Роль полиморфных вариантов гена сосудисто-эндотелиального фактора роста VEGF-А в формировании неразвивающейся беременности

Проблема невынашивания беременности в настоящее время продолжает сохранять свою актуальность и приоритетность в современном акушерстве, так как многие вопросы этиологии невынашивания беременности остаются нерешенными. Известно, что самопроизвольным выкидышем заканчивается 15—25% беременностей. В последние годы отмечается неуклонный рост частоты самопроизвольных абортов (Л.П. Суханова, Т.В. Кузнецова, 2011). Одной из форм невынашивания беременности является несостоявшийся аборт (неразвивающаяся беременность) — внутриутробная гибель эмбриона (плода) с длительной задержкой в полости матки. В структуре репродуктивных потерь частота неразвивающейся беременности составляет 10—20% [1, 2].

Наиболее сложным периодом беременности является I триместр, который включает основные критические периоды: имплантацию, органогенез и плацентацию. Этап формирования маточно-плацентарной области эндометрия и плацентации плодного яйца представляет собой васкуляризацию ворсин хориона и их инвазию в децидуальные сосуды. В пролиферации клеточных компонентов эндотелия сосудов, эндометрия и хориона основную роль играют ангиогенные факторы роста. Наиболее значимым из них является сосудисто-эндотелиальный фактор роста, А (VEGF-А) [3].

Фактор роста VEGF-А является чрезвычайно специфичным митогеном эндотелиальных клеток, который стимулирует эндотелиальную пролиферацию, миграцию клеток и замедляет апоптоз клеток хориона и децидуальной ткани. Среди белков семейства VEGF фактор роста VEGF-А является самым мощным проангиогенным протеином и играет ключевую роль в регуляции ангиогенеза. Фактор роста VEGF-A в эндотелии сосудов отвечает за два основных процесса: увеличение проницаемости сосудов и пролиферацию эндотелиальных клеток — оба события необходимы для успешного развития эмбриона [4—7].

Замена аминокислот в нуклеотидной последовательности гена VEGF-A может привести к изменению экспрессии гена и, как следствие, к снижению или, наоборот, к неадекватному повышению уровня VEGF-A в крови матери и в плаценте. В работах последних лет [8—10] доказано наличие зависимости между васкуляризацией плаценты, уровнем экспрессии ангиогенных факторов роста и частотой самопроизвольных выкидышей.

Цель исследования — установить роль полиморфных вариантов 936 C>T и -634 G>C гена VEGF-А в этиологии неразвивающейся беременности.

Использованы образцы ДНК 232 женщин, обратившихся за медицинской помощью в ФГБУ «Уральский научно-исследовательский институт охраны материнства и младенчества» и Городскую клиническую больницу № 14 Екатеринбурга, и 232 образца ДНК эмбрионов/плодов. Основную группу составили 116 беременных с неразвивающейся беременностью в сроке 8—11,5 (10±0,6) нед гестации. Гестационный возраст гибели эмбрионов/плодов основной группы составил 4—11,5 (8±0,4) нед. Клинический диагноз неразвивающейся беременности был поставлен в ходе динамического ультразвукового обследования беременных. У женщин данной группы в анамнезе отмечен один случай и более потери беременности (самопроизвольный выкидыш, неразвивающаяся беременность).

Контрольная группа была представлена 116 женщинами с физиологическим течением беременности и родов в анамнезе и физиологически протекающей настоящей беременностью сроком 5—12 (9±0,6) нед. Женщины данной группы приняли решение о медицинском аборте. Средний возраст пациенток основной группы составил 32,5±5,6 года, контрольной группы — 28,6±0,6 года.

Геномную ДНК женщин выделяли из буккального эпителия. Образцы ДНК эмбрионов/плодов выделяли из ворсин хориона, полученных из полости матки методом вакуум-аспирации или методом кюретажа. Для выделения ДНК использовались коммерческие наборы реагентов (НПО «ДНК-Технология», ООО «ИнтерЛабСервис», Россия).

Анализ полиморфных вариантов -634 G>C и 936 C>T гена VEGF-A проводили методом аллельспецифичной полимеразной цепной реакции в режиме реального времени на детектирующем амплификаторе ДТ-96 (НПО «ДНК-Технология», Россия).

Статистический анализ данных осуществлялся с помощью пакета прикладных программ Statistica 7.0. Различия между непараметрическими переменными обнаруживали при помощи χ² Пирсона. Относительный риск оценивали по показателю соотношения шансов (odds ratio, OR) с 95% доверительным интервалом (95% CI). Нулевая гипотеза отвергалась при р<0,05. Тест на соответствие распределения генотипов закону Харди—Вайнберга в обеих выборках проводили с помощью критерия χ² с использованием программы Hardy—Weinberg equilibrium.

Формирование системы мать—плацента—плод представляет собой гравидарную трансформацию децидуальной ткани под влиянием хориона. Степень активной инвазии трофобласта определяет гравидарную трансформацию децидуальной ткани и ее сосудов. Следовательно, можно предположить одновременное влияние материнского и плодового генотипов на степень инвазии трофобласта, гравидарную трансформацию децидуальной ткани и васкуляризацию плаценты.

