Сайт издательства «Медиа Сфера»
содержит материалы, предназначенные исключительно для работников здравоохранения. Закрывая это сообщение, Вы подтверждаете, что являетесь дипломированным медицинским работником или студентом медицинского образовательного учреждения.

Афанасьева О.И.

ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр кардиологии» Минздрава РФ, Москва, Россия

Разова О.А.

ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр кардиологии» Минздрава РФ, Москва, Россия

Уткина Е.А.

ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр кардиологии» Минздрава РФ, Москва, Россия

Афанасьева М.И.

ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр кардиологии» Минздрава РФ, Москва, Россия

Клесарева Е.А.

ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр кардиологии» Минздрава РФ, Москва, Россия

Попова А.Б.

ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр кардиологии» Минздрава РФ, Москва, Россия

Ежов М.В.

ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр кардиологии» Минздрава РФ, Москва, Россия

Покровский С.Н.

ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр кардиологии» Минздрава РФ, Москва, Россия

Взаимосвязь концентрации PCSK9 и липопротеида(а) у пациентов с тяжелой гиперхолестеринемией в зависимости от фенотипа апобелка(а)

Авторы:

Афанасьева О.И., Разова О.А., Уткина Е.А., Афанасьева М.И., Клесарева Е.А., Попова А.Б., Ежов М.В., Покровский С.Н.

Подробнее об авторах

Журнал: Кардиологический вестник. 2018;13(1): 45‑50

Просмотров: 344

Загрузок: 5

Как цитировать:

Афанасьева О.И., Разова О.А., Уткина Е.А., Афанасьева М.И., Клесарева Е.А., Попова А.Б., Ежов М.В., Покровский С.Н. Взаимосвязь концентрации PCSK9 и липопротеида(а) у пациентов с тяжелой гиперхолестеринемией в зависимости от фенотипа апобелка(а). Кардиологический вестник. 2018;13(1):45‑50.
Afanasieva OI, Razova OA, Utkina EA, Afanasieva MI, Klesareva EA, Popova AB, Ezov MV, Pokrovsky SN. The relationship between the PCSK9 and lipoprotein(a) concentrations in patients with severe hypercholesterolemia depending on the apolipoprotein(a) phenotype.. Russian Cardiology Bulletin. 2018;13(1):45‑50. (In Russ.).
https://doi.org/10.17116/Cardiobulletin201813145-50

?>

Пропротеиновая конвертаза субтилизин/кексин 9-го типа (PCSK9) относится к семейству пропротеиновых конвертаз сериновых протеиназ и была открыта в 2003 г. [1]. Единственным идентифицированным в настоящее время субстратом PCSK9 является его собственный продомен [2]. Огромный интерес к данному белку связан с одной из его основных физиологических функций — регуляцией липидного обмена путем протеолиза белка — рецептора частиц липопротеидов низкой плотности (ЛНП) [3]. Показано, что мутации в гене PCSK9 являются одной из причин семейной гиперхолестеринемии (СГХС) — доминантно наследуемого заболевания, при котором нарушается рецептор-опосредованное связывание ЛНП с клеткой, что приводит к накоплению частиц липопротеидов в плазме крови [4]. Создание новых поколений биологических препаратов, снижающих содержание липидов в крови, таких как полностью гуманизированные моноклональные антитела (МкАТ) к PCSK9, блокирующие его связывание с рецептором ЛНП, а также антисмысловые олигонуклеотиды [5], ингибирующие синтез PCSK9, открыло новую эру в лечении больных СГХС, позволяя снизить концентрацию холестерина (ХС) ЛНП на 50—70% [6]. Концентрация PCSK9 в плазме крови человека колеблется в широком интервале и зависит от множества различных физиологических условий [7].

Неожиданным было обнаруженное влияние на уровень липопротеида (а) [Лп (а)] терапевтических препаратов, воздействующих на PCSK9 [8, 9], поскольку ранее показано, что клиренс Лп (а) практически не регулируется рецептором ЛНП [10, 11]. Остается открытым вопрос относительно возможных механизмов воздействия ингибиторов PCSK9 на уровень Лп (а).

