Введение
Гастроэзофагеальная рефлюксная болезнь (ГЭРБ) в настоящее время является одним из наиболее распространенных заболеваний. ГЭРБ редко приводит к смерти, однако она ассоциирована с высокой заболеваемостью и серьезными осложнениями, такими как изъязвление пищевода, пептическая стриктура, пищевод Барретта (ПБ), что позволяет рассматривать ее в качестве одного из ведущих факторов риска аденокарциномы пищевода [1]. Ключевой фактор патогенеза ГЭРБ — патологически высокая частота и/или длительность эпизодов заброса содержимого желудка в пищевод [2]. В последние годы патогенетические механизмы развития ГЭРБ и ее осложнений рассматриваются на тканевом и клеточном уровне. При изучении повреждений слизистой оболочки пищевода учитывается развитие воспаления, реализуемое через широкий спектр биологических медиаторов, включающих в себя вазоактивные амины и пептиды, компоненты комплемента, протеолитические ферменты, цитокины, факторы роста, продуцируемые как клетками иммунной системы (макрафаги, нейтрофилы, Т-лимфоциты), так и неиммунными — эпителиальными, мезенхимальными клетками. Немаловажное значение в развитии и прогрессировании заболевания имеют генетические механизмы. Доказательства генетической роли в эзофагите были получены при первых исследованиях с участием близнецов и при более поздних исследованиях генетических полиморфизмов [3]. В ряде исследований установлено, что аллель ИЛ1RN*2 и генотип ИЛ1RN2/2 являются независимыми факторами риска прогрессирования ГЭРБ, в том числе с развитием ПБ и аденокарциномы [4]. Ведутся работы по изучению роли полиморфизма генов интерлейкинов 10 (ИЛ-10) и 12 (ИЛ-12) в развитии и прогрессировании ГЭРБ, однако эти данные немногочисленны [5—10] и требуют дальнейшего изучения проблемы.
Цель исследования — изучение особенностей генетического полиморфизма ИЛ-10(1082G/A) и ИЛ-12B(1188A/C) у пациентов с ГЭРБ в зависимости от клинической картины заболевания и характера рефлюксата.
Материал и методы
В исследовании приняли участие 141 человек. В 1-ю группу вошли 80 пациентов с ГЭРБ (30 мужчин и 50 женщин), во 2-ю (контроль) — 61 человек без ГЭРБ (30 мужчин и 31 женщина); медиана возраста составила 43 [33; 57] и 54 [37; 64] года соответственно (p=0,754). Группы были сопоставимы по половому составу (p=0,16). Диагноз ГЭРБ был установлен пациентам с использованием анкеты GerdQ (Gastroesophageal Reflux Disease Questionnaire) (≥8 баллов) и/или при наличии изменений слизистой оболочки пищевода при проведении эндоскопического исследования верхних отделов желудочно-кишечного тракта, и/или при определении признаков заболевания при pH-импедансометрии. При формировании групп учитывали проживание респондентов в Забайкальском крае не менее трех поколений. Все респонденты, принявшие участие в исследовании, родились и проживают на территории края, участники как основной, так и контрольной группы охарактеризовали себя как европеоиды. В работе соблюдали этические принципы Хельсинкской декларации. Проведение исследования было одобрено локальным этическим комитетом при ФГБОУ ВО «Читинская государственная медицинская академия» (протокол №83 от 22.10.16).
Генотипирование полиморфного локуса G1082A ИЛ-10 и А1188С ИЛ-12B осуществляли методом полимеразной цепной реакции. Материалом для генетического анализа служили образцы ДНК, выделенные из лейкоцитов периферической венозной крови. Визуализация продуктов амплификации выполнена с помощью электрофореза в 3% агарном геле с добавлением бромистого этидия с ультрафиолетовой детекцией. В работе использованы стандартные наборы для исследуемых SNP научно-производственной фирмы «Литех» (Москва).
Накопление и обработку данных проводили с помощью программы MS Excel. Для статистической обработки использовали программу Statistica 10.0. Применяли методы непараметрической статистики (медиана и 25-й и 75-й процентили (Me [Q25; Q75], критерий Манна—Уитни, χ2, расчет отношения шансов (ОШ) с установлением 95% доверительного интервала (ДИ)). Оценку отклонения распределений генотипов изученного полиморфного локуса от распределения Харди—Вайнберга проводили с использованием модифицированного критерия χ2 Пирсона. Различия считали достоверными при p<0,05. В расчетах использована онлайн-программа «Hardy—Weinberg equilibrium calculator».
Результаты
Распределение частот генотипов полиморфного локуса G1082A гена ИЛ-10 и A1188C ИЛ-12B в изучаемых группах соответствовало закону Харди—Вайнберга (p>0,05).
При изучении полиморфизма гена ИЛ-10 у пациентов с ГЭРБ и в группе контроля выявлено три генотипа (G/G, G/A, A/A). Установлено, что генотип ИЛ-10 (1082G/G) чаще встречался в контрольной группе (ОШ 0,379; ДИ 95% 0,190—0,759), в отличие от генотипа A/A (ОШ 9,189; ДИ 95% 2,050—41,195). Распространенность аллеля A полиморфного локуса 1082G/A гена ИЛ-10 в 1-й группе была выше, чем во 2-й (ОШ 3,030; ДИ 95% 1,732—5,303) (табл. 1).
