Роды после ЭКО с использованием витрифицированных ооцитов донора (описание случая)

Метод витрификации эмбрионов человека был внедрен в эмбриологическую практику Клиники МАМА в 2000 г. В декабре 2002 г. в результате применения разработанной нами методики витрификации родился первый в России ребенок после размораживания эмбрионов, криоконсервированных данным методом [28]. С тех пор витрификация эмбрионов в Клинике МАМА успешно применяется в рутинной практике [23, 25].

Разработка эффективного метода криоконсервации ооцитов в настоящее время является не менее актуальной задачей для клиник ВРТ [2, 12, 18, 21, 22, 26]. Необходимость проведения данной процедуры может быть обусловлена как медицинскими или социальными показаниями, так и высокой потребностью в создании криобанков ооцитов доноров [5, 6, 19, 20, 24]. Однако в сравнении с процессом замораживания эмбрионов криоконсервация яйцеклеток значительно затруднена. Это связано с рядом цитологических и молекулярно-биохимических особенностей ооцита, принципиально отличающих его от клеток эмбриона [3, 7, 8, 11, 17]. Несмотря на то что первое сообщение о наступлении беременности после переноса эмбрионов, полученных из замороженных ооцитов, опубликовано еще в 1986 г. [4], долгие годы выживаемость ооцитов после криоконсервации оставалась крайне низкой, были получены лишь единичные беременности [1, 9].

Значимых результатов в области криоконсервации ооцитов удалось достичь благодаря использованию метода витрификации, об эффективности которого при замораживании яйцеклеток впервые было сообщено в 1999 г. [15, 16]. C тех пор во многих лабораториях мира активно ведутся работы по оптимизации метода витрификации ооцитов, функционируют первые криобанки донорских яйцеклеток [6, 10, 12—14, 17, 19, 20, 24, 26, 27, 28].

Нами разработан и внедрен в практику метод мультипротекторной (multiprotectant) витрификации ооцитов. Мультипротекторный эффект достигается за счет увеличения криопротекторного состава до 4 действующих компонентов, а также в результате многоступенчатой экспозиции эмбрионов в растворах криопротекторов при витрификации и в растворах сахарозы при размораживании.

Пациентка М., 44 лет, обратилась в Клинику МАМА. Соматический анамнез и наследственность не отягощены. Из гинекологического анамнеза: менструации регулярные, половая жизнь с 20 лет, наблюдается по поводу бесплодия с 2006 г., одинокая. В 2005 г. перенесла острый бартолинит, проведено лечение с эффектом. В 2008 г. выявлена миома матки, лечение не проводилось. В ноябре 2009 г. проходила лечение бесплодия методом ЭКО. В результате индукции суперовуляции получен один ооцит. В полость матки перенесен один эмбрион сниженного качества, беременность не наступила. В январе 2010 г. проведена повторная попытка ЭКО с индукцией суперовуляции, получен один ооцит неудовлетворительного качества, программа остановлена. Диагноз: бесплодие первичное. Снижение фолликулярного резерва. Миома матки. Рекомендовано повторное лечение методом ЭКО с использованием ооцитов донора.

В сентябре 2010 г. пациентке проведена программа ЭКО в цикле заместительной гормональной терапии (ЗГТ) с использованием витрифицированных ооцитов анонимного донора. Донорство ооцитов осуществляли согласно требованиям, предъявляемым к анонимным донорам ооцитов, а также при наличии письменного информированного согласия донора на проведение индукции суперовуляции и пункции яичников (Приказ Минздрава РФ от 26 февраля 2003 г. №67 «О применении вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) в терапии женского и мужского бесплодия»).

Ооциты донора в количестве 4 были криоконсервированы в августе 2010 г. по методике мультипротекторной витрификации, разработанной в Клинике МАМА. Ооциты последовательно проводили по 4 растворам с восходящей концентрацией криопротекторов: этиленгликоль 3,75% — 15%; диметилсульфоксид 3,75% — 15%; фиколл 2,5%—10%, сахароза 0,125 — 0,5 М при температуре –37 °C. Время экспозиции в каждом растворе варьировало от 1 до 6 мин. После экспозиции в последнем растворе криопротекторов ооциты помещали в систему HSV kit («CryoBioSystem», Франция) в количестве 2 штук. Криоконсервацию осуществляли путем мгновенного погружения системы HSV в кипящий азот (–196°) с последующим хранением в сосудах Дьюара.

Все 4 ооцита анонимного донора были разморожены синхронно с циклом ЗГТ пациентки. В ходе разморозки ооциты последовательно проводили по 4 растворам сахарозы с нисходящей концентрацией (1 М — 0,125 М) при температуре –37 °C. Оплодотворение ооцитов осуществляли спустя 3 ч после размораживания методом ИКСИ с использованием спермы анонимного донора криобанка. Было получено два эмбриона, культивирование эмбрионов осуществляли в течение 120 ч. К моменту переноса оба эмбриона достигли стадии бластоцисты (3АА, 3ВА по классификации Гарднера) и были перенесены пациентке. На 14-е сутки после переноса эмбрионов в крови пациентки выявлено содержание β-чХГ в концентрации 780 мЕД/мл, а на 21-е сутки после переноса в полости матки методом УЗИ визуализировано одно плодное яйцо, соответствующее 5—6 акушерским неделям беременности. Поддержку 2-й фазы цикла и ранних сроков беременности проводили с применением препаратов утрожестан, прегнил и прогинова. В сроке беременности 12 нед пациентке была рекомендована консультация генетика. По результатам генетического скрининга генетический риск не превышал общепопуляционный. Оперативное родоразрешение пациентке произведено в плановом порядке на сроке 39—40 нед беременности 7 июня 2011 г. Родилась живая доношенная девочка, масса тела 3130 г., длина 54 см, оценка по шкале Апгар 8/8 баллов.

Настоящий случай показывает возможность успешного использования разработанного нами метода мультипротекторной витрификации для криоконсервации ооцитов человека как в рамках лечения бесплодия методом ЭКО, так и для создания криобанка яйцеклеток.