Восстановление целостности барабанной перепонки с использованием фетальных фибробластов

Одной из важных задач реконструктивной ЛОР-хирургии является восстановление целостности анатомических образований [1]. Между тем классические методы восстановления целостности барабанной перепонки после травматических перфораций сопряжены с определенными хирургическими трудностями, а также связаны с чрезвычайно плохими условиями питания трансплантата, свободно натянутого над перфорацией, возможностью его смещения или западения [1, 2].

В этой связи впервые в оториноларингологии при лечении больных с перфорацией барабанной перепонки были успешно использованы аллофибробласты человека [1]. Вместе с тем исследования in vitro позволяют считать, что фибробласты у взрослых менее активно синтезируют коллаген, чем фетальные фибробласты [3]. Так, например, исследования пассируемых кожных фибробластов человеческого плода и взрослого показали, что активность фермента пролилгидроксилазы, играющего важную роль в регуляции синтеза коллагена, у фетальных фибробластов до 20 нед гестации значительно выше, чем у фибробластов взрослого. Пролилгидроксилаза в фетальных клетках, в отличие от клеток взрослого, контролируется поли-ADP-рибозосинтетазой — энзимом, участвующим в регуляции опухолевого роста и клеточной репарации. Фетальный механизм коллагенового синтеза подвержен более тонкой регуляции по сравнению с взрослым организмом [4]. Кроме того, матрикс из фетальных фибробластов богат гиалуроновой кислотой, обеспечиващей создание среды для упорядоченного отложения коллагеновых фибрилл, тогда как коллагеновые фибриллы в матриксе взрослых фибробластов выстраиваются менее организованно [5].

Исходя из вышеизложенного, цель исследования — оценка эффективности воздействия фетальных фибробластов на процессы регенерации при посттравматической перфорации барабанной перепонки.

После экспериментальных исследований на животных [6] в рамках научной программы Национального научного медицинского центра «Инновационные технологии в развитии клеточных трансплантаций и восстановления функциональной активности органов и тканей» было принято решение использовать данный метод лечения при ЛОР-патологии. Представляем клиническое наблюдение.

Больной А., 25 лет, поступил 20.04.10 в ЛОР-отделение клиники с посттравматической перфорацией барабанной перепонки. После проведения необходимого обследования пациенту была произведена трансплантация фетальных фибробластов.

Культура фетальных фибробластов получена в условиях лаборатории клеточных технологий по разработанной нами методике из дермы 18—20-недельных плодов человека путем культивирования в среде Iscov («Sigma», США) с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки FBS («HyClone», США). На 14-е сутки культивирования получен монослой фетальных фибробластов, которые были отмыты от компонентов среды и нанесены на коллагеновый матрикс для последующей трансплантации. После анестезии кожи слухового прохода производили деэпителизацию края перфоративного отверстия, после чего на влажную раневую поверхность барабанной перепонки укладывали трансплантат из фетальных фибробластов на коллагеновом матриксе в количестве 2·106 клеток в 0,5 мл физиологического раствора.

Для оценки процессов восстановительной регенерации барабанной перепонки и остроты слуха после клеточной трансплантации проводились отоскопическое и аудиометрическое исследования в динамике.

Осмотр левого уха пациента с помощью микроскопа выявил острую посттравматическую перфорацию барабанной перепонки в натянутой части до 3,3 мм в диаметре с участками кровоизлияния 4-дневной давности (рис. 1 на цв. вклейке).

Аудиометрическое исследование пациента выявило кондуктивную тугоухость слева с костно-воздушным интервалом 30—40 дБ.

После трансплантации фетальных фибробластов активизировались процессы регенерации барабанной перепонки. Максимальное восстановление целостности барабанной перепонки нами отмечено через 1 мес после проведенной терапии. К 1,5 мес с момента трансплантации отмечено практически полное ее восстановление. Барабанная перепонка макроскопически представляла собой тонкую натянутую пленку с выраженными процессами неоангиогенеза (рис. 2 на цв. вклейке).

Наряду с ускорением процессов восстановительной регенерации барабанной перепонки и восстановлением ее целостности происходило и улучшение остроты слуха. Так, анализ аудиометрического исследования выявил значительное улучшение параметров слуха через 6 нед после лечения, а полное восстановление слуха отмечено через 7 нед.

В течение наблюдаемого промежутка времени пациент субъективно отмечал улучшение общего состояния организма, работоспособности.

В общих и биохимических анализах крови пациента, которые выполнялись в контрольных точках (до терапии и через 7, 15, 30 и 45 дней после трансплантации фетальных фибробластов), изменений показателей не отмечено.

1. Трансплантация фетальных фибробластов на коллагеновом матриксе ускоряет регенерацию и восстанавливает целостность барабанной перепонки.

2. Применение фетальных фибробластов существенно улучшает параметры слуха.