Особенности основных иммунологических показателей у женщин с неразвивающейся беременностью

Научный интерес к проблеме потери беременности не угасает в связи с появлением новых диагностических возможностей, позволяющих уточнить этиологические факторы и по-новому подойти к выяснению ее патогенетических звеньев. По данным В.Е. Радзинского и соавт. [4], случаи невынашивания беременности составляют от 10 до 25% всех желанных беременностей и, к сожалению, не имеют тенденции к снижению. Неразвивающаяся беременность (НБ) в структуре репродуктивных потерь составляет 10-20%, а среди самопроизвольных выкидышей на ранних стадиях - 45-88,6% [3].

В настоящее время не вызывает сомнения важная роль иммунных факторов в обеспечении репродуктивного здоровья и в развитии патологии репродукции [6]. Установлено, что для нормального течения процессов имплантации, роста и развития эмбриона необходимо создание в эндометрии матери состояния локальной иммуносупрессии (S. Crouch и соавт., 1995). В ее реализации имеют значение не только гормональные влияния, но и миграция лимфоидных клеток из костного мозга с последующим становлением иммуносупрессорных свойств децидуальной ткани [2, 8].

Приблизительно у 25% женщин с необъяснимой привычной потерей беременности обнаружены усиление иммунного и воспалительного ответов на внедрение трофобласта в стенку матки и преимущественная секреция эмбриотоксических цитокинов Th1-лимфоцитами (интерлейкин-1, γ-интерферон, ФНО-α). Клетки, ответственные за секрецию этих эмбриотоксических факторов, экспрессируют маркеры CD56+ и CD3+. Патология беременности при иммунном конфликте, вероятнее всего, происходит в результате связывания цитотоксических антител с эмбриональными антигенами, с последующей активацией системы комплемента и развитием цитотоксических и фагоцитарных клеточных реакций, приводящих к разрушению эмбриона [1]. Повышенная продукция провоспалительных цитокинов Th1-лимфоцитами приводит к избыточному воспалению как в отсутствие инфекции, так и при персистирующей инфекции, что влечет за собой нарушения взаимодействия клеток, в результате чего имплантация может стать неполной, а глубина инвазии чрезмерной или недостаточной [4, 5].

Цель настоящей работы - сравнительная оценка основных параметров иммунного статуса здоровых небеременных женщин, женщин с физиологически протекающей беременностью (I триместр) и женщин с НБ (I триместр).

Материал и методы

Оценка иммунного статуса проведена у 20 практически здоровых небеременных женщин (средний возраст 25,0±1,7 года) - контрольная группа, 16 женщин с физиологически протекающей беременностью (средний возраст 26,5±1,2 года) - группа сравнения и 32 пациентки с неразвивающейся беременностью (средний возраст 26,8±0,7 года) - основная группа. Исследуемые группы статистически значимо не различались по возрасту и сроку беременности.

Критерием включения в исследование было отсутствие на момент обследования острых инфекционных заболеваний, а также иммунопатологических синдромов в анамнезе инфекционного, аутоиммунного и лимфопролиферативного происхождения.

Оценку субпопуляционной структуры лимфоцитов осуществляли стандартным методом прямого двухпараметрического иммунофлюоресцентного окрашивания цельной крови. Данные анализировали в рамках программного обеспечения CellQuest (BD). Оценку пролиферативной активности лимфоцитов осуществляли с помощью реакции бласттранформации лимфоцитов (РБТЛ). Уровень иммуноглобулинов классов G, M, А в сыворотке крови определяли стандартным методом радиальной иммунодиффузии по Манчини (R. Mancini и соавт., 1964). Для оценки фагоцитарной активности нейтрофилов использован традиционный тест латекс-фагоцитоза. Для оценки интенсивности кислородзависимого метаболизма нейтрофилов использованы спонтанный и индуцированный НСТ-тесты в модификации Campbell и Douglas (1997). Статистическая обработка данных произведена в рамках программного обеспечения Statistica для Windows (версия 6.0). Различия считали статистически значимыми при р<0,05.

Результаты и обсуждение

При НБ наряду с нарастании общего содержания лейкоцитов (7,32±0,80·10⁹/л) наблюдались снижение относительного содержания лимфоцитов по сравнению с таковыми в контрольной группе и снижение абсолютного содержания лимфоцитов по сравнению с показателем в группе здоровых беременных женщин (табл. 1).

При этом прослеживалось отчетливое снижение процентного (по сравнению с контрольной группой) и абсолютного (по сравнению с показателем в группе женщин с физиологически протекающей беременностью; р=0,037) содержания Т-лимфоцитов CD3+ в периферической крови у пациенток с НБ, что согласуется с данными других исследователей [1].

