К настоящему времени многочисленными исследованиями представлено два гена, наследуемые мутации в которых приводят к возникновению семейных форм рака молочной железы и рака яичников (РЯ) — BRCA1 и BRCA2. У всех родственников в семье, имеющих один и тот же патологический вариант гена, повышается риск развития онкологического заболевания, по некоторым данным, такой риск приближается к 90%. Однако наиболее угрожающими являются данные, которые демонстрируют, что носительство этих мутаций повышает риск развития заболевания в молодом возрасте в 10 раз [1—4]. Зачастую в одной семье обнаруживаются случаи и рака молочной железы и Р.Я. Выявление мутаций с последующей диспансеризацией пациенток позволяет предотвратить развитие заболевания не только у пациенток, но и у их родственниц. Однако следует понимать, что генетическая природа этих форм рака показана только в 15% от общего числа случаев, что демонстрирует многофакторность их патогенеза [5, 6].

Согласно данным некоторых авторов, ассоциированность с мутациями в генах BRCA1 и BRCA2 при РЯ составляет более 90% от всех форм наследственного рака. В связи с этим задача этого этапа исследования — изучить частоту и вклад мутаций BRCA при различных формах РЯ, включая спорадические случаи.

Цель исследования — изучить особенности распределения частот генотипов и аллелей генов BRCA1 и BRCA2 у здоровых женщин и среди пациенток с РЯ и определить вклад генов BRCA1 и BRCA2 в формирование основных форм заболевания и влияние на течение и эффективность лечения этого заболевания.

Проведено генотипическое обследование образцов ДНК от 208 пациенток узбекской этнопринадлежности, жительниц Андижанской области с диагнозом РЯ, наблюдаемых в гинекологическом отделении АООД в период с 2008 по 2015 г. Кроме того, обследованы 80 здоровых женщин первой линии родства (дочери, родные сестры и матери) пациенток с РЯ для изучения наследственных форм заболевания.

Для проведения исследований аллельных вариантов генов BRCA1 и BRCA2 использовали опухолевый материал на парафиновых блоках, взятый в период с 2008 по 2012 г., и образцы периферической венозной крови, полученные в период с 2013 по 2015 г. Сбор материала осуществляли в Андижане, после чего его доставляли для проведения молекулярно-генетических исследований на базу НДЦ «ImmunogenTest» при РНЦ иммунологии Минздрава Республики Узбекистан.

При генотипировании вариантов BRCA1 – BRCA1_4153delA, BRCA1_5382insC, BRCA1_3819delGTAAA, BRCA1_300T>G (Cys61GLY), BRCA1_2080delA, BRCA1_185delA, BRCA1_3875delA, BRCA2_2080delA 6174delT — во всех изученных образцах общее наличие мутации обнаружено в 24 (9,3%) из 288 случаев. Выявлены достоверные различия характера распределения генотипических вариантов между пациентками с РЯ и их ближайшими родственницами.

Установлены достоверно значимые различия (χ² =3,92; р=0,05) между группой больных раком и группой здоровых, что составило 11,1 и 1,25% соответственно. В группе здоровых среди 80 женщин мутации обнаружены в 1,25% случаев, в то время как среди пациенток с РЯ — в 11,1% (табл. 1).

Из всех изученных 8 вариантов выявлено 5 мутаций (4153delA, 5382insC, Cys61Gly, 2080delA, 3819delGTAAA), однако превалирующими оказались 5382insC (BRCA1) в 8,7% и BRCA1_4153delA в 2,9% от всего числа больных РЯ (см. табл. 1). По данным других авторов [3, 6], мутации BRCA1 4153delA также идентифицированы как рисковые для РЯ, но не рака молочной железы.

Три варианта BRCA 1, 2 также выявлены с низкой частотой: BRCA1 300T>G (Cys61GLY) у 1% пациенток в группе РЯ и не обнаружены среди здоровых; BRCA1_2080delAи BRCA1_3819delGTAAA установлены по 1,4% среди пациенток с РЯ. У родственниц пациенток с РЯ выявлен вариант BRCA_1 5382insC у 2% женщин (рис. 1).

Например, по данным возможной связи гена BRCA с развитием рака молочной железы и яичников в России показана значимость мутации BRCA1_185delAG, BRCA2_6174IT и BRCA1_3875 delGTAAA. Однако в нашем исследовании эти варианты не выявлены ни в одном случае, что указывает на нецелесообразность включения данных вариантов в наши генодиагностические панели для выявления РЯ.

Таким образом, BRCA1 5382insC имеет большую значимость в возникновении наследственной формы РЯ, чем BRCA1 4153delA. Мутации аллеля BRCA1 5382insC можно использовать как критерий прогноза РЯ и включать в скрининговые исследования.

Нами впервые установлен характер генотипической вариабельности гена BRCA в Андижанском регионе как среди пациенток с РЯ, так и здоровых женщин. Аналогичные результаты представлены в других странах, где также преобладающим прогностически значимым вариантом был идентифицирован BRCA1 5382insC [7, 8].

Анализ полученных результатов показал, что мутация BRCA1_4153delA встречалась у 6 пациенток с РЯ, что составило 2,9% (р>0,05). Чаще всего в 18 (8,7%) случаях в обследуемой группе выявили мутацию BRCA1_5382insC, в группе здоровых ближайших родственниц эту мутацию определили у 1 (1,25%) обследуемой (р>0,05). Мутация BRCA1_300T>G (Cys61GLY) обнаружена у 2 (1%) женщин (р>0,05), BRCA1_3819delGTAAA — у 3 (1,4%) р>0,05) и BRCA1_2080delA — у 2 (1,4%) (р>0,05) (см. табл. 1).

