Сайт издательства «Медиа Сфера»
содержит материалы, предназначенные исключительно для работников здравоохранения. Закрывая это сообщение, Вы подтверждаете, что являетесь дипломированным медицинским работником или студентом медицинского образовательного учреждения.

Созаева Л.С.

ФГБУ "Эндокринологический научный центр" Минздрава РФ, Москва

Новые иммунологические методы диагностики аутоиммунного полиэндокринного синдрома 1-го типа

Авторы:

Созаева Л.С.

Подробнее об авторах

Журнал: Проблемы эндокринологии. 2015;61(3): 43‑46

Просмотров: 285

Загрузок: 2

Как цитировать:

Созаева Л.С. Новые иммунологические методы диагностики аутоиммунного полиэндокринного синдрома 1-го типа. Проблемы эндокринологии. 2015;61(3):43‑46.
Sozaeva LS. The new immunological methods for diagnostics of type 1 autoimmune polyendocrine syndrome. Problemy Endokrinologii. 2015;61(3):43‑46. (In Russ.).
https://doi.org/10.14341/probl201561343-46

?>

Аутоиммунный полигландулярный синдром 1-го типа (АПС 1-го типа) — редкое наследственное моногенное заболевание с аутосомно-рецессивным типом наследования, сопровождающееся аутоиммунным поражением органов эндокринной и других систем [1, 2]. Синдром обусловлен мутациями в гене AIRE (AutoImmuneREgulator), который кодирует одноименный белок [2—4]. Патогенез заболевания до конца не изучен, однако предполагается, что белок «аутоиммунный регулятор» играет важную роль в негативной селекции Т-лимфоцитов. Отсутствие этого белка приводит к снижению экспрессии аутоантигенов в тимусе и нарушению негативной селекции Т-лимфоцитов, что способствует развитию аутоиммунных поражений.

АПС 1-го типа характеризуется сочетанием трех основных клинических компонентов: хронического кожно-слизистого кандидоза, гипопаратиреоза и первичной хронической надпочечниковой недостаточности. Эти компоненты считаются «классическими» клиническими критериями диагноза АПС 1-го типа, но проявления могут быть значительно многообразнее, включая аутоиммунные поражения ряда других органов и тканей. Типичными «малыми» компонентами АПС 1-го типа являются алопеция, витилиго, гипоплазия зубов, синдром мальабсорбции, инсулинозависимый сахарный диабет, аутоиммунный тиреоидит, преждевременное истощение яичников, аутоиммунный гепатит, аутоиммунный кератит и блефарит и др. Иногда «малые» компоненты являются первыми признаками заболевания, а «основные» манифестируют позже [5].

Диагноз может быть установлен клинически при наличии у пациента как минимум двух из трех «основных» компонентов заболевания («классическая диада или триада»), а также при наличии одного из них в случае присутствия заболевания у родственника первого порядка. Для генетической диагностики необходимо выявление мутации в гене AIRE.

С момента появления первого компонента заболевания до формирования «классической диады» или «триады» АПС 1-го типа может пройти много лет. Нередко наблюдается «неклассическое», или «стертое», течение заболевания, в связи с чем генетический анализ в последние годы стал основным методом ранней и доклинической диагностики АПС 1-го типа [1, 6].

Для гена AIRE характерно наличие частых мутаций, и для каждой популяции — своя частая мутация. В российской популяции пациентов с АПС 1-го типа самой частой является мутация R257X, которая выявляется в 70% аллелей [6]. Та же мутация превалирует в финской популяции, где и была впервые обнаружена («финская мутация»). Наличие частых мутаций облегчает и удешевляет генетическую диагностику заболевания, так как позволяет исследованием только одного соответствующего экзона установить диагноз у значительного числа пациентов. Однако отсутствие частой мутации не исключает диагноза. В таких случаях необходимо полное секвенирование гена AIRE, состоящего из 14 экзонов, которое также не всегда дает точный ответ, поскольку у 5—10% пациентов мутации выявить путем прямого секвенирования не удается.

В 2006 г. было показано, что антитела (АТ) к группе интерферонов (ИФН) 1-го типа определяются только у пациентов с тимомой и АПС 1-го типа и не определяются у пациентов с другими аутоиммунными заболеваниями [7].

