Иммуномодулирующая активность адгезивной пленки с хлоргексидином и кетопрофеном в крови больных хроническим генерализованным пародонтитом

Основным источником свободных радикалов в тканях пародонта является «респираторный взрыв» в нейтрофильных гранулоцитах, активированных факторами микробной агрессии. Активные формы кислорода (АФК) служат необходимым условием формирования нейтрофилами внеклеточных ловушек. Недостаточная их продукция определяет меньшую эффективность антибактериальной защиты и способствует микробной инвазии. В то же время высокая концентрация этих высокореактивных молекул обладает повреждающим потенциалом для всех компонентов клеток: фосфолипидов мембран, белков, нуклеиновых кислот. Таким образом, роль нейтрофилов в развитии хронического генерализованного пародонтита (ХГП) в настоящее время оценивается двояко: как гипо-, так и гиперфункция фагоцитов приводит к прогрессированию заболевания [13].

В ходе доклинических испытаний новой адгезивной дентальной пленки «Диплен-дента КПХ» с хлоргексидина биглюконатом и кетопрофеном в нашей предыдущей работе были выявлены модулирующие свойства препарата в отношении метаболической активности нейтрофилов крови здоровых лиц [3, 7].

Задачами настоящего исследования стало определение компонента в составе пленки, ответственного за проявление иммуномодулирующего действия препарата в целом, а также изучение влияния пленки на метаболизм нейтрофилов крови больных хроническим генерализованным пародонтитом.

Известно, что хлоргексидин во всем спектре антимикробных концентраций дозозависимо снижает «респираторный взрыв» нейтрофилов [8]. Этот эффект в большей степени связан с лизисом клеток, чем с ингибированием их специфических функций [10]. В связи с этим в целях оценки иммуномодулирующей способности исследовали полимерную основу адгезивной пленки без включения лекарственных веществ и кетопрофен.

Периферическая кровь 35 здоровых доноров и 21 больного пародонтитом исследована методом хемилюминесцентного анализа (ХЛА), который позволяет оценивать функциональную активность фагоцитов и изучать влияние на нее различных лекарственных веществ [4]. Здоровые лица в возрасте 20—25 лет без системной патологии и воспалительных изменений пародонта осмотрены в Клинике специальных медицинских профосмотров Москвы. Пациенты обследованы в стоматологической клинике «ИнСтом» Москвы: мужчины и женщины в возрасте от 30 до 65 лет с диагнозом «хронический генерализованный пародонтит легкой и средней степени тяжести без серьезной сопутствующей патологии», не получавшие пародонтологического лечения и не принимавшие антибактериальных и/или противовоспалительных препаратов внутрь в течение последних 3 мес.

При проведении ХЛА использованы разведение крови 1:8, раствор люминола в концентрации 5·10^–5 М в качестве активатора, опсонизированный зимозан (SIGMA, США) для стимуляции клеток. Рабочие растворы полимерной основы «Диплен-дента» и пленки «Диплен-дента КПХ» получены растворением 10 см² пленки в 10 мл раствора Хенкса. Рабочий раствор кетопрофена лизиновой соли был приготовлен из готовой лекарственной формы Артрозилен («Dompe Farmaceutichi S.p.A.», Италия) в концентрации, соответствующей среднему содержанию в пленке «Диплен-дента КПХ», — 0,02 мг/мл. Использовали разведения рабочих растворов 10^–8. Анализ хемилюминесценции (ХЛ) исследуемых образцов проводили в полистироловых кюветах на хемилюминометре LUM-100 (ДИСофт, Россия) с программным обеспечением PowerGraph 3.0. при температуре 37 °C.

Статистическую обработку полученных данных проводили с помощью пакета статистических программ Statistica v.13. Оценивали следующие показатели: S_спонт — величину площади под кривой спонтанной люминолзависимой ХЛ; S_стим — величину площади под кривой люминолзависимой ХЛ, индуцированной опсонизированным зимозаном; I=S_стим/S_спонт — индекс клеточной активации и его изменение под влиянием исследуемых растворов — I/I (О).

На первом этапе проанализированы показатели хемилюминесценции крови здоровых лиц в присутствии растворов пленки и ее компонентов. Выявлена обратная сильная корреляция относительного изменения индексов активации I/I (O) с исходным индексом I (O): коэффициент Спирмена для полимерной основы и пленки с хлоргексидином и кетопрофеном составил r= –0,824370 и r= –0,812045 соответственно. В отношении кетопрофена обнаружена слабая обратная корреляция (r= –0,350700).

