Результатами многочисленных многолетних исследований отечественных и зарубежных авторов доказано, что ведущим этиологическим фактором развития периимплантита (ПИТ) являются пародонтопатогенные бактерии, аналогичные микроорганизмам, ответственным за развитие и течение воспалительных заболеваний пародонта [1-7].

Поэтому методы определения состава микрофлоры в очагах поражения находятся в центре внимания не только исследователей, но и практиков, которые, опираясь на результаты микробиологического исследования, выбирают оптимальные методы лечения. На сегодня во всем мире метод определения качественного и количественного состава микрофлоры на основе полимеразной цепной реакции (ПЦР) признан оптимальным [1, 8, 9].

Однако каждая из предлагаемых методик имеет как недостатки, так и преимущества. Так, при проведении ПЦР-диагностики удается обнаружить ДНК микроорганизмов, однако этот метод дает лишь ответ на вопрос о наличии конкретного вида патогена с учетом праймеров, заложенных в диагностический набор, причем выявленный микроорганизм необязательно должен быть живым.

С помощью масс-спектрометрии можно четко установить видовую принадлежность всех жизнеспособных и культивируемых бактериальных форм [1, 8-10], причем и тех, на которые не были заложены праймеры в ПЦР. Однако при заборе и транспортировке образцов бактериальных культур сложно сохранить их жизнеспособность.

В итоге сочетание ПЦР-диагностики и масс-спектрометрии может дать максимум информации, важной для клинициста. Сравнение информативности этих методов микробиологического исследования, на наш взгляд, может позволить выбрать метод, наиболее объективный для получения максимально достоверной информации, или их сочетание и, как следствие, - выбрать эффективный способ антибактериального воздействия.

Обследованы 14 пациентов: 8 женщин и 6 мужчин в возрасте от 55 до 70 лет с ПИТ. В том числе 5 человек с полным отсутствием зубов и 9 - с частичным. Исследовано 16 имплантатов с признаками воспаления: 6 - во фронтальном отделе, 10 - в боковом.

Пациенты с ПИТ в основном жаловались на боль при жевании в области имплантата, подвижность одиночных имплантатов и связанное с этим затруднение жевательной функции. При осмотре отмечались кровоточивость и отечность десны, подвижность имплантатов I-II степени (по шкале Miller в модификации Fleszar, 1980), убыль кости от 2 до 5 мм, подтвержденная данными рентгенографии.

При рентгенологическом обследовании наблюдались снижение горизонтального уровня края костной лунки и наличие вертикального дефекта костной ткани на границе раздела имплантат/кость, четко определялся также «чашеобразный» дефект в области имплантата.

Микробно-патологический материал из областей с ПИТ забирали с помощью стерильных бумажных штифтов, помещали в пробирки с жидкой питательной средой Brain Heart Infusion Broth. Пробирки маркировали в течение 2 мин. Помещенный в анаэростат материал транспортировали в лабораторию. Образцы вносили на питательную среду и затем идентифицировали микроорганизмы (рисунок, см. на цв. вклейке).

Масс-спектрометрия - высокоточная методика, позволяющая установить видовую принадлежность всех жизнеспособных и культивируемых бактериальных форм, в связи с этим она рекомендована для получения более широкого представления о характере микробного содержимого карманов вокруг имплантатов после получения клонированных колоний бактериальных культур в соответствии со сроками и условиями культивирования.

ПЦР дает возможность получить множество копий специфического фрагмента ДНК в пробирке (in vitro). ПЦР-тестирование клинического материала проводки в режиме реального времени с использованием набора праймеров фирмы «Литех» к 6 пародонтопатогенам: Prevotella intermedia, Treponema denticola, Aggregatibacted actinomycetemcomitans (Actinobacillus actinomycetemcomitans), Porphyromonas gingivalis, Porphyromonas endodontalis, Fusobacterium nucleatum.

Исследование выявило высокую распространенность облигатных пародонтопатогенов в карманах вокруг имплантатов при ПИТ.

ПЦР-диагностика определила наличие А.а. в 3 1% исследуемых карманов, P.g. в 50%, P.i. в 25%. F.n. в 31%, Р.е. в 19%. Treponema denticola не выявлен ни в одном из образцов при ПЦР-тестировании.

У пациентов, имеющих зубы, наиболее часто встречались P.g. и P.i., а при полном отсутствии зубов - P.g. и F.n.

Масс-спектрометрия выявила наличие патогенов, на которые не закладывали праймеры в ПЦР и которые участвуют в воспалительных процессах других органов и систем: Staph.aureus spp., Staph.epidermidis, Esherichia coli, Enteroc.faecalis, Klebsiella pneumoniae, Propionibacterium acnes, Micrococcus luteus (см. примечание к таблице).

Результаты исследования приведены в таблице.

Особенности микрофлоры при ПИТ были определены путем параллельного проведения ПЦР-диагностики и масс-спектрометрии.

ПЦР-диагностика с целью обнаружения пародонтопатогенов не дает полной картины микробного пейзажа. Применение масс-спектрометрии для установления доминирующих патогенов в воспалительном очаге не всегда позволяет выявить представителей облигатных пародонтопатогенов из-за сложности полной анаэробизации исследуемых объектов, однако могут быть обнаружены патогены, на которые не закладывали праймеры при ПЦР-тестировании. Идентификация патогенов воспалительных очагов при ПИТ методом масс-спектрометрии дает возможность определить характер развития патологии и индивидуализировать тактику медикаментозного лечения.

В ходе дальнейших исследований нам предстоит оптимизировать методику идентификации микробного содержимого патологических очагов, используя плотные среды, совершенствуя протокол забора и транспортировки объектов микробиологического исследования.

Представляется интересным изучить роль нехарактерных для ПИТ патогенов, выявленных методом масс-спектрометрии, в развитии воспалительных заболеваний тканей, окружающих дентальный имплантат. чтобы обеспечить направленное воздействие на микрофлору лечебными и профилактическими антимикробными средствами.