ИФН впервые были открыты в 1957 г. как агенты, защищающие клетки от вирусной инфекции. Выделяют две группы ИФН, а также группы ИФН-подобных цитокинов. К группе ИФН 1-го типа относятся: ИФН-α, ИФН-β, ИФН-ε, ИФН-κ, ИФН-ω, ИФН-δ, ИФН-τ, а к ИФН 2-го типа только ИФН-γ. Группа ИФН-подобных цитокинов включает лимитин, ИЛ-28А, ИЛ-28 В, ИЛ-29 [3]. В последнее время выделяют группу ИФН 3-го типа, к которой относят ИФН-λ1, ИФН-λ2 и ИФН-λ3 [8]. Все ИФН оказывают антивирусное, антипролиферативное действие, стимулируют цитотоксичную активность клеток иммунной системы (Т-лимфоцитов, NK-клеток, моноцитов, макрофагов и дендритных клеток) в ответ на повышение экспрессии опухоль-ассоциированных поверхностных антигенов, стимулируют экспрессию антигенов главного комплекса гистосовместимости класса I, индуцируют и активируют проапоптотические гены и протеины, ингибируют антиапоптотические гены и ангиогенез [9].

АТ к различным цитокинам (ИФН-α, ИФН-ω и ряду интерлейкинов) впервые были описаны у пациентов с тимомами и миастенией [10]. Для этого применялся метод нейтрализации противовирусных ИФН (AVINA — AntiViral Interferon Neutrolization Assay). В основе метода лежит заражение клеток глиобластомы человека вирусом миоэнцефалита в присутствии сыворотки пациента и специфического ИФН; при наличии в сыворотке пациента антител к данному ИФН происходит гибель клеток, что можно зафиксировать с помощью специального красителя и абсорбционного анализа.

В исследование были включены 60 пациентов из Финляндии и 16 пациентов из Норвегии с генетически подтвержденным диагнозом АПС 1-го типа, 9 пациентов с АПС 2-го типа и 16 пациентов с изолированными надпочечниковой недостаточностью, гипопаратиреозом и хроническим кожно-слизистым кандидозом. У пациентов с АПС 1-го типа были выявлены высокие титры АТ к большинству подтипов ИФН-α, особенно к ИФН-α2 и ИФН-ω (у 100% пациентов). Ни у одного из пациентов с АПС 2-го типа или изолированными аутоиммунными заболеваниями эти АТ обнаружены не были. В более низких титрах и в меньшем проценте случаев АПС 1-го типа были обнаружены АТ к ИФН-β (22%). АТ к ИФН 3-го типа выявлялись в очень низких титрах, а к ИФН 2-го типа выявлялись крайне редко. Эти А.Т. не относились к группе нейтрализующих АТ [7]. У пациентов с тимомами также обнаруживались АТ к ИФН-α и ИФН-ω, но в меньших титрах и в меньшем проценте случаев (60%) [10].

Таким образом, АТ к ИНФ-ω оказались высокоспецифичными для синдрома АПС 1-го типа независимо от спектра манифестировавших компонентов. Интересно что, несмотря на высокие титры АТ к ИФН-ω и ИФН-α2, у пациентов не отмечалось повышенной предрасположенности к вирусным инфекциям. Предполагают, что в организме присутствуют ИФН многих различных типов и подтипов, отвечающих за противовирусную защиту, а нейтрализующие АТ обнаруживаются только к определенным подтипам ИФН. Остальные их типы остаются незатронутыми данным процессом и сохраняют свои функции [11]. Невысокая частота вирусных инфекций у этой группы пациентов может быть связана с тем, что ИФН вырабатываются локально, оставаясь недоступными для воздействия аутоантител [11].

В работе K. Kisand и соавт. [11] показано влияние этих АТ на экспрессию ИФН-стимулирующих генов (ИСГ) в моноцитах и дендритных клетках. У пациентов с АПС 1-го типа и высокими титрами АТ к ИФН-ω и ИФН-α2 экспрессия ИСГ была гораздо ниже, чем у лиц контрольной группы. В то же время у пациентов, имеющих АТ только к ИФН-ω, напротив, отмечалось усиление экспрессии данных генов. После культивирования моноцитов и дендритных клеток пациентов с АПС 1-го типа в фетальной телячьей сыворотке, не содержащей АТ, экспрессия ИСГ восстанавливалась. Было показано также, что в ответ на стимуляцию вирусами плазматические и дендритные клетки пациентов с АПС 1-го типа вырабатывают нормальные количества ИФН 1-го типа при нормальной экспрессии генов этих ИФН. Из 2 пациентов без АТ к ИФН-α2 у одного имел место аутоиммунный тиреоидит, а у второго выявлялись высокие титры АТ к тиреопероксидазе. Эти данные представляют особый интерес, поскольку побочным эффектом терапии препаратами ИФН-α является аутоиммунное поражение щитовидной железы [11].