Таблица 1. Распространенность генотипов и аллелей гена интерлейкина 10 в положении 1082G/A у пациентов с ГЭРБ и в группе контроля
| Генотип и аллель | Пациенты с ГЭРБ, n=80 (%) | Контрольная группа, n=61 (%) | p |
| G/G | 35 (44) | 41 (67) | 0,006 |
| G/A | 26 (32) | 18 (30) | 0,753 |
| A/A | 19 (24) | 2 (3) | 0,0008 |
| G | 96 | 100 | 0,0001 |
| A | 64 | 22 | — |
Изучение полиморфного локуса гена G1082A ИЛ-10 у пациентов с ГЭРБ показало, что генотип ИЛ-10(1082G/A) чаще наблюдался у пациентов со смешанным рефлюксом (ОШ 0,297; ДИ 95% 0,102—0,859) в отличие от генотипа ИЛ-10(1082A/A), который был специфичен для пациентов с кислым рефлюксом (ОШ 4,266; ДИ 95% 0,872—20,860). Не установлено статистически значимых различий между изучаемым полиморфизмом в зависимости от наличия изменений слизистой оболочки пищевода и при оценке клинических проявлений заболевания согласно опроснику GerdQ (табл. 2).
Таблица 2. Генотипы интерлейкина 10 в положении 1082G/A у пациентов с ГЭРБ в зависимости от клинических проявлений заболевания
| Признак | G/G | p | G/A | p | A/A | p |
| Наличие эндоскопических признаков изменения слизистой оболочки пищевода, n=16 | 7 | 0,1030 | 6 | 0,8336 | 3 | 0,8488 |
| Отсутствие эндоскопических признаков изменения слизистой оболочки пищевода, n=25 | 10 | 10 | 5 | |||
| ≥8 баллов по опроснику GerdQ, n=31 | 15 | 0,2515 | 7 | 0,1639 | 9 | 0,8503 |
| <8 баллов по опроснику GerdQ, n=48 | 17 | 18 | 13 | |||
| Кислый рефлюкс, n=45 | 21 | 0,3875 | 11 | 0,0222 | 13 | 0,0574 |
| Смешанный рефлюкс, n=23 | 9 | 12 | 2 |
При изучении полиморфного локуса А1188С гена ИЛ-12 не выявлено статистически значимых различий в распространенности генотипов и аллелей между группами пациентов с ГЭРБ и контролем (табл. 3).
Таблица 3. Распространенность генотипов и аллелей гена интерлейкина 12 в положении 1188A/C у пациентов с ГЭРБ и в группе контроля
| Генотип и аллель | Пациенты с ГЭРБ, n=80 (%) | Контрольная группа, n=61 (%) | p |
| A/A | 42 (52) | 37 (61) | 0,3337 |
| A/C | 35 (44) | 23 (37) | 0,4699 |
| C/C | 3 (4) | 1 (2) | 0,4545 |
| A | 119 | 97 | 0,3131 |
| C | 41 | 25 |
Изучение генотипов А1188С ИЛ-12 в группе пациентов с ГЭРБ не показало статистически значимых различий в зависимости от порогового значения баллов согласно опроснику GerdQ, изменения слизистой оболочки и характера рефлюксата (табл 4).
Таблица 4. Генотипы интерлейкина 12 в положении 1188A/C у пациентов с ГЭРБ в зависимости от клинических проявлений заболевания
| Признак | A/A | p | A/C | p | C/C | p |
| Наличие эндоскопических признаков изменения слизистой оболочки пищевода, n=16 | 9 | 0,8745 | 6 | 0,6544 | 0 | 0,2278 |
| Отсутствие эндоскопических признаков изменения слизистой оболочки пищевода, n=33 | 19 | 11 | 3 | |||
| ≥8 баллов по GerdQ, n=27 | 13 | 0,0,4996 | 13 | 0,4716 | 1 | 0,9218 |
| <8 баллов по GerdQ, n=48 | 27 | 19 | 2 | |||
| Кислый рефлюкс, n=45 | 25 | 0,5422 | 18 | 0,4991 | 2 | 0,8790 |
| Смешанный рефлюкс, n=27 | 13 | 13 | 1 |
Обсуждение
ИЛ-10 — противовоспалительный, иммуносупрессивный цитокин, продукт гена человека ИЛ10. Этот цитокин имеет широкий спектр действия с выраженным иммуносупрессивным эффектом: подавляет пролиферацию и активность T-клеток, продукцию синтеза ряда цитокинов, снижает активность макрофагов и моноцитов. Снижает активность Th-1 в большей степени, чем Th-2. ИЛ-10 может стимулировать синтез иммуноглобулина E. У человека ген ИЛ10 находится на хромосоме 1 и содержит 5 экзонов: –3575, 2763, –082, –819 и 592. Проведены исследования по изучению трех промоторных полиморфизмов (–592C/A, –819 (C/T) и 1082 (A/G)) с восприимчивостью к разным заболеваниям [11]. У пациентов с ГЭРБ изучение полиморфизма генов ИЛ-10 проводилось в локусе 1082A/G. Учеными из Индии (2008 г.) установлено, что генотип ИЛ-10(1082A/A) является потенциальным фактором риска развития заболевания и его осложнений [5]. В настоящем исследовании генотип A/A также встречался чаще у пациентов с ГЭРБ, чем в группе контроля.
