Микробиологический мониторинг ротовой жидкости у клинически здоровых детей

Формирование здорового поколения - приоритетная задача современного здравоохранения [2, 6]. Микробное сообщество различных биотопов детского организма достаточно быстро реагирует на воздействие экзогенных и эндогенных факторов качественными и количественными изменениями при отсутствии клинических симптомов и жалоб [1, 5, 7]. Численность микроорганизмов или их индикаторные свойства могут рассматриваться как параметры, позволяющие тестировать интенсивность внешнего и внутреннего воздействия [4, 9]. Классическое бактериологическое исследование является "золотым стандартом" микробиологии и позволяет изучить широкий спектр параметров микробиоценозов, однако оно длится достаточно долго, является трудоемким и экономически затратным. Выявление наиболее часто встречающихся изменений в различных биотопах желудочно-кишечного тракта (ЖКТ), выбор более доступного для исследования биоматериала у клинически здоровых детей имеет большое практическое значение [8, 10].

Мы поставили перед собой задачу - изучить видовой и количественный состав микробиоценоза ротовой жидкости (РЖ) и кишечника у клинически здоровых детей и подростков для выявления микробных маркеров экологического неблагополучия и оценки резервов адаптации.

Исследование явилось компонентом научно-исследовательской работы (НИР) "Проблемы формирования здоровья детей подросткового возраста в современных социально-средовых условиях" в рамках научной платформы "Педиатрия"; НИР проводится во исполнение приказа МЗ РФ №281 от 30.04.13.

Качественные и количественные параметры микробиоценозов РЖ и фекалий оценивали у 74 лиц мужского и женского пола разного возраста. В 1-ю группу вошел

31 человек в возрасте 12-16 лет (16 девочек, 15 мальчиков), во 2-ю - 43 студента I курса ТГМА 17-18 лет

(6 юношей и 37 девушек).

Исследование проводилось с разрешения Этического комитета ТГМА. У всех испытуемых получено информированное согласие на сбор материала. Ответы на вопросы анкеты содержали сведения об отсутствии хронических заболеваний ЖКТ и других систем органов, данные семейного анамнеза и др. Все указанные лица были осмотрены педиатром и узкими специалистами (стоматолог, оториноларинголог, хирург, эндокринолог); проводились функциональные исследования (антропометрия, физиометрия, соматоскопия, кардиореспираторные нагрузочные пробы, спирография, УЗИ щитовидной железы и органов брюшной полости, 12-канальная ЭКГ, энцефалография).

В целях микробиологического мониторинга РЖ собирали в стерильные одноразовые пластиковые контейнеры утром, натощак, перед проведением процедуры гигиенического ухода за полостью рта. Видовой и количественный состав микрофлоры исследовали с использованием классических бактериологических методов [3]. Для культивирования применяли питательные среды: 5% кровяной Columbia Agar, Sabouraud Dextrose Agar, маннит-солевой агар с добавлением эмульсии куриного желтка, стрептококковый агар, хромогенный агар для грибов рода Candida (Himedia), среду Эндо (Оболенск). Посевы инкубировали при температуре 37 °С в течение 24-48 ч в

аэробных, микроаэрофильных и анаэробных условиях с использованием микроанаэростатов (BBL) и газогенераторных пакетов Gas Pack Plus (BBL). Количество бактерий определяли путем подсчета колониеобразующих единиц (КОЕ) на 1 г фекалий или 1 мл РЖ (lg КОЕ/г, lg КОЕ/мл).

Для статистической обработки использовали стандартный пакет программ Excel и определяли средние значения, стандартное отклонение, стандартную ошибку.

В ходе бактериологического анализа РЖ было установлено, что у испытуемых 1-й группы в 48,4% случаев, а во 2-й группе - в 46,5% случаев отмечались компенсированные дисбиотические сдвиги, характеризующиеся снижением содержания лактобацилл и бифидобактерий и незначительным количественным преобладанием 1 вида условно-патогенной микрофлоры (УПМ). Качественные параметры микробного пейзажа РЖ в разных возрастных группах не имели существенных различий и были представлены микроорганизмами родов

У детей 1-й возрастной группы Staphylococcus spp. определялся в 64,5% случаев в количестве от 1 до 5,48 lg КОЕ/мл, в среднем - 3,12±1,07 lg КОЕ/мл; S. aureus - в 61,3% случаев в количестве от 1 до 4 lg КОЕ/мл, в среднем - 2,59±0,71 lg КОЕ/мл. S. epidermidis и другие коагулазо­отрицательные стафилококки - в 66,7% случаев, и их количество колебалось от 1,69 до 3,3 lg КОЕ/мл, в среднем - 2,19±0,54 lg КОЕ/мл; дрожжеподобные грибы рода Candida - в 32,3% случаев в количестве от 1,18 до 3 lg КОЕ/мл, в среднем - 1,79±0,64 lg КОЕ/мл; в 55,6% случаев положительных образцов была идентифицирована