С помощью кластерного анализа из всей совокупности были выделены две группы. В 1-ю группу вошли 16 человек с исходно низким индексом активации I (O) <21,0, во 2-ю группу — 19 человек с исходно высоким I (O) >36,0.

В 1-й группе под влиянием полимерной основы выявлено уменьшение спонтанной ХЛ в 1,8 раза (р=0,039), рост стимулированной ХЛ в 1,4 раза (р=0,011) и увеличение индекса активации в 1,7 раза (р=0,006). В присутствии раствора пленки с хлоргексидином и кетопрофеном спонтанная ХЛ уменьшилась в 1,3 раза (р=0,020), стимулированная ХЛ увеличилась 1,3 раза, но различия не достигли статистической значимости (р=0,088), индекс активации повысился в 1,8 раза (р=0,016). Кетопрофен в выбранной концентрации не оказывал статистически значимого влияния на показатели ХЛ.

Исходно низкая спонтанная реакция нейтрофилов во 2-й группе повышалась под действием полимерной основы, кетопрофена и пленки с хлоргексидином и кетопрофеном в 3,3 (р=0,0002), 2,0 (р=0,020) и 2,1 (р=0,0004) раза соответственно. Индекс активации статистически значимо уменьшался в присутствии всех исследуемых растворов в 3,0 (р=0,0001), 1,4 (р=0,013) и 2,1 (р=0,0003) раза соответственно (табл. 1).

Таким образом, модулирующее воздействие адгезивной пленки с хлоргексидином и кетопрофеном на нейтрофилы крови, вероятно, связано с влиянием полимерной основы пленки.

На втором этапе для ХЛА использовали периферическую кровь больных ХГП легкой и средней степени тяжести.

Изменение индекса I/I (O) имело обратную сильную корреляцию с исходным I (O) в присутствии полимерной основы и пленки с хлоргексидином и кетопрофеном: коэффициент Спирмена r= –0,849624 и r= –0,838596 соответственно. Для кетопрофена выявлена слабая обратная корреляция (r= –0,263158).

В 1-ю группу вошли 14 человек с исходным индексом активации I (O) <12,8, во 2-ю группу — 7 пациентов с I (O) >23,5. Распределение индекса активации у здоровых лиц имело меньшую плотность и было более равномерным (рис. 1).

В 1-й группе в присутствии растворов полимерной основы и пленки с хлоргексидином и кетопрофеном наблюдался рост стимулированной ХЛ в 1,2 (р=0,026) и 1,4 (р=0,035) раза соответственно. Индекс активации увеличивался в 2,4 (р=0,002) и 2,5 (р=0,005) раза под влиянием растворов полимерной основы и пленки с хлоргексидином и кетопрофеном соответственно. Кетопрофен статистически значимо не влиял на показатели ХЛ.

Во 2-й группе растворы полимерной основы и пленки с хлоргексидином и кетопрофеном повышали спонтанную ХЛ в 1,7 (р=0,028) и 1,6 (р=0,028) раза и уменьшали индекс активации в 2,0 (р=0,018) и 1,7 (р=0,028) раза соответственно. Раствор кетопрофена снижал индекс активации, однако статистическая значимость различий не достигнута (р=0,310) (табл. 2).

Таким образом, адгезивная двухслойная стоматологическая пленка, включающая в качестве активных компонентов хлоргексидина биглюконат и кетопрофен, обладает модулирующим действием на метаболическую активность нейтрофилов крови пациентов, страдающих ХГП.

При сравнении результатов ХЛА крови здоровых лиц и больных ХГП были сделаны следующие выводы:

1. Модулирующее действие адгезивной пленки с хлоргексидином и кетопрофеном и ее полимерной основы на активность гранулоцитов крови в зависимости от исходного индекса активации имело одинаковые закономерности и описывалось сходными функциями у здоровых лиц и больных ХГП. Графики зависимостей изменения индекса активации от исходного его значения под их влиянием у здоровых лиц и больных ХГП практически соответствовали друг другу, демонстрируя повышение индекса в 1-й группе и уменьшение во 2-й группе. Однако точка разделения на группы по направленности влияния на индекс активации у больных ХГП находилась в области более низких его значений, чем у здоровых лиц (рис. 2).

2. Статистически значимого различия по коэффициенту модуляции I (КПХ)/IО между больными ХГП и здоровыми лицами не наблюдалось.

