Онкологические аспекты гиперпластических процессов в эндометрии

Высокая частота развития гиперпластических процессов в эндометрии (ГПЭ), отсутствие должной эффективности от гормональной терапии, а также вероятность их озлокачествления ставят ГПЭ в ряд наиболее важных проблем современной медицины. Известно, что нарушение апоптоза, приводящее к накоплению клеток, которые содержат поврежденную ДНК, а также дефекты митотического аппарата ведут к возникновению раковой опухоли и ее прогрессированию [12]. В обеспечении баланса между пролиферацией и программируемой смертью клеток большую роль играют белки семейства IAP (IAP - inhibitors of apoptosis) - ингибиторы апоптоза [10]. В частности, к ним относится сурвивин, который является многофункциональным белком и оказывает влияние на регуляцию клеточного цикла, процессы неоангиогенеза и опухолеобразование.

В зависимости от локализации выделяют 3 типа сурвивина - ядерный, цитозольный и митохондриальный. Именно митохондриальный сурвивин отвечает за защиту клетки от апоптоза. Под действием различных апоптозных стимулов сурвивин быстро высвобождается из митохондрий в цитозоль. В ответ на стрессовые воздействия (гипоксию или обработку ДНК повреждающими агентами в концентрации, не вызывающей апоптоз) увеличивается количество митохондриального сурвивина, в то время как его содержание в цитозоле остается примерно постоянным. Возможно, таким образом клетка в ответ на стресс готовится противостоять апоптозу и усиливает свою защиту с помощью повышения количества митохондриального сурвивина [2, 3, 8].

Сурвивин является одним из ингибиторов «внутреннего» пути индукции апоптоза (см. рисунок).

Сурвивин синтезируется в наиболее распространенных опухолях человека, повышая их резистентность к противоопухолевым агентам и ионизирующему излучению [4]. Доклинические исследования [4] показали, что выключение синтеза сурвивина с использованием антисенс-олигонуклеотидов, доминант-негативных мутаций, рибозимов и ингибиторов циклинзависимых киназ увеличивает уровень апоптоза, уменьшает потенциал роста опухоли и восстанавливает чувствительность опухолевых клеток к химиотерапии и гамма-излучению при лечении различных типов опухолей человека. Высокий уровень синтеза сурвивина в опухолях коррелирует с их прогрессированием и считается негативным прогностическим фактором для ряда опухолей.

Ген BIRC5 экспрессируется практически во всех опухолях, независимо от их гистологии, что позволяет рассматривать его как универсальный маркер опухолеобразования для любого типа рака и создавать диагностические системы, основанные на детекции белка сурвивина в биологических образцах. Одновременно с этим сурвивин является привлекательной мишенью для генной терапии рака [9].

Исследованы соскобы эндометрия, полученные в результате раздельного диагностического или лечебно-диагностического выскабливания матки у 80 женщин, поступивших в гинекологическое отделение ГКБ №33 им. А.А. Остроумова.

Использовали лизаты тканевого материала, который брали согласно стандартной процедуре. Образцы лизатов хранили при температуре от –20 до –80°С в течение 4 сут в условиях отсутствия микробной контаминации. Образцы подвергали замораживанию (оттаиванию) только однократно. После размораживания образцы тщательно перемешивали. Не использовали образцы с повышенным содержанием липидов и с признаками бактериального роста.

Специальные рекомендации по подготовке биопсийного лизата для проведения анализа. В пробирку объемом 1,5 мл вносили исследуемый образец, добавляли 100 мкл буфера PBS с 0,01% тритона Х100 (или 0,01% буфера NР 40). Экстракцию проводили многократным размораживанием-оттаиванием. Для этого пробирку 3-5 раз замораживали в жидком азоте и оттаивали. Образец центрифугировали в настольной центрифуге при скорости 12 000 об/мин в течение 10 мин. Отбирали надосадочную жидкость и анализировали с помощью набора для качественного определения наличия соответствующего белка в биологических образцах методом твердофазного ИФА (ELISA) с использованием рекомбинантного антигена и моноклональных антител.

В настоящей работе для исследования образцов эндометрия был использован диагностический набор «Пептосурвим».

Принимая во внимание, что иммуногистохимическая характеристика ядерной и цитоплазматической локализации сурвивина не дает необходимой и достаточной информации для диагностической характеристики клеток, определяющей их онкологическое перерождение, мы исследовали митохондриальную форму локализации белка. Для понимания процессов, происходящих с различными изоформами сурвивина и их роли в клеточных нарушениях, проведено исследование корреляции экспрессии опухолеспецифического белка сурвивина с его природным ингибитором белком SMAC в тех же образцах.

