Сайт издательства «Медиа Сфера»
содержит материалы, предназначенные исключительно для работников здравоохранения. Закрывая это сообщение, Вы подтверждаете, что являетесь дипломированным медицинским работником или студентом медицинского образовательного учреждения.

Линде В.А.

Ростовский НИИ акушерства и педиатрии

Томай Л.Р.

ФГБУ «Ростовский научно-исследовательский институт акушерства и педиатрии» Минздрава России, Ростов-на-Дону, Россия

Ермолова Н.В.

ФГБУ «Ростовский научно-исследовательский институт акушерства и педиатрии» Минздрава России, Ростов-на-Дону, Россия

Гунько В.О.

Ростовский НИИ акушерства и педиатрии

Погорелова Т.Н.

Ростовский НИИ акушерства и педиатрии

Белки-маркеры наружного генитального эндометриоза

Авторы:

Линде В.А., Томай Л.Р., Ермолова Н.В., Гунько В.О., Погорелова Т.Н.

Подробнее об авторах

Журнал: Российский вестник акушера-гинеколога. 2016;16(4): 32‑35

Просмотров: 296

Загрузок: 3

Как цитировать:

Линде В.А., Томай Л.Р., Ермолова Н.В., Гунько В.О., Погорелова Т.Н. Белки-маркеры наружного генитального эндометриоза. Российский вестник акушера-гинеколога. 2016;16(4):32‑35.
Linde VA, Tomai LR, Ermolova NV, Gun'ko VO, Pogorelova TN. Protein markers for external genital endometriosis. Russian Bulletin of Obstetrician-Gynecologist. 2016;16(4):32‑35. (In Russ.).
https://doi.org/10.17116/rosakush201616432-35

?>

В настоящее время эндометриоз обоснованно признан самым распространенным и тяжелым заболеванием женщин репродуктивного возраста, отрицательно влияющим на общее состояние, работоспособность и качество жизни больных [1-3]. Сложность и многофакторность заболевания, недостаточная изученность его патогенеза обусловливают отсутствие единого подхода к ранней диагностике и лечению эндометриоза [4-6]. В связи с этим необходимость поиска новых информативных биомаркеров для неинвазивной диагностики эндометриоза стала приоритетным направлением исследований в этой области.

Существенный прогресс в поиске специфических маркеров патологических процессов стал возможен благодаря разработке и внедрению в биомедицинские исследования протеомных технологий [7]. Протеомика позволяет оценить совокупность белков исследуемого объекта (протеом) и своевременно выявить изменения в их экспрессии. Основной задачей протеомного анализа является идентификация определенных белков или их комбинаций, которые присутствуют или отсутствуют в протеоме изучаемого объекта [8]. Протеомный анализ может дать ценную информацию о молекулярных механизмах формирования и развития эндометриоза, что позволит выдвигать аргументированные предположения о значении конкретных белков в качестве маркеров данного заболевания [9, 10].

Цель исследования - выявление специфических маркеров диагностики наружного генитального эндометриоза (НГЭ) на основании протеомного анализа.

Материал и методы

В проспективное исследование были включены 88 пациенток репродуктивного возраста (средний возраст 29,3±0,3 года), которые были разделены на три клинические группы: 1-ю группу составили 28 больных с I-II стадиями НГЭ, 2-ю группу - 30 пациенток с III-IV стадиями заболевания, 3-ю (контрольную) группу - 30 пациенток без эндометриоза, которым проводили обследование по поводу бесплодия или стерилизацию.

Лапароскопия и гистероскопия проводились по общепринятым методикам с использованием необходимого оборудования. Оценка степени распространения НГЭ осуществлялась согласно классификации r-AFS (1996). Критерии включения пациенток в исследование: репродуктивный возраст, наличие жалоб на бесплодие и/или болевой синдром, проведение у больной эндоскопической операции (лапаро- и гистероскопия), подтверждающей НГЭ с последующей морфологической верификацией диагноза. Критериями исключения из исследования являлись возраст пациенток старше 45 лет, злокачественные новообразования. По возрасту, особенностям репродуктивной системы, соматическому и гинекологическому анамнезу пациентки основной и контрольной групп были сопоставимы.

Материалом для исследования служила перитонеальная жидкость (ПЖ), забор которой осуществляли в процессе проведения лапароскопических операций, и сыворотка крови, полученная во время дооперационного обследования.

Все клинические исследования проводились с информированного согласия больных и протоколировались по стандартам этического комитета РФ.

Протеомный анализ осуществляли с помощью высокоразрешающего двухмерного электрофореза с последующим окрашиванием белков нитратом серебра [11]. Электрофореграммы сканировали и анализировали с использованием пакета программ. Идентификацию белков, экспрессия которых значительно изменялась (белки отличия), после их трипсинолиза проводили методом MALDI-TOF-масс-спектрометрии на времяпролетном масс-спектрометре с использованием опции Peptide Fingerprint программы MascotMSSearch и баз данных NCBI и Swiss-Prot. Результаты идентификации белков принимались как достоверные при уровне значимости не менее 95% и показателе сиквенс​*​-покрытия не менее 60%.

Содержание глобулина, связывающего половые гормоны (ГСПГ), аполипопротеина A-IV, компонентов системы комплемента С3 и С4-b в ПЖ и сыворотке крови определяли методом иммуноферментного анализа (ИФА), используя специальные наборы.

Для оценки степени достоверности различий между сравниваемыми группами использовали критерии Манна-Уитни и Краскела-Уоллеса (программа Statistica, версия 10.0. фирмы «StatSoft. Inc.»). Результаты оценивали как статистически значимые при p<0,05.