C. albicans; представители рода Lactobacillus выделены в 29,03% образцов в количестве от 1,14 до 3,2 lg КОЕ/мл, в среднем - 1,95±0,7 lg КОЕ/мл. В РЖ количество лактобактерий составило <3 lg КОЕ/мл в 95,5% образцов и <2 lg КОЕ/мл - в 86,4%. Микроорганизмы рода Bacillus выделены в 25,8% образцов в количестве от 1,69 до 2,78 lg КОЕ/мл, в среднем - 2,14±0,37 lg КОЕ/мл (см. табл. 1

У 2 (6,5%) обследованных детей была обнаружена Klebsiella pneumoniae. У всех обследованных 1-й группы в РЖ отсутствовали патогенные представители семейства Enterobactericeae и гемолитические эшерихии. Количество лактозонегативных эшерихий, эшерихий с нормальной ферментативной активностью и клостридий в РЖ не превышало допустимых значений.

Во 2-й возрастной группе микроорганизмы рода Lactobacillus определялись в 55,8% образцов РЖ. Количество лактобацилл колебалось от 2,6 до 5,4 lg КОЕ/мл, в среднем - 3,79±0,72 lg КОЕ/мл. Бактерии рода Bacillus выявлены в 79,1% образцов в количестве от 2,48 до 5,78 lg КОЕ/мл, в среднем - 3,98±0,78 lg КОЕ/мл. Общее количество коагулазоположительных и коагулазоотрицательных стафилококков колебалось от 2,3 до 10,56 lg КОЕ/мл, в среднем - 5,29±1,9 lg КОЕ/мл. Микроорганизмы рода Staphylococcus были выделены в 95,3% случаев. S. aureus идентифицирован в 62,8% случаев в количестве от 2,3 до 5,78 lg КОЕ/мл, в среднем - 3,57±0,99 lg КОЕ/мл. S. epidermidis и другие коагулазоотрицательные стафилококки обнаружены в 86% образцов, количество их колебалось от 2 до 4,55 lg КОЕ/мл, в среднем - 3,35±0,84 lg КОЕ/мл. Дрожжеподобные грибы рода Candida были выделены в 67,4% случаев в количестве от 2 до 5,9 lg КОЕ/мл, в среднем - 3,64±1,06 lg КОЕ/мл.

При сравнении результатов бактериологического исследования РЖ у испытуемых разных возрастных групп оказалось, что во 2-й возрастной группе достоверно чаще выделялись микроорганизмы родов Lactobacillus, Staphylococcus, Candida и Bacillus, и количество их было достоверно большим, чем у детей 1-й группы (см. табл. 1

При бактериологическом анализе кала у детей 1-й группы нормобиоценоз и дисбиоз II степени был выявлен в 22,2% случаев, дисбиоз I степени - в 55,6% (табл. 2

Во 2-й группе нарушения, соответствующие I степени дисбиоза, выявили у 28,6% детей, II степени - у 52,4%, III степени - у 4,8%, т.е. дисбиоз в целом обнаружен у 85,8% лиц этой группы. Таким образом, дисбиоз II степени достоверно чаще выявлялся во 2-й группе, а I степени - в 1-й (см. табл. 2

S. aureus выявлен в образцах РЖ и кале. Дрожжеподобные грибы рода Candida определялись у 10 (47,6%) студентов в количестве 4,4±0,92 lg КОЕ/г, что достоверно чаще, чем в 1-й группе.

Таким образом, в биотопах ЖКТ клинически здоровых детей и подростков разных возрастных групп выявлены изменения качественных и количественных параметров микробиоценозов, характеризующиеся снижением содержания индигенной микрофлоры и увеличением количества представителей УПМ. Наиболее часто выявлялись микроорганизмы родов Staphylococcus, Bacillus и Candida, количество которых с возрастом достоверно увеличивалось. Микроэкологические изменения в разных биотопах ЖКТ тесно взаимосвязаны между собой, дисбиотические изменения возникают на различных уровнях ЖКТ у одних и тех же детей. РЖ как более доступный для сбора и проведения бактериологического исследования биоматериал может быть использована для оценки состояния микроэкологии ЖКТ и своевременного выявления групп риска с последующим проведением адекватной коррекции на стадии функционального дисбаланса.