Введение

Дисфункция височно-нижнечелюстного сустава (ВНЧС) является распространенным заболеванием челюстно-лицевой области. Указанное патологическое состояние часто сопровождается длительным болевым синдромом, который значительно снижает качество жизни пациентов [1]. Согласно данным О.C. Wadhokar и D.S. Patil (2022), 75—80% взрослых пациентов с дисфункцией ВНЧС нуждаются в медицинском сопровождении, а для полной ремиссии может потребоваться до трех лет [3]. Следует отметить, что при дисфункции ВНЧС женщины, как правило, испытывают более сильную боль [2], а в 20—25% случаев болевой синдром может сохраняться длительное время или рецидивировать [3].

Развитие болевого синдрома при дисфункции ВНЧС опосредовано как периферическими, так и центральными механизмами [4]. Одной из причин повышенной активности ноцицепторов и гиперчувствительности к болевым раздражителям при данной патологии является формирование остеоартрита и реактивного воспаления параартикулярных тканей [5]. При локальном воспалительном процессе происходит выброс медиаторов воспаления, таких как простагландины, брадикинины и цитокины, которые усиливают передачу болевых сигналов [5]; именно эти явления лежат в основе периферической сенситизации. Цитокины — интерлейкин-1β, фактор некроза опухоли α, интерлейкин-6 способствуют активации сенсорных нейронов и усилению сигнальной трансдукции, что играет важную роль в развитии аллодинии и формировании центральной сенситизации [5].

Под влиянием указанных выше медиаторов ноцицепторы не только характеризуются изменением функциональной активности, но и сами участвуют в регуляции иммунного ответа путем стимуляции высвобождения нейромедиаторов, воздействующих на иммунные клетки [6]. Данные реакции поддерживает воспалительный процесс, усиливая болевые ощущения.

В экспериментальных исследованиях показано, что препараты с иммуномодулирующими свойствами способны снижать уровень провоспалительных факторов [7] с одновременным усилением продукции противовоспалительных цитокинов, таких как интерлейкин-10 и интерлейкин-4 [8], что уменьшает выраженность механической аллодинии при болевом синдроме [9, 10].

Учитывая вышесказанное, актуальным представляется разработка новых подходов к купированию болевых синдромов различного генеза путем иммуномодуляции.

Цель работы — изучить изменения болевой чувствительности у самок крыс при экспериментальном артрите височно-нижнечелюстного сустава в условиях иммуномодуляции.

Материал и методы

Эксперименты одобрены комиссией по биомедицинской этике ФГБНУ «Федеральный исследовательский центр оригинальных и перспективных биомедицинских и фармацевтических технологий» (протокол №3 от 21 февраля 2024 г.). Все процедуры выполнены в соответствии с требованиями Всемирного общества защиты животных (WSPA) и Европейской конвенции по защите экспериментальных животных. Животные содержались в стандартных условиях вивария и прошли 14-дневный период адаптации после доставки из питомника «Столбовая».

Остеоартрит ВНЧС формировали путем введения монойодацетата натрия (МИА) в дозе 16 мг/кг (0,04 мл) в полость сустава [11]. Для иммуномодуляции использовали препарат «Имунофан» («Бионокс», Россия) в дозе 0,4 мл, который вводили крысам подкожно в область холки [12]. «Имунофан» — синтетический гексапептид, оказывающий иммунорегулирующее, противовоспалительное, дезинтоксикационное и гепатопротективное действие, а также повышающий противоопухолевую защиту организма [13]. В клинических исследованиях показано, что данный препарат оказывает регуляторное влияние на процессы воспаления и приводит к восстановлению референсного уровня цитокинов в плазме крови [14].