Эффективность метода определения АТ к ИФН-ω для диагностики АПС 1-го типа была подтверждена в 2008 г. на группе из 174 пациентов с АПС 1-го типа из разных стран (Италия, Великобритания, Финляндия и Норвегия), у которых нейтрализующие антитела к ИФН-ω выявлялись в 100% случаев. Исключение составила одна пациентка с классическими проявлениями АПС 1-го типа, в первом образце сыворотки которой АТ к ИФН-ω и ИФН-α2 не обнаруживались, но в образцах, полученных позднее, присутствовали АТ обоих видов [7, 12]. АТ к ИФН-α2 выявлялись у 94% пациентов, т. е. их специфичность достаточно высока, но уступает таковой АТ к ИНФ-ω. Не было выявлено никакой взаимосвязи между титром АТ, различными мутациями в гене AIRE, продолжительностью и количеством компонентов заболевания.

Предложено использовать АТ к ИНФ-ω и к ИНФ-α2 в качестве диагностического критерия заболевания [10]. В настоящий момент такой подход является основным методом диагностики заболевания в Норвегии, Швеции, Эстонии и ряде других европейский стран [12].

В 2009 г. было проведено исследование АТ к ИФН-ω у пациентов с АПС 1-го типа не методом AVINA, а другим — радиоиммунным (РИА) [13]. Метод отличается высокой точностью, позволяет определять АТ не только к ИФН, но и к цитокинам и органам-мишеням. В исследование были включены 32 пациента из Норвегии, 7 из Швеции, 6 из Финляндии и 3 из Северной Америки. У всех 48 пациентов с АПС 1-го типа был выявлен высокий титр АТ к ИФН-ω, тогда как у здоровых лиц и больных с изолированной надпочечниковой недостаточностью, сахарным диабетом 1-го типа, синдромом Дауна, а также у родственников пациентов с АПС 1-го типа эти АТ отсутствовали.

После того как было показано диагностическое значение АТ к ИНФ-ω у пациентов с АПС 1-го типа, возник вопрос о сроках появления этих АТ при АПС 1-го типа. В исследование A. Wolff и соавт. [14] были включены 13 пациентов в возрасте до 5 лет, у 3 из которых имелись мутации в гене AIRE, но отсутствовали какие-либо клинические проявления. В работе принимала участие наша исследовательская группа и российские пациенты. У некоторых пациентов АТ к ИФН-ω обнаруживались уже на 6—7-м месяце жизни даже при отсутствии клиники заболевания. Таким образом, такой подход можно использовать для доклинической диагностики АПС 1-го типа, и его эффективность не уступает генетическим методам диагностики этого синдрома.

Относительно недавно разработан новый простой и сравнительно недорогой метод определения АТ к ИФН — «HEKblue cells assay» (с использованием культуры клеток человеческой эмбриональной почки, трансфецированных специфическими плазмидами), который обладает специфичностью и чувствительностью сопоставимыми с таковыми РИА [15].

В настоящее время экспресс-метод «HEKblue cells assay», как и другие методы определения АТ к ИФН-ω, занял свое место в лабораторной практике.

Присутствие АТ к ИФН-ω является диагностическим критерием АПС 1-го типа. Секвенирование гена AIRE по-прежнему остается важным этапом диагностики этого синдрома, поскольку позволяет проводить генетическое консультирование и осуществлять планирование семьи.

В заключение следует подчеркнуть, что метод определения АТ к ИНФ-ω «HEKblue cells assay» является относительно простым, быстрым и экономически эффективным и в то же время высокоспецифичным и высокочувствительным. Он может применяться для диагностики классических и нетипичных форм АПС 1-го типа, для обследования семьи пациента, а также для скрининга на этот синдром среди пациентов с изолированными аутоиммунными заболеваниями.

Подтверждение e-mail

На test@yandex.ru отправлено письмо с ссылкой для подтверждения e-mail. Перейдите по ссылке из письма, чтобы завершить регистрацию на сайте.

Подтверждение e-mail