На первом этапе работы для анализа возможной ассоциации аллельных вариантов 936 C>T и -634 G>C гена VEGF-А с риском неразвивающейся беременности были объединены образцы ДНК женщин и эмбрионов/плодов основной и контрольной групп. В результате в подгруппе мать—плод в случаях неразвивающейся беременности наблюдается более высокая частота генотипов 936СТ и 936ТТ полиморфизма VEGF-А 936 C>T, чем в подгруппе мать—плод при физиологически протекающей беременности (OR=1,51, 95% CI 1—2,27; p=0,048) (табл. 1).

Распределение частот аллелей и генотипов полиморфного варианта -634 G>C гена VEGF-А в подгруппах мать—плод основной и контрольной группы не различалось.

Согласно концепции антагонистической плейотропии, одни и те же варианты генов, задействованные в многочисленных биохимических процессах, на одних стадиях онтогенеза могут быть «полезны», а на других — «вредны» для нормальной жизнедеятельности [11]. Для оценки роли полиморфных вариантов 936 C>T и -634 G>C гена VEGF-А на различных этапах индивидуального развития мы объединили результаты генотипирования образцов ДНК женщин основной и контрольной групп в единую подгруппу женщин репродуктивного возраста. В качестве группы сравнения были использованы результаты исследования образцов ДНК плодов при физиологически развивающейся беременности. Результаты представлены в табл. 2.

По результатам исследования распределения аллелей и генотипов полиморфного варианта 936 C>T гена VEGF-А выявлено, что у эмбрионов/плодов физиологически протекающей беременности (контрольная группа) чаще встречается генотип 936 СС (доминантная модель наследования), чем у женщин репродуктивного возраста (OR=1,69, CI 95% 1,01—2,83; p=0,04). Распределение частот аллелей и генотипов полиморфного варианта –634 G>C гена VEGF-А у эмбрионов/плодов контрольной группы и женщин репродуктивного возраста не различалось.

Результаты исследования распределения частот аллелей и генотипов полиморфных вариантов 936 C>T и –634 G>C гена VEGF-А у эмбрионов/плодов и женщин контрольной группы достоверных различий не выявили (табл. 3).

Противоположную картину распределения частот аллелей и генотипов полиморфного варианта 936 C>T гена VEGF-А мы обнаружили при сравнении результатов генотипирования эмбрионов/плодов контрольной группы и женщин с неразвивающейся беременностью (основная группа) (табл. 4).

По результатам исследований у эмбрионов/плодов контрольной группы чаще встречается генотип 936 СС гена VEGF-А, чем у женщин основной группы по доминантной модели наследования (OR=1,88, CI 95% 1,04—3,41; p=0,03). Распределение частот аллелей и генотипов полиморфного варианта –634 G>C гена VEGF-А у эмбрионов/плодов контрольной группы и женщин основной группы не различалось.

Предполагается, что причина гибели эмбрионов/плодов с нормальным кариотипом при неразвивающейся беременности имеет многофакторную природу, т. е. является результатом аддитивного действия многих генов как зародыша, так и матери, а также комплекса неблагоприятных факторов среды.

Анализ полиморфных вариантов 936 C>T и –634 G>C гена VEGF-А у эмбрионов/плодов и женщин в случаях неразвивающейся беременности в сравнении с женщинами и эмбрионами/плодами при физиологически протекающей беременности I триместра показал, что в подгруппе мать—плод в случаях неразвивающейся беременности наблюдается более высокая частота генотипов 936СТ и 936ТТ полиморфизма VEGF-А 936 C>T, чем в подгруппе мать—плод при физиологически протекающей беременности (OR=1,51, 95% CI 1,0—2,27; p=0,048). При этом не выявлены различия по частотам аллелей и генотипов проанализированных генов между группой эмбрионов/плодов неразвивающейся беременности и группой эмбрионов/плодов физиологически протекающей беременности, а также между группой женщин с неразвивающейся беременностью и женщин контрольной группы [11]. Поэтому можно заключить, что полиморфный вариант 936 C>T гена VEGF-А влияет на остановку развития эмбриона только при наличии аллеля 936 Т в генотипе как матери, так и плода. Влияние полиморфного варианта –634 G>C этого же гена на формирование неразвивающейся беременности не выявлено.

Изучение роли полиморфных вариантов 936 C>T и –634 G>C гена VEGF-А на различные стадии онтогенеза показало, что у эмбрионов/плодов контрольной группы чаще встречается генотип 936 СС в сравнении с женщинами репродуктивного возраста (OR=1,69, CI 95% 1,01—2,83; p=0,04) и женщинами основной группы (OR=1,88, CI 95% 1,04—3,41; p=0,03). Можно предположить, что на раннем внутриутробном периоде развития, как и в половозрелом возрасте, генетически более выгодно носительство аллеля 936С полиморфизма 936 C>T гена VEGF-А. Аллель 936 Т у женщин является фактором риска формирования неразвивающейся беременности I триместра.

Таким образом, изучив распределение частот аллелей и генотипов полиморфных вариантов 936 C>T и –634 G>C гена VEGF-А, мы выявили связь аллель 936 Т с риском формирования неразвивающейся беременности. Полагаем, что максимально неблагоприятным является наличие аллеля 936 Т одновременно у матери и плода.

Конфликт интересов отсутствует.