Частица Лп (а) представляет собой сложный надмолекулярный комплекс, в состав которого входят подобная ЛНП, содержащая апоВ-100 частица и молекула уникального для семейства липопротеидов апобелка (а) [апо (а)], молекулярная масса которого варьирует от 300 до 800 кДа.

Цель работы — изучить связь концентрации Лп (а) и PCSK9 у ранее не получавших терапию статинами пациентов с впервые выявленной тяжелой гиперхолестеринемией (ГХС), без клинических проявлений ишемической болезни сердца (ИБС) и гемодинамически значимых поражений сонных артерий в зависимости от фенотипа апо (а).

Материал и методы

В исследование включили 133 мужчин и женщин в возрасте от 18 до 75 лет (средний возраст 52±11 лет) с впервые выявленной тяжелой ГХС: с уровнями общего ХС (ОХС) 7,5 ммоль/л и/или ХС ЛНП 4,9 ммоль/л, ранее не получавших терапию статинами.

В исследование не включали лиц с диагнозом ИБС и/или документированным инфарктом миокарда в анамнезе, с гемодинамически значимыми поражениями сонных артерий, декомпенсированным сахарным диабетом, гипотиреозом, почечной или печеночной недостаточностью, острым коронарным синдромом, а также перенесших эндоваскулярные или хирургические вмешательства в течение последних 6 мес.

У всех пациентов определяли показатели липидного состава крови ферментативным методом. Содержание Х.С. ЛНП рассчитывали по формуле Фридвальда: ХС ЛНП = ОХС – ХС ЛВП – ТГ/2,2 (ммоль/л). Уровень Х.С. ЛНП, корригированный по концентрации Х.С. Лп (а) (ХС ЛНПкорр.) рассчитывали по формуле Фридвальда в модификации Далена: ХС ЛНПкорр. = ХС ЛНП – Х.С. Лп (а), где Х.С. Лп (а)=Лп (а) · 0,33/38,7 ммоль/л [12]. Титр IgG и IgM аутоантител (аутоАТ) к ЛНП и Лп (а), а также к их окисленным в присутствии двухвалентной меди производным, определяли методом твердофазного иммуноферментного анализа в соответствии с описанным ранее, с использованием в качестве проявляющих, коммерческие антитела (АТ) козы против иммуноглобулинов G и M человека («Sigma Aldrich», США) [13]. Для определения концентрации PCSK9 использовали коммерческий набор Ouantikine ELISA Human Proprotein Convertase 9/PCSK9 Immunoassay («R&D System», США).

Концентрацию Лп (а) в сыворотке определяли методом иммуноферментного анализа с использованием моноспецифических поликлональных АТ барана к Лп (а) человека [14]. Все результаты иммуноферментных анализов фиксировали с использованием микропланшетного спектрофотометра Multiscan Go («Thermo Sсientific», Финляндия). Фенотипирование апо (а) проводили методом электрофореза в полиакриламидном геле с последующим иммуноблоттингом с использованием моноспецифических поликлональных АТ к Лп (а). К группе с низкомолекулярным фенотипом (НМФ) апо (а) относили пациентов, имеющих хотя бы одну изоформу апо (а) с молекулярной массой 580 кДа и менее, а с высокомолекулярным фенотипом (ВМФ) — пациентов с изоформами апо (а) более 580 кДа. В образцах с концентрацией Лп (а) менее 10 мг/дл (предел чувствительности иммуноблоттинга) фенотип апо (а) не определяли, а пациентов выделяли в отдельную группу с так называемым недетектируемым (НДФ), или «нулевым», фенотипом.

Статистическую обработку полученных данных выполняли с использованием пакета MedCalc версия 15.8. Результаты представляли в виде среднего значения ± стандартное отклонение для параметров, имеющих нормальное распределение, или медианы с указанием интерквартильного интервала [25-й процентиль; 75-й процентиль] для параметров, имеющих распределение, отличное от нормального. Для определения нормальности распределения данных использовали критерий Колмогорова—Смирнова. При сравнении количественных показателей двух групп использовали параметрический критерий t Стьюдента и непараметрический критерий Манна—Уитни. Для оценки частотных данных между группами применяли точный критерий Фишера. При проведении однофакторного корреляционного анализа использовали коэффициент ранговой корреляции по Спирмену, при многофакторном анализе — множественный регрессионный анализ или логистический анализ.