Результаты и обсуждение

Учитывая особую роль в формировании и развитии эндометриоза процессов, происходящих на локальном уровне [12], на первом этапе исследования проводили протеомный анализ ПЖ пациенток с наиболее выраженным (III-IV стадии) НГЭ и пациенток контрольной группы.

В протеомном спектре ПЖ при эндометриозе установлено появление 4 белков: аполипопротеина А-IV, ГСПГ, компонентов С3 и С4b. Кроме того, выявлено отсутствие при рассматриваемой патологии фактора дифференцировки пигментного эпителия, транстиретина, гаптоглобина, α1-антитрипсина и ингибитора апоптоза 6.

Наибольший интерес представляют белки отличия, которые появились в протеомном профиле ПЖ при эндометриозе, поскольку именно повышенный уровень определяемого белка наиболее часто является критерием развития того или иного патологического процесса.

На втором этапе исследования определяли количественные показатели Апо-АIV, ГСПГ, С3 и С4-b в ПЖ и в сыворотке крови методом ИФА для оценки их диагностической значимости.

В ПЖ установлено повышение уровня Апо-АIV на 28% при I-II стадиях НГЭ (р=0,002) и на 24% - при III-IV стадиях (р=0,031) по сравнению с соответствующими показателями в контрольной группе (табл. 1). На системном уровне сохранялась сходная динамика содержания указанного белка. Так, cодержание Апо-АIV в сыворотке крови при I-II и III-IV стадиях НГЭ было увеличено на 15% (р=0,033) и 12% (р=0,014) соответственно по сравнению с аналогичными величинами в контрольной группе (табл. 2).

Таблица 1. Содержание белков отличия и клеточных регуляторов в перитонеальной жидкости пациенток контрольной и основной групп, Me [q1-q3] Примечание. Здесь и в табл. 2: значения достоверности различия: р1 - между показателями контрольной и 1-й групп; р2 - между показателями контрольной и 2-й групп.

Таблица 2. Содержание белков отличия и клеточных регуляторов в сыворотке крови пациенток контрольной и основной групп, Me [q1-q3]

Повышение экспрессии этого белка, по-видимому, приводит к увеличению уровня липопротеинов высокой плотности (ЛПВП) при эндометриозе [13]. Апо-АIV является основным структурным компонентом ЛПВП, обладающих противовоспалительными свойствами [14, 15]. Аполипопротеин A-IV оказывает антиоксидантное действие за счет ингибирования перекисного окисления липидов [16], сопровождающее развитие данной патологии. Помимо указанных функций, данный белок снижает редокс​*​-зависимый апоптоз иммунокомпетентных клеток [17]. Этот механизм, вероятно, является компенсаторной реакцией, направленной на сохранение иммунологической защиты брюшины малого таза.

Аналогичная направленность изменений характерна и для ГСПГ, содержание которого в ПЖ повышено на 29% (р=0,031) и 41% (р=0,031) соответственно при I-II и III-IV стадиях эндометриоза (см. табл. 1).

Повышение продукции ГСПГ, регулирующего биологическую активность стероидных гормонов, может приводить к нарушению баланса между свободными и связанными эстрогенами и защищает эстрогены от катаболизма, повышая их доступность для эндометриальных клеток [18]. В результате этого создаются условия для локальной гиперэстрогении и становится возможным увеличение пролиферативного потенциала клеток эндометриоидных гетеротопий [1].

Сывороточный уровень ГСПГ относительно показателя в контрольной группе также повышается при прогрессировании заболевания: на 74% при I-II стадиях (р=0,01) и на 52% при III-IV стадиях (p=0,036) (см. табл. 2).

В ПЖ при III-IV стадиях эндометриоза отмечается повышение содержания С3 на 74% (р=0,001) по сравнению с показателем в контрольной группе, в то время как его уровень при I-II стадиях НГЭ достоверно не изменялся (см. табл. 1). Очевидно, повышение продукции перитонеальными макрофагами этого белка, участвующего в воспалительной реакции, обезвреживании апоптозных клеток и иммунных комплексов, вносит вклад в механизмы развития эндометриоза и связанного с ним бесплодия [19, 20].

Уровень компонента С3 при III-IV стадиях эндометриоза в сыворотке крови возрастает на 23% (p=0,018) по сравнению с показателями в контрольной группе (см. табл. 2). Следует отметить, что при ранних стадиях заболевания была выявлена тенденция к повышению уровня этого белка в сыворотке крови (р=0,05).

Достоверных изменений содержания компонента С4-b в сыворотке крови и ПЖ как при I-II стадиях, так и при III-IV стадиях при эндометриозе не обнаружено (см. табл. 1, 2).

Однонаправленные изменения содержания указанных белков в сыворотке крови и ПЖ свидетельствуют об общих молекулярных механизмах модификации их экспрессии как на системном, так и локальном уровнях.

Выводы

С помощью протеомного анализа, позволяющего установить корреляцию между набором белков и развитием патологии, при НГЭ обнаружены изменения белкового состава ПЖ и сыворотки крови по сравнению с их контрольными спектрами. При I-II стадиях НГЭ имеется повышение уровня ГСПГ и Апо-АIV в ПЖ и сыворотке крови по сравнению с показателями контрольной группы. Для III-IV стадий заболевания характерно увеличение содержания Апо-АIV, ГСПГ и С3 в ПЖ и сыворотке крови. Модификация протеомного спектра при изученной патологии наряду с негативными последствиями лежит в основе компенсаторных реакций. Изученные белки могут быть предложены в качестве информативных маркеров для диагностики НГЭ и его стадий.

* - англ. sequence - последовательность.

* - англ. redox - окислительно-восстановительный.

Подтверждение e-mail

На test@yandex.ru отправлено письмо с ссылкой для подтверждения e-mail. Перейдите по ссылке из письма, чтобы завершить регистрацию на сайте.

Подтверждение e-mail