В группу исследования включены 80 женщин: 1-я группа - 15 пациенток, у которых, по данным гистологического исследования, патологии эндометрия не выявлено, 2-я группа - 20 - с гиперплазией эндометрия (простая и сложная без атипии), 3-я группа - 15 - с простой и сложной гиперплазией эндометрия с атипией, 4-я группа - 20 - с высокодифференцированной аденокарциномой эндометрия, 5-я группа - 10 - с полипами эндометрия.

Все пациентки находились в перименопаузе. Их средний возраст составил 47,8 года. Показаниями к госпитализации явились наличие эхографических признаков гиперплазии эндометрия в отсутствие клинических симптомов заболевания (9,1%) и нарушение менструального цикла (90,9%).

Критерии включения пациенток в исследование: перименопауза, впервые выявленный гиперпластический процесс в эндометрии, отсутствие сопутствующей патологии органов малого таза, отсутствие эндокринных и онкологических заболеваний.

При анализе репродуктивной функции во 2-4-й группах отмечено большее число случаев самопроизвольного или искусственного прерывания беременности, чем в 1-й группе.

Среди перенесенных гинекологических заболеваний наиболее часто во всех группах встречались воспалительные процессы в органах малого таза (72,5%), миома матки (31,3%), аденомиоз (8,8%), доброкачественная патология шейки матки (17,5%), опухолевидные заболевания яичников (12,5%).

Среди соматической патологии наиболее часто преобладали заболевания эндокринной системы (нарушение жирового обмена, сахарный диабет, заболевания щитовидной железы) - 40% случаев.

Длительность заболевания в среднем составила от 1 года до 3 лет.

При анализе образцов 1-й и 2-й групп уровень сурвивина изменялся, но незначительно (см. таблицу),

Разница синтеза сурвивина при различных морфологических формах ГПЭ (2-я и 3-я группы) невелика, при этом в 4-й группе пациенток в образцах с высокодифференцированной аденокарциномой эндометрия наблюдалось статистически значимое увеличение количества сурвивина, уровень синтеза природного антагониста сурвивина - белка SMAC - не изменялся. Следует отметить, что при исследовании некоторых других онкологических процессов, таких как рак легких, пищевода, яичников, матки, корреляция сурвивин - SMAC также не прослеживалась [1].

Таким образом, результаты исследования образцов эндометрия с помощью используемых нами тест-систем еще раз подтверждают правильность современных представлений о ГПЭ как результате нарушения равновесия между процессами пролиферации и апоптоза клеток, в которых участвует в том числе белок сурвивин. Выявлено его присутствие в незначительном количестве в нормальном неизмененном эндометрии. Отмечено увеличение количества сурвивина по уровню транскрипции гена BIRC5 в образцах с полипами эндометрия, простой, сложной и атипической гиперплазией эндометрия, что согласуется с данными литературы [11]. Существенной разницы в изменении уровня сурвивина при этих патологических состояниях с его уровнем при нормальном состоянии эндометрия не было выявлено. Однако в образцах с аденокарциномой эндометрия (4-я группа) наблюдалось статистически значимое увеличение количества этого белка относительно нормы (см. таблицу), что еще раз подтверждает его возможное участие в онкологическом перерождении.

Полученные данные позволяют предполагать, что ГПЭ может предшествовать развитию аденокарциономы эндометрия или сопутствовать этой патологии. Это отчетливо прослеживается по повышению количества онкомаркера сурвивина в 4-й группе.

Дополнительные факторы, в сочетании с которыми гиперплазия эндометрия трансформируется в рак эндометрия, до сих пор полностью не изучены [5]. По-видимому, одним из таких факторов является повышенный синтез белка сурвивина, и как следствие - устойчивость патологических очагов эндометрия к апоптозу. Нарушение апоптоза может быть связано также с изменением синтеза природных антагонистов сурвивина, участвующих в регуляции этого процесса [1]. Однако в наших исследованиях нарушения продукции белка SMAC выявлено не было. Кроме того, по результатам исследования отмечено, что уровень этого белка не изменяется и при увеличении синтеза сурвивина в соответствующих образцах.

1. Синтез сурвивина при различных формах гиперпластических процессов в эндометрии существенно не различался.

2. При высокодифференцированной аденокарциноме эндометрия установлено статистически значимое увеличение количества сурвивина в исследуемых образцах.

3. Полученные данные позволяют предполагать, что гиперплазия эндометрия может предшествовать развитию аденокарциномы или сопутствовать этой патологии.