Кроме того, проведен анализ показателей OR и RR с целью изучения возможного рискового вклада мутаций BRCA в развитие РЯ (табл. 2).

Для определения вклада мутаций в гене BRCA при прогнозировании течения заболевания также провели анализ носительства мутаций при различных стадиях процесса РЯ в зависимости от стадии заболевания (с I по IV). Основную мутацию BRCA1_5382insC выявляли при всех стадиях заболевания, но чаще всего при IV стадии — 40%. В целом анализ показал, что частота встречаемости всех мутаций BRCA среди больных РЯ с I стадией составила 46,2% и среди пациенток с IV стадией — 40%. Достоверных различий встречаемости мутаций в зависимости от форм (наследственные/спорадические) и стадии процесса не выявлено.

Больные с I стадией процесса имели следующие виды мутаций: BRCA1_4153delA у 2 (15,4%) больных, BRCA1_5382insC у 4 (30,8%) больных и 3 вида мутации: BRCA1_3819delGTAAA, BRCA1_300T>G (Cys61GLY), BRCA1_2080delA, которые составили по 7,7% соответственно. У больных с II—III стадией заболевания были обнаружены мутации BRCA1_5382insC у 9 (6,4%) и 3 (6%) соответственно (табл. 3).

Таким образом, диагностику спектра мутаций BRCA1_5382insC, BRCA1_4153delA, BRCA1_3819delGTAAA, BRCA1_300T>G (Cys61GLY) и BRCA1_2080delA необходимо использовать для выявления заболевания на более ранних стадиях, помимо скринингового обследования для выявления риска развития РЯ.

Мы также провели анализ носительства мутаций гена BRCA при различных морфологических формах. При анализе данных встречаемости различных морфологических форм в зависимости от возрастных групп отметили, что в возрасте 46—55 лет (пременопауза) наиболее часто встречались опухоли эпителиального характера. Серозная форма диагностирована у 43 (16,7%), сосочковая — у 57 (22,1%), недифференцированная — у 26 (10,1%). Среди лиц молодого возраста до 17 лет серозная форма встретилась всего лишь у 1 (1,8%) больной. Недифференцированная гистологическая форма при РЯ, как и при других формах злокачественной опухоли, является самым неблагоприятным в прогнозе течения опухоли. Из всех гистологических форм недифференцированный рак выявлен у 26 (10,1%) женщин. Это означает, что пациентки с данной гистологической формой опухоли имеют плохой прогноз в плане общей выживаемости и безрецидивного периода течения заболевания. Продолжительность жизни за счет удлинения безрецидивного промежутка времени с применением самых современных методов лечения играет огромную роль у онкологических больных (табл. 4).

При изучении возрастного состава пациенток с мутацией в гене BRCA1 получены следующие данные: пациентки молодого возраста (до 35 лет) – 2 (5,5%), среднего возраста (35–59 лет) – 11 (48,6%), пожилого возраста (60 лет–74 года) – 10 (45,9%) (рис. 2).

Интерес также представляет наличие мутаций в различных гистологических группах. Среди больных с сосочковой гистологической опухолью встречаемость мутаций обнаружена у 10 (41,7%), со светлоклеточной формой опухоли — у 1 (4,2%), с дисгерминомой — у 2 (8,3%), с эмбриональной опухолью — у 1 (4,2%), с недифференцированной формой — у 3 (12,5%) и с тератобластомой и гранулезоклеточной опухолью — у 4,2 и 4,2% соответственно. Из этого следует, что встречаемость мутаций в гене BRCA 1, 2 чаще характерна для эпителиальных опухолей у 18 (78,2%) пациенток по сравнению к неэпителиальными опухолями выявлены у 5 (21,7%). Интересным является тот факт, что у всех пациенток с мутацией в гене BRCA1 морфологически определяли сосочковую форму опухоли.

Таким образом, частота встречаемости серозной, сосочковой, недифференцированной форм в группе женщин узбекской популяции превалирует над другим морфологическим типом опухоли. Анализ показывает, что наличие мутации в гене ВRCA1 может привести к возникновению эпителиального РЯ, так как у пациенток с эпителиальной формой рака обнаружен большой процент мутаций.

Из 208 пациенток с РЯ у 11,1% выявлены 5 из 8 мутаций гена BRCA 1, 2 — 4153delA, 5382insC, Cys61Gly, 2080delA, 3819delGTAAA, превалирующими явились 5382insC (BRCA1) у 8,7% и BRCA1_4153delA у 2,9% от всего числа больных Р.Я. Среди 80 здоровых родственниц выявлен вариант BRCA_1 5382insC у 2% женщин. Изучение вклада мутаций BRCA в развитие РЯ показало, что неблагоприятный генотип имеет высокий статистически значимый коэффициент риска развития РЯ: RR составил 8,9567 при p=0,0305 и OR — 9,8216 при p=0,0266. Наличие мутации в гене BRCA1 у больных РЯ ассоциируется с прогностически неблагоприятным течением заболевания, общая эффективность 0%, а у больных без мутации 70,1%. Анализ относительного риска (RR) среди прооперированных больных с/без мутации в гене BRCA показал, что наличие мутации достоверно ассоциировано с прогрессированием заболевания: RR=1,2245 при р-value<0,0025. Среди лиц-носителей мутаций прогрессирование заболевания было достоверно выше (RR=2,5444 при р<0,0001). Случаи с ранним рецидивированием у лиц с мутациями в гене BRCA достоверно отличались от таковых у пациенток без мутаций (RR=7,7516 при р<0,0001).

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Authors declare no conflict of interest.

Сведения об авторах

Мамарасулова Д.З. — e-mail: dilya2580559@gmail.com; https://orcid.org/0000-0002-0631-5594