У женщин с несостоявшимся абортом по сравнению со здоровыми беременными женщинами снижалось также абсолютное содержание Т-лимфоцитов CD3+CD8+ (антигенспецифические Т-супрессоры/цитотоксические Т-лимфоциты - ЦТЛ). Соотношение между процентным содержанием Т-хелперов CD3+CD4+ и лимфоцитов CD3+CD8+ («иммунорегуляторный» коэффициент) в основной группе имело тенденцию к нарастанию, что согласуется с результатами других исследователей (G. Makrydimas и соавт., 1994). Снижение содержания Т-лимфоцитов CD3+, причем преимущественно Т-лимфоцитов CD3+CD8+, в периферической крови может косвенно свидетельствовать об избыточной миграции лимфоцитов в фетоплацентарную зону для реализации эффекторных функций [7].

Напротив, процентное отношение лимфоцитов CD3+ к CD16+CD56+NK имело тенденцию к нарастанию. По мнению ряда других авторов, повышение содержания лимфоцитов CD16+CD56+ в периферической крови и эндометрии приводит к повышению концентрации провоспалительных цитокинов и снижению содержания регуляторных цитокинов [1]. Процентное содержание В-лимфоцитов CD19+ статистически значимо не изменялось.

Рис. 1

Рисунок 1. Показатели митогенеза лимфоцитов периферической крови у обследованных женщин. Показатели представлены как среднее ± доверительные интервалы при p=0,95.

иллюстрирует показатели митогенеза лимфоцитов в 72-часовых культурах цельной крови. Отчетливо видно, что индекс стимуляции РБТЛ в группе сравнения был статистически значимо снижен вне зависимости от используемого митогена (р≤0,05). Полученные результаты полностью согласуются с данными других исследователей [6, 9, 10], свидетельствующими об угнетении функциональной активности лимфоцитов при беременности, что служит проявлением физиологической иммуносупрессии и обусловлено продуктами фетоплацентарного комплекса, поступающими в кровоток.

У женщин с НБ (основная группа) наблюдались разнонаправленные изменения митогенного ответа лимфоцитов. Так, митогенез при стимуляции PHA-P оставался на уровне такового у женщин группы сравнения. Индекс стимуляции РБТЛ при воздействии СonA и PWM возрастал и статистически значимо не отличался от такового в контрольной группе (небеременные женщины).

Таким образом, учитывая «спектр» активируемых митогенами популяций лимфоцитов, можно предположить, что при НБ наблюдается снижение супрессорных воздействий преимущественно на Т-лимфоциты CD4+.

Уровень сывороточных иммуноглобулинов в изучаемых группах иллюстрирует табл. 2.

Отмечено статистически значимое снижение уровня сывороточных иммуноглобулинов у женщин во время беременности, что еще раз подтверждает общепризнанное мнение о наличии иммуносупрессии при беременности. При сравнении основной группы женщин и группы здоровых беременных выявлено статистически значимое повышение уровня сывороточного IgM.

Следует отметить, что в детальном исследовании W. Amino и соавт. (1978) равномерное снижение уровней сывороточных иммуноглобулинов всех классов наблюдалось только во II и III триместрах беременности.

В основной группе женщин наблюдались выраженные нарушения функциональных свойств нейтрофилов. Фагоцитарная активность нейтрофилов имела отчетливую тенденцию к снижению по сравнению с этим показателем в контрольной группе и была статистически значимо ниже, чем в группе женщин с физиологической беременностью (рис. 2).

Рисунок 2. Показатели фагоцитарно-метаболической активности нейтрофилов периферической крови у обследованных женщин. Показатели представлены в % от значений контрольной группы (100%) как среднее ± доверительные интервалы при p=0,95.

Наблюдалось резкое возрастание базального уровня кислородзависимого метаболизма, показатели которого, несмотря на значительную вариабельность, статистически значимо превышали таковые как в контрольной группе, так и в группе сравнения. В то же время «индуцибельность» кислородзависимого метаболизма фагоцитов практически не отличалась от таковой в контрольной группе и была статистически значимо ниже, чем у здоровых беременных женщин. Полученные результаты можно интерпретировать как спонтанную гиперпродукцию активных форм кислорода нейтрофилами на фоне неадекватно низкой реактивности кислородзависимых бактерицидных систем. В этой связи следует подчеркнуть, что избыточная продукция реактивных интермедиатов кислорода нейтрофилами является пусковым фактором развития повреждения эндотелия как на местном, так и на системном уровне, приводит к гиперкоагуляции [2], а при беременности может привести к гемодинамическим расстройствам и нарушению микроциркуляции в фетоплацентарной зоне [11].

Выводы

1. У женщин с НБ в I триместре при сравнении со здоровыми небеременными женщинами и женщинами с физиологически протекающей беременностью выявляются нарушения иммунного статуса: снижается содержание Т-лимфоцитов CD3+ (преимущественно супрессорных клеток CD3+CD8+/цитотоксических) в периферической крови, уменьшается супрессия митотической активности лимфоцитов, снижается фагоцитарная активность нейтрофилов при резком нарастании спонтанной продукции активных форм кислорода.

2. Во время как физиологической, так и неразвивающейся беременности снижается уровень сывороточных иммуноглобулинов по сравнению с таковыми у здоровых небеременных женщин.

3. Все установленные изменения свидетельствуют о нарушении адекватного физиологической беременности баланса между врожденными и адаптивными механизмами иммунитета.