Результаты

Пациенты были разделены на 3 подгруппы в соответствии с определенным фенотипом апо (а). Группы не различались по возрасту, полу, наличию артериальной гипертонии, курению, индексу массы тела (ИМТ), наследственному анамнезу СГХС и липидному составу крови. Статистически значимые различия наблюдались только по наличию сахарного диабета (табл. 1).

Таблица 1. Характеристика пациентов, включенных в исследование, в зависимости от фенотипа апо (а) Примечание. * — р<0,05 по сравнению с группой ВМФ. Данные представлены как среднее ± стандартное отклонение и медиана [25-й процентиль; 75-й процентиль], если не указано другое. ИМТ — индекс массы тела; ОХС — общий холестерин; ХС ЛНП — холестерин липопротеидов низкой плотности; ХС ЛНПкорр. — корригированный холестерин липопротеидов низкой плотности; ТГ — триглицериды; ХС ЛВП — холестерин липопротеидов высокой плотности; НДФ — недетектируемый фенотип апо (а); ВМФ — высокомолекулярный фенотип апо (а); НМФ — низкомолекулярный фенотип апо (а).

Уровень PCSK9 не различался в подгруппах пациентов с ВМФ или НМФ апо (а), в отличие от концентрации Лп (а) (рис. 1).

Рис. 1. Концентрация (а) Лп (а) и (б) PCSK9 у пациентов с различным фенотипом апо (а). Лп (а) — липопротеид (а); PCSK9 — пропротеиновая конвертаза субтилизин/кексин 9-го типа.

Мы обнаружили тенденцию к более высокому титру АТ к окисленным Лп (а) [окЛп (а)] в подгруппе пациентов с НМФ апо (а) по сравнению с пациентами с ВМФ и НДФ. Для А.Т. другой специфичности различий между подгруппами не наблюдалось (табл. 2).

Таблица 2. Титр аутоАТ к Лп (а) и ЛНП, а также их окисленным производным в подгруппах пациентов с различным фенотипом апо (а) Примечание. * — р=0,059 по сравнению с подгруппами ВМФ и НДФ апо (а). аутоАТ — аутоантитела; класс G — иммуноглобулины класса G; класс M — иммуноглобулины класса M; Лп (а) — липопротеид (а); окЛп (а) — окисленный Лп (а); ЛНП — липопротеиды низкой плотности; окЛНП — окисленные липопротеиды низкой плотности; НДФ апо (а) — недетектируемый фенотип апо (а); ВМФ апо (а) — высокомолекулярный фенотип апо (а); НМФ апо (а) — низкомолекулярный фенотип апо (а).

В общей группе пациентов концентрация PCSK9 коррелировала только с полом и возрастом (табл. 3).

Таблица 3. Результаты одно- и многофакторного анализа связи концентрации PCSK9 в плазме с полом, возрастом, уровнем ОХС и Лп (а) Примечание. * — p<0,05, ** — p<0,01,*** — p<0,005, # — p<0,0005. Результаты однофакторного анализа приведены как коэффициент ранговой корреляции по Спирмену, многофакторного — как коэффициент корреляции многофакторного регрессионного анализа. ОХС — общий холестерин; НДФ — недетектируемый фенотип апо (а); ВМФ апо (а) — высокомолекулярный фенотип апо (а); НМФ апо (а) — низкомолекулярный фенотип апо (а).
Корреляции с показателями липидного состава крови, как и с фенотипом апо (а), в общей группе обследованных пациентов не обнаружено.

Однако при проведении корреляционного анализа внутри каждой подгруппы пациентов выявлена достоверная взаимосвязь концентраций Лп (а) и PCSK9 только у пациентов с НМФ апо (а) (рис. 2).

Рис. 2. Корреляция уровней циркулирующих Лп (а) и PCSK9 в группах пациентов с НМФ апо (а) (а) и ВМФ апо (а) (б). Указан коэффициент корреляции Пирсона. ВМФ апо (а) — высокомолекулярный фенотип апо (а); НМФ апо (а) — низкомолекулярный фенотип апо (а).
В этой же группе пациентов исчезала связь уровня PCSK9 с полом и возрастом, хотя она сохранялась для пациентов других групп.