Исследование проведено на половозрелых самках крыс Wistar (n=51) (масса тела 261,0±22,0 г), которые были случайным образом распределены в пять экспериментальных групп: 1-я группа (n=10) — интактные животные (контроль); 2-я группа (n=12) — введение «Имунофана» на 2-е, 4-е, 6-е, 8-е и 10-е сутки исследования; 3-я группа (n=15) — инъекция МИА в ВНЧС в 1-е сутки исследования; 4-я группа (n=7) — инъекция МИА в ВНЧС в 1-е сутки исследования с последующим введением «Имунофана» на 2-е, 4-е, 6-е, 8-е и 10-е сутки исследования; 5-я группа (n=7) — инъекция МИА в ВНЧС в 1-е сутки исследования с последующим введением «Имунофана» на 14-е, 16-е, 18-е, 20-е и 22-е сутки исследования.

Порог болевой реакции крыс оценивали путем измерения латентного периода реакции отведения хвоста (ЛПРОХ) при светотермальном раздражении на аппарате Tail-Flick Analgesia Meter 0104-301M (Columbus Instruments, США). Измерения проводили в фазу диэструса эстрального цикла, который определяли методом микроскопии вагинальных мазков. Регистрацию ЛПРОХ у крыс всех групп осуществляли в исходном состоянии (1-й диэструс), дальнейшие измерения проводили в следующие временные периоды: 1—3-я группы — 2-й, 3-й, 4-й, 5-й и 6-й диэструс; 4-я группа — 2-й и 3-й диэструс (крысы указанной группы выведены из эксперимента после 3-го диэструса); 5-я группа — 5-й и 6-й диэструс. Определения ЛПРОХ у особей 5-й группы не проводили во 2-й, 3-й и 4-й диэструс с целью исключения излишней травматизации животных в ранний период формирования артрита ВНЧС, то есть до начала введения иммуномодулятора.

Анализ данных осуществляли с использованием программного обеспечения Statistica 10. Полученные результаты представлены в виде медиан и межквартильных интервалов (Q₁; Q₃). Межгрупповые различия оценивали с помощью критерия Манна—Уитни, для анализа изменений показателей внутри групп применяли критерий Уилкоксона. Различия считали статистически значимыми при уровне p<0,05.

Результаты

Динамика показателя ЛПРОХ крыс на различных этапах эксперимента представлена в таблице.

ЛПРОХ крыс на разных этапах эксперимента

Примечание. Данные представлены в виде медианы, нижнего и верхнего квартилей: Me [Q₁; Q₃]. ЛПРОХ — латентный период реакции отведения хвоста; МИА — монойодацетат натрия. * — p<0,05, *** — p<0,001 по сравнению с 1-м диэструсом; ^ххх — p<0,001 по сравнению со 2-м диэструсом; ⁺ — p<0,05, ⁺⁺ — p<0,01 и ⁺⁺⁺ — p<0,001 по сравнению с 1-й группой; ^# — p<0,05, ^## — p<0,01, ^### — p<0,001 по сравнению со 2-й группой; ^Δ — p<0,05, ^ΔΔ — p<0,01 по сравнению с 3-й группой.

В исходном состоянии ЛПРОХ у крыс 2-й, 4-й и 5-й групп был меньше, чем у интактных животных (крыс 1-й группы), на 19,4% (p=0,02), 21,9% (p=0,01) и 15,8% (p=0,02) соответственно. В 1-й диэструс изучаемый показатель у особей 3-й группы был больше на 24,6% (p=0,009) и 18,4% (p=0,03), чем у крыс 4-й и 5-й групп соответственно. В 4-й диэструс ЛПРОХ у животных, получавших «Имунофан», был выше, чем у животных (крыс 1-й группы): межгрупповая разница составила 31,9% (p=0,03).

Ранее нами было показано, что введение МИА в ВНЧС самок крыс приводит у них к уменьшению порога болевой реакции [15]. Сформировавшийся таким образом болевой синдром в челюстно-лицевой области был наиболее выражен ко 2-му эстральному циклу и сохранялись на протяжении шести эстральных циклов. В представленном исследовании установлено, что в условиях иммуномодуляции не наблюдаются изменения ноцицептивных порогов, характерные для особей с внутрисуставным введением МИА.

