Сайт издательства «Медиа Сфера»
содержит материалы, предназначенные исключительно для работников здравоохранения. Закрывая это сообщение, Вы подтверждаете, что являетесь дипломированным медицинским работником или студентом медицинского образовательного учреждения.

Андосова Л.Д.

Нижегородская государственная медицинская академия

Конторщикова К.Н.

Нижегородская государственная медицинская академия

Куделькина С.Ю.

Медицинский центр "Тонус", Нижний Новгород

Блатова О.Л.

Медицинский центр "Тонус", Нижний Новгород

Михалева О.В.

Медицинский центр "Тонус", Нижний Новгород

Кузнецова И.А.

Областная клиническая больница, Нижний Новгород

Байкова Р.А.

Медицинский центр "Тонус", Нижний Новгород

Генодиагностика папилломавирусной инфекции высокого канцерогенного риска

Авторы:

Андосова Л.Д., Конторщикова К.Н., Куделькина С.Ю., Блатова О.Л., Михалева О.В., Кузнецова И.А., Байкова Р.А.

Подробнее об авторах

Журнал: Российский вестник акушера-гинеколога. 2011;11(2): 13‑15

Просмотров: 366

Загрузок: 2

Как цитировать:

Андосова Л.Д., Конторщикова К.Н., Куделькина С.Ю., Блатова О.Л., Михалева О.В., Кузнецова И.А., Байкова Р.А. Генодиагностика папилломавирусной инфекции высокого канцерогенного риска. Российский вестник акушера-гинеколога. 2011;11(2):13‑15.
Andosova LD, Kontorshchikova KN, Kudel'kina SIu, Blatova OL, Mikhaleva OV, Kuznetsova IA, Baĭkova RA. Gene diagnosis of high cancer risk papillomavirus infection. Russian Bulletin of Obstetrician-Gynecologist. 2011;11(2):13‑15. (In Russ.).

?>

Большой интерес к изучению генитальной папилломавирусной инфекции (ПВИ) обусловлен широкой циркуляцией вирусов папилломы человека (ВПЧ) до 40-80% - среди населения репродуктивного возраста [2]. Более 30 типов ВПЧ способны вызывать поражения аногенитальной области - от остроконечных кондилом до плоскоклеточного рака шейки матки [11, 12]. В связи с этим вопрос ранней диагностики инфицирования ВПЧ остается актуальным и в настоящее время. С появлением полимеразной цепной реакции (ПЦР) возникла возможность не только выявлять ДНК ВПЧ, но и определять его генотипы. Одним из наиболее удобных в настоящее время методов, позволяющих обнаружить вирус, а также дать однозначный ответ на вопрос, каким генотипом ВПЧ произошло заражение, сколько генотипов присутствует одновременно, какова вирусная нагрузка, является метод ПЦР в режиме реального времени (ПЦР-РВ) [8]. Для эпидемиологического и клинического мониторинга выявленных случаев ПВИ важно проводить типирование онкогенных папилломавирусов. Скрининговые тест-системы для выявления ДНК ВПЧ определяют принадлежность папилломавирусов к той или иной группе онкогенного риска без уточнения типа вируса внутри группы. Степень риска развития рака напрямую зависит от принадлежности ВПЧ к тому или иному типу из группы высокого канцерогенного риска (ВКР), а также от инфицирования несколькими типами ВПЧ одновременно [4, 9]. Наиболее онкогенными являются ВПЧ-16, 18, 31, 33 и 45-го типов, среди которых ВПЧ-16 обнаруживается в 70% случаев рака, ВПЧ-18 - в 10%, выявление ВПЧ-31 и ВПЧ-45 при раке достигает 4%, ВПЧ-33 типа - 2% случаев. Таким образом, инфицирование ВПЧ-16 и ВПЧ-18 значительно чаще приводит к развитию рака шейки матки (РШМ) [1, 13]. Типирование ВПЧ позволяет также выявить персистенцию онкогенных папилломавирусов, на которую указывает неоднократное повторное обнаружение одного и того же генотипа вируса [5]. Длительная персистенция ВПЧ-16 и ВПЧ-18 является маркером повышенного риска развития РШМ [3, 10]. Еще одной важной особенностью ВПЧ-тестирования, способствующей повышению специфичности исследования, являются возможность определения количества вируса и введения порога клинической значимости вирусной нагрузки. Показано, что выявление вируса в количестве, не превышающем пороговый уровень, имеет малое клиническое значение, так как свидетельствует о высокой вероятности самостоятельного излечения без применения медикаментозных и хирургических средств [7]. Основаниями для введения порога клинической значимости послужил ряд работ, указывающих на то, что вирусная нагрузка ниже определенного значения («порог значимости») не встречается в образцах тяжелой дисплазии и рака и ассоциирована с регрессией инфекции («клинически незначимое инфицирование»). Нагрузка выше данного порога обозначается как «клинически значимое инфицирование». Кроме того, выделяется второй порог - «порог прогрессии». Вирусная нагрузка выше данного значения обозначается как повышенная и ассоциирована с большей вероятностью наличия цервикальной интраэпителиальной неоплазии (ЦИН) II-III степени или ее развития. На основании проведенных в ЦНИИ эпидемиологии исследований и данных мировой литературы были определены пороговые значения концентрации ВПЧ в образце: 3 логарифма (или 103) геномов ВПЧ на 100 тыс. клеток человека - «порог клинической значимости», 5 логарифмов (105) геномов ВПЧ на 100 тыс. клеток - «порог прогрессии». В ходе признания правильности пороговых значений концентрации ВПЧ (валидации) показано, что введение «порога клинической значимости» позволяет более чем на 20% повысить диагностическую специфичность исследования при сохранении диагностической чувствительности [6].

