus intermedius, входящих в группу пародонтопатогенов. Рабочий раствор, разведенный в 4 раза, показал еще менее эффективный результат в отношении исследуемых патогенов, в особенности к штаммам дрожжеподобных грибов рода Candida (4 штамма). Дополнительно исследуемая концентрация показала наименьшую эффективность против условно-патогенных бактерий из рода Streptococcus (3 штамма), Staphylococcus (6 штаммов).

Таким образом, использование способа изготовления перекрывающих, каркасных протезов с опорой на зубы и дентальные имплантаты оказалось достоверно в отношении условно-патогенных микроорганизмов Streptococcus anginosus и представителей оранжевого пародонтопатогенного комплекса Streptococcus constellatus.

Полученные результаты оценки эффективности средства для очищения зубных протезов Корега Биоформула показывают важность правильного приготовления и использования исследуемого раствора в соответствии с рекомендациями производителя, что снижает риски сохранения на поверхности протеза микроорганизмов, имеющих потенциальное клиническое значение в развитии периимплантитов. Использование рабочего раствора таблеток Корега Биоформула для обработки протезов, приготовленного в соответствии с рекомендациями производителя, оказалось абсолютно эффективным в отношении всех потенциально патогенных микроорганизмов как в основной, так и в контрольной группах.

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

The authors declare no conflicts of interest.