3. У больных ХГП в 1-й группе для пленки, включающей хлоргексидин и кетопрофен, верхний квартиль и максимум коэффициента модуляции были выше, чем для полимерной основы (7,94 и 3,58 против 5,51 и 2,46), а подъем графика функции был более крутым (см. рис. 2, б), поэтому, возможно, модулирующий эффект полимерной основы при ХГП потенцируется в присутствии кетопрофена.

Различия в функции нейтрофилов при хроническом пародонтите связаны как с влиянием заболевания, так и с особенностями реактивности организма, которые во многом определяют тип течения воспалительной реакции. При гиперергическом типе фагоцитарная активность в 3—5 раз выше нормы, при гипергическом типе, напротив, активность нейтрофилов понижена, эти различия сохраняются и после ликвидации острых воспалительных явлений [1, 11].

Определено соответствие показателей ХЛ типам реактивности: для гипергического типа характерен низкий индекс активации; для гиперергического — высокий. Применение иммуномодуляторов у больных вялотекущими воспалительными заболеваниями челюстно-лицевой области, т. е. с гипергическим типом реактивности, позволяет сократить сроки лечения и избежать тяжелых осложнений [6]. Другие авторы также обращают внимание на необходимость учитывать повышенные и пониженные показатели ХЛ у пациентов и проводить лечение с дифференцированным подходом: с антиоксидантным или прооксидантным компонентом [2].

Согласно данным О.А. Коленчуковой [5], индекс активации можно использовать для прогнозирования эффективности лечения воспалительных заболеваний. На примере острого риносинусита эмпирическим путем было найдено значение, признанное автором пороговым: при более высоком индексе активации прогнозировалась высокая эффективность, при более низком — низкая или отсутствие эффективности стандартной терапии.

Таким образом, можно предположить, что 1-я и 2-я группы в настоящем исследовании характеризуют гипергический и гиперергический типы реактивности соответственно.

M. Zawrotniak и соавт. [14] представлены данные о снижении под влиянием нестероидных противовоспалительных препаратов интенсивности респираторного взрыва нейтрофилов за счет угнетения их дегрануляции. Из полученных нами данных по всей совокупности в группе здоровых лиц кетопрофен снижал индекс активации в 1,7 раза (р=0,011). Однако при рассмотрении по группам уменьшение индекса наблюдалось только в группе с высокой реактивностью.

В.Н. Царев и соавт. [8] изучили влияние полимерной основы адгезивной пленки в исходной концентрации и в двукратном разведении на активность гранулоцитов. Для исследования мы выбрали меньшую концентрацию раствора — в разведении 10^–8, не обладающую прооксидантными или антиоксидантными свойствами. Тем не менее полученные нами результаты по всей совокупности измерений согласуются с данными цитируемых авторов: препарат увеличивает спонтанную ХЛ (однако статистическая значимость не достигнута), не влияет на стимулированный ХЛ-ответ и достоверно уменьшает индекс активации при его исходно высоких значениях как у здоровых лиц, так и у больных ХГП.

У больных ХГП с низкой реактивностью пленка «Диплен-дента КПХ», содержащая в качестве активных компонентов хлоргексидина биглюконат и кетопрофен, статистически значимо увеличивает стимулированную хемилюминесценцию (р=0,001), повышает индекс активации (р=0,005) фагоцитов крови. Можно предположить, что при гипореактивном типе течения воспалительной реакции это повышает резервные возможности фагоцитов. Влияние препарата на нейтрофильные гранулоциты, мигрировавшие из кровеносного русла в полость рта, также может быть благоприятным, поскольку известно, что они характеризуются сниженной продукцией активных форм кислорода в присутствии ротовой жидкости [12]. У пациентов с высокой реактивностью пленка статистически значимо снижает индекс активации (р=0,028). Это может способствовать сохранению энергетических ресурсов фагоцитов и предотвращению альтерации тканей в условиях гиперергического воспаления. Иммуномодулирующий эффект пленки связан с наличием в ее структуре полимерной основы и потенцируется кетопрофеном в случаях низких значений индекса активации.

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

The authors declare no conflicts of interest.

Сведения об авторах

Ушаков Р.В. — https://orcid.org/0000-0003-4821-1758

Герасимова Т.П. — https://orcid.org/0000-0002-3858-4561

Николаев В.А. — https://orcid.org/0000-0003-1889-3137

КАК ЦИТИРОВАТЬ:

Ушаков Р.В., Герасимова Т.П., Николаев В.А. Иммуномодулирующая активность адгезивной пленки с хлоргексидином и кетопрофеном в крови больных хроническим генерализованным пародонтитом. Стоматология, 2019;98(5):-10. https://doi.org/10.17116/stomat201998051