Влияние психотропных препаратов на активность лейкоцитарной эластазы in vitro

Предметом многочисленных исследований последних лет является изучение роли воспалительных реакций, являющихся составной частью иммунологического ответа организма, в патогенезе психических нарушений [1-7]. Эти реакции, как известно, сопровождаются выработкой специ­фических энзимов, одним из которых является лейкоцитарная эластаза (ЛЭ) - продукт дегрануляционной активности нейтрофилов из семейства сериновых протеаз [2].

Основным субстратом ЛЭ являются структурные белки соединительной ткани и стенок кровеносных сосудов - эластин и коллаген. За счет протеолитической активности ЛЭ способна усиливать проницаемость сосудов и оказывать цитотоксическое действие на эндотелиальные клетки. При патологических процессах в мозге повышенная активность ЛЭ может рассматриваться в качестве патогенетического звена, связанного с нарушением проницаемости гематоэнцефалического барьера (ГЭБ). В этом случае она становится мощным аутодеструктивным фактором [2]. Показана связь между нарастанием активности ЛЭ и остротой психического состояния. Отмечено, что на фоне лечения психотропными препаратами ее активность снижается [8]. Мы предположили, что психотропные препараты, помимо воздействия на селективные рецепторные системы мозга, могут также модулировать активность воспалительных энзимов.

Цель настоящего исследования - оценка влияния нейролептика - хлорпромазина (аминазин) и антидепрессанта - мелипрамина на активность ЛЭ в эксперименте in vitro.

Энзиматическую активность ЛЭ определяли ферментативным спектрофотометрическим методом с использованием специфического субстрата N-терт-бутокси-карбонил-аланин-β-нитрофениловый эфир (BOC-Ala-ONp), разведенного в ацетонитриле в 0,31% концентрации, и оценивали в нмоль/мин·мл (чувствительность метода 40 нмоль/мин·мл) [9]. Оптическую плотность (&Dgr;EBOC/мин) регистрировали с помощью компьютерной программы SWIFT 1000 Reaction Kinetics на спектрофотометре Ultrospec 1100 («Amercham») в течение 3 мин при длине волны 347 нм (что соответствует максимуму поглощения продукта реакции).

Для исследования был выбран один из основных нейролептиков фенотиазинового ряда - аминазин (хлорпромазин), обладающий способностью блокировать α1-адренорецепторы и дофаминовые рецепторы и влиять на серотонинергическую систему [10], а клинически оказывает умеренное антипсихотическое действие [11, 12]. Среди антидепрессантов трициклической группы был выбран мелипрамин (имипрамин), активность которого направлена на коррекцию дисбаланса функций серотонин- и нор­адренергической систем мозга, вследствие чего увеличивается содержание норадреналина и серотонина в синаптических щелях, что клинически проявляется редукцией депрессивной симптоматики и предотвращением экзацербации симптомов депрессивного эпизода [10, 11].

Для изучения возможного влияния психотропных препаратов на активность ЛЭ их добавляли в пул сыворотки крови от 7 здоровых с использованием разных концентраций, включающих дозы в пересчете на терапевтические, используемые в клинике [10, 11].

При изучении влияния аминазина использовались следующие дозы: 1) 1,12·10^–4 М (40 мкг/мл, или 200 мг/сут); 2) 5,6·10^–5 М (20 мкг/мл, или 100 мг/сут); 3) 4,2·10^–5 М (15 мкг/мл, или 75 мг/сут); 4) 2,8·10^–5 М (10 мкг/мл, или 50 мг/сут); 5) 1,4·10^–5 М (5 мкг/мл, или 25 мг/сут); 6) 7,0·10^–6 М (2,5 мкг/мл, или 12,5 мг/сут); 7) 3,5·10^–6 М (1,25 мкг/мл, или 6,25 мг/сут); 8) 1,75·10^–6 М (0,625 мкг/мл, или 3,125 мг/сут).

При изучении влияния мелипрамина исследуемыми дозами были: 1) 9,85·10^–5 М (30 мкг/мл, или 150 мг/сут); 2) 6,31·10^–5 М (20 мкг/мл, или 100 мг/сут); 3) 4,73·10^–5 М (15 мкг/мл, или 75 мг/сут); 4) 3,15·10^–5 М (10 мкг/мл, или 50 мг/сут); 5) 1,58·10^–5 М (5 мкг/мл, или 25 мг/сут); 6) 7,9·10^–6 М (2,5 мкг/мл, или 12,5 мг/сут).

Статистическую обработку данных осуществляли с помощью непараметрического статистического программного обеспечения Statistica 7 для Windows StatSoft., Inc (США), используя Wilcoxon Matched Pairs test при уровне достоверности - p<0,05.

Результаты определения активности ЛЭ сыворотки крови при действии аминазина представлены на рис. 1.

Результаты определения активности ЛЭ сыворотки крови при действии мелипрамина представлены на рис. 2.

Таким образом, в экспериментах in vitro было обнаружено ингибирующее действие изученных психотропных препаратов на активность ЛЭ. Выявлен дозозависимый эффект ингибирующего действия аминазина и мелипрамина. Результаты данного исследования согласуются с предположением U. Meyer [13] о возможном противовоспалительном эффекте нейролептика аминазина.

Таким образом, можно предположить, что спектр действия исследованных нами препаратов (нейролептик и антидепрессант) включает их влияние не только на рецепторы мозга, но и другие механизмы, вовлеченные в патогенез психических заболеваний, в частности воспалительные реакции [1, 6, 7].