Цель и задачи исследования: используя метод ПЦР-РВ оценить распространенность, кратность инфицирования различными генотипами ВПЧ ВКР, вирусную нагрузку среди вируспозитивных женщин.

Материал и методы

Всего были обследованы 738 женщин в возрасте от 17 до 60 лет, обратившихся в клиники Нижнего Новгорода по поводу заболеваний шейки матки различного генеза и генитальных инфекций. Материалом для исследования служили образцы эпителия шейки матки, собранные с помощью одноразовых цервикальных цитощеток и помещенные в жидкую консервирующую среду. Для выявления и определения генотипа ВПЧ использовали тест-систему Ампли Сенс ВПЧ ВКР генотип-Fl, Ампли Сенс ВПЧ ВКР скринтитр-Fl. Наборы данных реагентов предназначены для выявления, дифференциации и количественного определения ДНК ВПЧ ВКР 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58 и 59-го типов в клиническом материале методом ПЦР с гибридизационно-флюоресцентной детекцией. Принцип метода основан на одновременной амплификации* (мультикомплекс - ПЦР) в одной пробирке участков ДНК трех типов ВПЧ и участка ДНК β-глобинового гена, используемого в качестве эндогенного внутреннего контроля. ПЦР-анализ на наличие ДНК двенадцати типов ВПЧ проводится в четырех пробирках. Каждый тип регистрируется по своему каналу флюоресценции, что позволяет не только выявлять, но и определять генотип обнаруженного ВПЧ ВКР. Концентрацию ДНК ВПЧ в исследуемых пробах определяли с помощью стандартных кривых, построенных с использованием ВПЧ клонов данных типов. Вирусную нагрузку рассчитывали как количество копий ДНК ВПЧ, выраженное в lg на 105 клеток. Полученный материал исследовали методом ПЦР-РВ с использованием анализатора iQ5 Cycler и комплекта тест-систем.