Во 2-й диэструс ЛПРОХ у крыс, получавших «Имунофан» со 2-х суток после введения МИА в ВНЧС, был на 86,6% больше, чем у особей с индуцированным артритом ВНЧС (p=0,046).

В 5-й и 6-й диэструс ЛПРОХ у крыс, получавших «Имунофан» с 14-х суток формирования артрита, был больше, чем у животных с инъекцией МИА в ВНЧС, на 26,2% (p=0,04) и 68,9% (p=0,006) соответственно.

Обсуждение

В представленной работе значения порога болевой реакции у крыс изучены на разных этапах развития экспериментального остеоартрита ВНЧС в условиях иммуномодуляции.

Наблюдающиеся статистически значимые межгрупповые различия ЛПРОХ у животных в исходном состоянии могут быть обусловлены индивидуальными особенностями ноцицептивной чувствительности [16]. Для интактных крыс и особей, получавших «Имунофан», отмечены незначительные колебания анализируемого параметра на различных этапах эксперимента.

Согласно нашим предыдущим наблюдениям и исследованиям других авторов, введение крысам МИА приводит к развитию артрита ВНЧС с сопутствующим снижением ЛПРОХ [11, 15]. Это свидетельствует о формировании стойкого болевого синдрома, механической аллодинии и гиперчувствительности к ноцицептивным стимулам [11].

Нами установлено, что снижение ЛПРОХ, характерное для животных с МИА-индуцированным артритом ВНЧС, не происходит в условиях иммуномодуляции. Важно отметить, что указанный эффект «Имунофана» не зависел от времени начала применения препарата. Данный факт может быть связан с нормализующим влиянием этого иммуномодулятора на цитокиновый профиль сыворотки крови, что сопровождается уменьшением выраженности воспалительных реакций [14].

Выявлено, что во 2—6-й диэструс ЛПРОХ у крыс, получавших «Имунофан» после инъекции МИА в ВНЧС (4-я и 5-я группы), был значительно больше, чем у животных с артритом, и не отличался от значений ЛПРОХ у интактных особей. Выраженные межгрупповые различия ноцицептивной чувствительности у крыс, получавших МИА изолированно и с последующей иммуномодуляцией, указывают на способность «Имунофана» предупреждать развитие и/или купировать сформировавшийся болевой синдром в указанных условиях. Выявленные особенности согласуются с имеющимися данными о влиянии иммуномодуляторов на ноцицептивную систему, проявляющемся в снижении аллодинии и уменьшении выраженности воспаления в патологическом очаге [17]. Представленные факты могут быть обусловлены модулирующим действием «Имунофана» как на периферические (внутрисуставное и параартикулярное воспаление), так и на центральные звенья патогенеза (процессы центральной сенситизации) болевого синдрома.

В результате проведенной работы получены новые данные о характере влияния иммуномодуляции на ноцицептивную чувствительность самок крыс в относительно ранние и поздние сроки формирования артрита ВНЧС, что может быть перспективно в плане оптимизации стандартных схем лечения пациентов с соответствующими клиническим проявлениями различных патологических состояний. Тонкие механизмы, лежащие в основе действия препаратов с иммуномодулирующими свойствами на болевую чувствительность, требуют дальнейших исследований.

Заключение

Введение иммуномодулирующего препарата «Имунофан» самкам крыс в относительно ранние сроки формирования артрита височно-нижнечелюстного сустава, вызванного внутрисуставной инъекцией монойодацетата натрия, предупреждает усиление ноцицептивной чувствительности. Применение данного препарата на позднем этапе развития артрита височно-нижнечелюстного сустава приводит к увеличению порога болевой реакции у животных с экспериментальным артритом височно-нижнечелюстного сустава.

Исследование выполнено в рамках государственного задания №122040500027-7.

The study was carried out within the framework of the state assignment No. 122040500027-7.

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.