По данным многофакторного регрессионного анализа с введением в модель пола, возраста, уровня ОХС и фенотипа апо (а), в общей группе пациентов независимыми предикторами уровня PCSK9 были концентрация Лп (а) в плазме (r=0,224; p=0,01) и пол пациентов (r=0,176; p=0,04). В отдельных группах с различными фенотипами апо (а) только у пациентов с НМФ апо (а) концентрация Лп (а) (r=0,527; p=0,0001) была связана с уровнем циркулирующего PCSK9 (табл. 3).

Уровень аутоАТ к ЛНП и Лп (а), а также к их окисленным модификациям, не был связан с концентрацией PCSK9 и не различался в подгруппах пациентов с различным фенотипом апо (а).

Обсуждение

Положительная взаимосвязь уровней циркулирующих в крови PCSK9, ХС ЛНП и ОХС выявлена несколькими исследователями [15, 16]. Однако уровень PCSK9 колеблется в очень широком диапазоне и только на 7% объясняет вариабельность уровня ХС ЛНП [7, 16].

Результаты клинических испытаний препаратов гуманизированных АТ против PCSK9 выявили достоверное изменение в концентрации не только ХС ЛНП, но и Лп (а) в сыворотке крови пациентов [8, 9]. Механизм такого влияния препаратов МкАТ к PCSK9 на концентрацию Лп (а) непонятен, поскольку участие рецептора ЛНП в клиренсе Лп (а) не выявлено в большинстве исследований как in vitro, так и in vivo [10, 11]. Кроме того, препараты МкАТ к PCSK9 вызывают снижение концентрации Лп (а) на 20% у пациентов с гомозиготной СГХС с дефектом рецепторов ЛНП [17].

В нашей работе показано, что концентрация PCSK9 не связана с концентрацией Лп (а) в общей группе пациентов с впервые выявленной тяжелой гиперлипидемией, как и с другими липидными показателями и уровнем аутоАТ к содержащим апоВ-100 липопротеидам и их окисленным модификациям. Не обнаружено достоверных различий по уровню PCSK9 и у пациентов с различным фенотипом апо (а). Однако мы обнаружили, что у пациентов с НМФ апо (а) уровень PCSK9 статистически значимо ассоциировался с концентрацией Лп (а). Подобные результаты получены в недавнем исследовании, показавшем достоверную взаимосвязь (r=0,50; p<0,0001) концентрации Лп (а) в плазме крови и уровня PCSK9 после поправки на пол и возраст у 39 пациентов с гиперЛп (а)-липопротеидемией (концентрация Лп (а) 39—320 мг/дл). Большинство пациентов, вошедших в исследование, имели НМФ апо (а) — среднее количество повторов крингла КIV2, определяющих размер молекулы апо (а), составило 11±5 [18], что соответствует апо (а) молекулярной массой менее 460 кДа.

Согласно данным разных исследователей, почти 40% PCSK9 может быть связано с ЛНП [19, 20]. Значительное снижение уровня PCSK9, связанного с ЛНП, отмечено и после проведения процедур афереза ЛНП у пациентов с ГХС с использованием каскадной плазмофильтрации или сорбции на колонках с декстран-сульфатом [21, 22].

Комплекс PCSK9 с Лп (а) недавно обнаружен в плазме крови пациентов с повышенной концентрацией Лп (а), при этом PCSK9 был связан с частицами Лп (а) в большей степени, чем с ЛНП. Одно из возможных объяснений, высказанных авторами, — это более продолжительное время полужизни Лп (а) по сравнению с ЛНП [18]. Таким образом, избирательность во взаимосвязи концентрации PCSK9 и Лп (а) может объясняться преимущественным образованием комплекса PCSK9 и Лп (а) с апо (а) с меньшей молекулярной массой, во-первых, за счет более продолжительной циркуляции Лп (а) с НМ апо (а) [23], а во-вторых, возможной большей стерической доступностью ЛНП-подобной частицы, которая, по-видимому, участвует в образовании комплекса с PCSK9 [18].