Результаты и обсуждение

Результаты обследования женщин позволили выявить высокую инфицированность онкогенными папилломавирусами - 546 (74%) пациенток. Для определения зависимости между частотой выделения ВПЧ и возрастом женщины обследуемую группу разделили по возрастным категориям. Наиболее многочисленная группа (437) - женщины от 20 до 30 лет, среди них положительные результаты были установлены у 346 (79,2%). В группе от 31 года до 40 лет (n=138) положительные находки составили 90 (65,2%) женщин. Пациентки моложе 20 лет в настоящем исследовании составили 12 человек, среди них ВПЧ ВКР выявлены у 11 (91,7%). В возрасте старше 40 лет число обследованных женщин было значительно меньше, чем в репродуктивный период (46), однако процент выявлений был высоким - 76,1 (35). Это связано, скорее всего, с продолжающейся сексуальной активностью в эти годы. В возрасте 50-60 лет выявляемость ВПЧ ВКР составляла 40% (4 женщины), снижаясь в 2 раза относительно возрастной группы 20-30 лет. Необходимо отметить, что у пациенток в возрасте до 40 лет отмечалось высокое число выявления ВПЧ ВКР - 78,7%. Эти цифры объясняются эпидемиологическими характеристиками и патогенетическими особенностями ПВИ. У 95 (12,8%) пациенток не был указан возраст; в этой группе ВПЧ ВКР были выявлены у 60 (63,2%) женщин.

Анализ частоты выявления различных генотипов ВПЧ показал, что 56-й и 16-й типы были обнаружены чаще других - в 33 и 15,4% случаев соответственно. Доминировали геноварианты 33-й (68 женщин, 7,1%), 51-й (67, 7,0%), 31-й (65, 6,8%), 39-й (59, 6,1%), 45-й (58, 6,0%). Число случаев остальных генотипов варьировало от 2 до 5%. Кратность инфицирования отдельными типами ВПЧ ВКР показала, что в материале у 54,8% (299) обследованных пациенток присутствовал только один генотип ВПЧ ВКР, у 26,2% (143) было выявлено два генотипа. Три генотипа ВПЧ и более обнаружены при обследовании 104 (19%) женщин: 3 типа - у 62 (11,3%) пациенток, 4 типа - у 26 (4,8%), 5 типов - у 12 (2,2%), 6 типов - у 3 (0,5%), 7 типов - у 1 (0,2%).

При исследовании распределения вирусной нагрузки среди ВПЧ-позитивных лиц (n=715), показано, что число женщин - носительниц клинически значимой концентрации ВПЧ составляло 319 (44,6%), чаще всего встречалась концентрация 3-5 lg на 100 тыс. клеток - у 191 (26,7%) пациентки, далее следовала концентрация 2-3 lg - у 176 (24,6%) и концентрация 1-2 lg - у 74 (10,4%). Число пациенток, имевших клинически значимую концентрацию ВПЧ, было больше, чем таковых с клинически малозначимой концентрацией (319 и 271, или 45 и 38%). У отдельных женщин имелась клинически малозначимая концентрация ВПЧ, что может свидетельствовать о высокой вероятности самостоятельного излечения в этой группе без применения медикаментозных и хирургических средств. Большая группа - 128 (18%) женщин явились носительницей ВПЧ с вирусной нагрузкой, превышающей порог клинической значимости. Это группа, которая нуждается в дальнейшем обследовании и наблюдении.

Выводы

1. Полученные данные подтверждают высокий уровень инфицированности ВПЧ у женщин с различными гинекологическими заболеваниями, что свидетельствует о необходимости проведения скрининговых исследований методом ПЦР для выявления ВПЧ высокого канцерогенного риска при профилактических осмотрах женщин.

2. Определение вирусной нагрузки является новым подходом в диагностике ПВИ, поэтому заслуживает особого внимания.

3. Генодиагностика ПВИ позволяет быстро с высокой чувствительностью и специфичностью выявлять этиологический фактор возможной патологии, определять группы риска онкозаболеваний урогенитального тракта у женщин.

Подтверждение e-mail

На test@yandex.ru отправлено письмо с ссылкой для подтверждения e-mail. Перейдите по ссылке из письма, чтобы завершить регистрацию на сайте.

Подтверждение e-mail