Ряд авторов проводили изучение полиморфизма генов этого цитокина у пациентов с разными формами ГЭРБ, включая осложненное течение заболевания (ПБ, аденокарцинома). Авторы из Нидерландов (2008 г.), которые изучали влияние полиморфизма генов цитокинов на ПБ у 255 пациентов с ПБ и 247 с рефлюкс-эзофагитом (РЭ), показали, что комбинации генотипа ИЛ-10(1082 A/A и A/G) были связаны с РЭ (ОШ 1,4; ДИ 95% 1,05—1,85; p=0,011) [6]. Аналогичные данные получены учеными из Великобритании (2005 г.), которые изучали полиморфизм генов ИЛ-10(1082A/G) у 456 пациентов с ГЭРБ. Все пациенты были разделены на 3 группы: имеющие эзофагит, ПБ без дисплазии, ПБ с дисплазией или аденокарциномой. Установлено, что ИЛ-10(1082A/A) чаще встречался у пациентов с ПБ и аденокарциномой, чем с эзофагитом. Авторы сделали вывод, что данный полиморфизм, наряду с демографическими показателями, может быть полезен в наблюдении за больными ГЭРБ [7]. В настоящем исследовании не получено статистически значимых различий у пациентов без признаков повреждения слизистой оболочки пищевода и при РЭ.
В литературе не обнаружено работ, посвященных изучению полиморфизма гена ИЛ10 в зависимости от характера рефлюксата. Однако результаты исследования показали, что у пациентов с кислым рефлюксом чаще встречался генотип ИЛ-10(1082A/A).
ИЛ-12 представляет собой противовоспалительный цитокин, который играет ключевую роль в стимулировании иммунного ответа Th1 в слизистой оболочке желудочно-кишечного тракта. Известно, что у лиц, инфицированных Helicobacter pylori, наблюдается повышенная экспрессия мРНК ИЛ-12 в слизистой оболочке желудка. В то же время изучение генотипов и полиморфизмов гена ИЛ12 у пациентов с язвенной болезнью не выявило различий в отношении локализации язвы, статуса Helicobacter pylori, использования нестероидных противовоспалительных препаратов, возраста, пола, эпизодов кровотечений и семейного анамнеза язвенной болезни [8]. Широко обсуждается связь полиморфизма гена ИЛ-12 с риском развития рака. Так, в метаанализе, посвященном изучению потенциальной роли полиморфизма гена ИЛ12 в возникновении рака, который включал 31 исследование с участием 10 749 больных раком и 11 921 здорового субъекта, установлено, что полиморфизм гена ИЛ-12B rs32112227 (AA по сравнении с AC+CC; p=0,004) являлся фактором риска развития онкологического процесса. Авторами сделан вывод, что определение полиморфизма ИЛ-12 возможно использовать как биомаркер предрасположенности к раку [9]. В исследовании из Китая проведено изучение связи полиморфизмов гена ИЛ-12A и ИЛ-12B с раком пищевода. В работе приняли участие 426 пациентов с раком пищевода и 432 респондента группы контроля. Установлено, что полиморфизмы генов ИЛ-12B (1188C/C и A/C) значительно связаны с риском развития рака пищевода. Кроме того, частота распространенности генотипов ИЛ-12B(1188C/C и A/C) была значительно выше у пациентов с низкой дифференцировкой. Авторы пришли к выводу, что ген ИЛ12B в своих полиморфных вариантах может способствовать развитию рака пищевода [10]. В то же время известно, что генотип ИЛ-12B(1188A/A) преобладает у пациентов с РЭ [5]. В настоящем исследовании около 1/2 (45%) пациентов с ГЭРБ имели генотип ИЛ-12B(1188A/C и C/C), что может свидетельствовать о наличии повышенного риска развития онкологического процесса. В исследовании не было получено статистически значимых различий в распространенности генотипов и аллелей ИЛ-12B(1188A/C) у пациентов с ГЭРБ в зависимости от клинических особенностей заболевания.
Вывод
У пациентов с ГЭРБ распространенность генотипа ИЛ-10(1082A/A) и аллеля A была выше, чем в группе контроля. Данный генотип характерен для пациентов с кислым характером рефлюкса.
Участие авторов: концепция и дизайн исследования — А.А. Жилина, Н.В. Ларева; сбор и обработка материала — А.А. Жилина; статистическая обработка — А.А. Жилина; написание текста — А.А. Жилина, Н.В. Ларева; редактирование — Е.В. Лузина, С.М. Цвингер, Е.И. Морозова.
Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.