Преимущественное образование такого комплекса Лп (а) и PCSK9 в активной форме может приводить к более высокому риску возникновения атеросклероза и развития ИБС у пациентов с НМФ апо (а), вне зависимости от концентрации Лп (а) [24—26].

Заключение

Впервые показано, что наличие НМФ апо (а) определяло взаимосвязь концентраций Лп (а) и PCSK9 в сыворотке крови у пациентов с тяжелой ГХС. Полученные результаты свидетельствуют о возможном различии в катаболизме и свойствах частиц Лп (а) в зависимости от фенотипа апо (а). Дальнейшее изучение взаимосвязи Лп (а) и PCSK9, а также механизмов влияния терапевтических препаратов — ингибиторов PCSK9 на уровень Лп (а) является, по нашему мнению, одним из перспективных направлений как фундаментальных, так и клинических исследований.

Работа выполнена при поддержке IAS/Pfizer Independent Grant for Learning & Change, AstraZeneca (SSCRES0179), ООО «Амджен».

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Сведения об авторах

Афанасьева Ольга Ильинична — д.б.н., в.н.с. лаб. проблем атеросклероза Института экспериментальной кардиологии ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр кардиологии» Минздрава РФ, Москва, Россия. Адрес для переписки: 121552 Москва, ул. 3-я Черепковская 15а, Институт экспериментальной кардиологии ФГБУ «НМИЦ кардиологии» МЗ РФ, тел. +7(495) 414-67-32. E-mail: afanasieva.cardio@yandex.ru

Разова Оксана Андреевна — н.с. лаб. проблем атеросклероза Института экспериментальной кардиологии ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр кардиологии» Минздрава РФ, Москва, Россия. Адрес для переписки: 121552 Москва, 3-я Черепковская 15а, Институт экспериментальной кардиологии ФГБУ «НМИЦ кардиологии» МЗ РФ, тел. +7(495) 414-67-32. E-mail: oarazova@yandex.ru

Уткина Елена Анатольевна — к.х.н., с.н.с. лаб. проблем атеросклероза института экспериментальной кардиологии ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр кардиологии» Минздрава РФ, Москва, Россия. Адрес для переписки: 121552 Москва, ул. 3-я Черепковская 15а, Институт экспериментальной кардиологии ФГБУ «НМИЦ кардиологии» МЗ РФ, тел. +7(495) 414-67-32. E-mail: utkelena@yandex.ru

Афанасьева Марина Ильинична — н.с. лаб. проблем атеросклероза института экспериментальной кардиологии ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр кардиологии» Минздрава РФ, Москва, Россия. Адрес для переписки: 121552 Москва, 3-я Черепковская 15а, Институт экспериментальной кардиологии ФГБУ «НМИЦ кардиологии» МЗ РФ, тел. +7(495) 414-67-23.

Клесарева Елена Александровна — к.т.н., н.с. лаб. проблем атеросклероза института экспериментальной кардиологии ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр кардиологии» Минздрава РФ, Москва, Россия. Адрес для переписки: 121552 Москва, 3-я Черепковская 15а, Институт экспериментальной кардиологии ФГБУ «НМИЦ кардиологии» МЗ РФ, тел. +7(495) 414-67-23. E-mail: hea@mail.ru

Попова Анна Борисовна — аспирант отдела проблем атеросклероза института клинической кардиологии ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр кардиологии» Минздрава РФ, Москва, Россия. Адрес для переписки: 121552 Москва, ул. 3-я Черепковская 15а, Институт клинической кардиологии ФГБУ «НМИЦ кардиологии» МЗ РФ, тел. +7(495) 414-60-67. E-mail: anna.b.popova@gmail.com

Ежов Марат Владиславович — д.м.н., в.н.с. отдела атеросклероза института клинической кардиологии ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр кардиологии» Минздрава РФ, Москва, Россия. Адрес для переписки: 121552 Москва, ул. 3-я Черепковская 15а, Институт клинической кардиологии ФГБУ «НМИЦ кардиологии» МЗ РФ, тел. +7(495) 414-60-67. E-mail: marat_ezhov@mail.ru

Подтверждение e-mail

На test@yandex.ru отправлено письмо с ссылкой для подтверждения e-mail. Перейдите по ссылке из письма, чтобы завершить регистрацию на сайте.

Подтверждение e-mail