Особенности микрофлоры больных гнойно-воспалительными заболеваниями челюстно-лицевой области

Изучение этиологии фурункулеза выявило важную роль в его развитии различных видов стафилококков и, в первую очередь, Staphylococcus aureus. До последнего времени особенности течения заболевания связывались в основном с различиями в иммунологической реактивности макроорганизма. В то время как для ряда нозологических форм важное значение приобретает способность S. aureus экспрессировать множество потенциальных факторов патогенности, большинство из которых являются видоспецифичными и могут не только самостоятельно вызывать развитие определенных заболеваний, но и осложнять течение и патогенез многих других форм стафилококковой инфекции [5]. К ним относят, прежде всего, стафилококковые энтеротоксины (SEA, SEB, SEC3), токсин синдрома токсического шока (TSST-1) и лейкоцидины (LukS-PV, LukF-PV) и др. [1—4, 6—8].

Таким образом, изучение комплекса свойств возбудителя фурункулеза из гнойного очага и сопоставление полученных данных с микробиологическим статусом тканей, прилежащих к очагу воспаления, позволит определить место и значение биологических свойств инфекционного фактора (S. aureus) в механизме развития фурункула, что является весьма актуальным вопросом.

Цель настоящего исследования — изучение полиморфизма генов S. aureus, детерминирующих факторы патогенности и антибиотикорезистентность при фурункулезе челюстно-лицевой области с объяснением их этиологической и патогенетической основы, а также изучение источников поступления микроорганизма в очаг воспаления.

Отобранные для молекулярно-генетических исследований штаммы S. aureus, выделенные из раневого отделяемого, со слизистой оболочки зева, передних отделов носа и с кожи лица у 45 больных фурункулезом челюстно-лицевой области (основная группа) и 26 пациентов, на момент обследования являющихся клинически здоровыми (контрольная группа), были тестированы на наличие генов факторов патогенности с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). Пациенты обеих групп статистически значимо не отличались между собой по возрасту, социальному статусу и клиническим проявлениям.

Для подтверждения гипотезы о значимой роли биологических свойств S. aureus в патогенезе гнойно-воспалительных заболеваний были подобраны праймеры и изучены гены, детерминирующие синтез факторов патогенности Для амплификации различных фрагментов ДНК был использован метод ПЦР, приводящий за 20—30 последовательных циклов денатурации, отжига праймеров и их элонгации к многократному увеличению числа копий фрагмента ДНК, заключенного между сайтами отжига олигонуклеотидных затравок, подобранных с таким расчетом, чтобы после их отжига на разных цепях молекулы ДНК, синтез соответствующих комплементарных цепей был направлен навстречу друг другу.

Статистическую обработку результатов исследования проводили с помощью пакета программ Statistica for Windows. Использовались методы вариационной, параметрической и непараметрической статистики. Различия в патогенности штаммов определяли с применением двупольных таблиц сопряжения с расчетом критерия χ² с коррекцией по Йейтсу.

Установлено, что штаммы, выделенные из гнойного отделяемого больных основной группы, обладали рядом факторов патогенности, кодируемых определенной последовательностью нуклеотидов: токсин, детерминирующий развитие синдрома токсического шока (TSST-1), стафилококковый энтеротоксин (SEC3), Panton-Valentine лейкоцидин (LukS-PV, LukF-PV), резистентность к метициллину (MecA). Результаты исследования биологических свойств S. aureus отражены в табл. 1.

Молекулярно-генетическое исследование (см. табл. 1) гнойного отделяемого в основной группе больных фурункулезом челюстно-лицевой области позволило выявить преимущественное представительство метициллинрезистентных штаммов S. aureus(MRSA, в 58,54% случаев), экспрессирующих двухкомпонентный цитолитический токсин (PVL), биологический эффект которого определяется действием двух отдельных экзопротеинов — S (lukS-PV в 19,51%) и F (lukF-PV в 58,54% случаев) компонентами. Кроме того, S. aureus, как видно из табл. 2, являются продуцентами токсина синдрома токсического шока (TSST-1, в 2,44% случаях) и стафилококкового энтеротоксина С (SEC3, в 41,46%).

Выявлено наличие бактерионосительства S. aureus на слизистой оболочке зева у 36 (80%), носовых ходов у 33 (73,3%), на коже лица у 32 (71,1%) больных фурункулом челюстно-лицевой области, существенно превышающий уровень данного состояния в группе клинически здоровых лиц 4 (16%) (см. табл. 2).

Сопоставление факторов патогенности стафилококков, послуживших этиологической причиной возникновения фурункула, и штаммов, вегетирующих на слизистой оболочке носовых ходов, зева и на кожных покровах, свидетельствует в пользу их совпадения в большинстве случаев. В то же время для протеинов S. aureus PVL, энтеротоксина С3 и регулятора синтеза MRSA (Agr) характерна статистически значимая обратная связь — при повышенной экспрессии перечисленных факторов S. aureus в гнойном отделяемом отмечается ее снижение в других изучаемых областях. Следует подчеркнуть, что здоровые пациенты контрольной группы также являлись бактерионосителями (S. aureus), подтверждением чего служит выделение патогена со слизистой оболочки носа и зева в 16% случаев, а с кожных покровов в 12% случаев.

Сопоставление внутривидовых характеристик S. aureus, вегетирующих на слизистой оболочке носовых ходов, зева и на коже лица здоровых пациентов контрольной группы, в 100% случаев позволило констатировать совпадение гена mecA, кодирующего метициллинрезистентность стафилококка (MRSA). Однако по генам LukS-PV, LukF-PV, Agr, SEB, IcaAS. aureus, экспрессирующих соответствующие патогенные свойства, различия заключались в одном штамме либо в одной исследуемой области.

Таким образом, полученные результаты позволяют констатировать этиологическую и патогенетическую роль биологических свойств возбудителя в развитии фурункула челюстно-лицевой области, что подтверждает данные литературы об активном участии микробного фактора в воспалительном процессе. Проведенный анализ выявил преимущественное представительство метициллинрезистентных штаммов S. aureus (MRSA, в 58,54%), экспрессирующих цитолитический токсин (PVL-F, в 58,54%) и стафилококковый энтеротоксин С (SEC3, в 41,46% случаев). Следует отметить, что бактериологический метод детекции биологических свойств возбудителя не выявил метициллинрезистентности штаммов S. aureus. Это позволяет сделать вывод о целесообразности использования метода ПЦР для MRSA-скрининга, что существенно снизит частоту нозокомиальных MRSA-инфекций. Одним из ведущих вирулентных признаков S. aureus, определяющих характер течения заболевания (рецидив), по результатам исследования, явилась способность возбудителя экспрессировать на себе цитолитический токсин Panton-Valentine лейкоцидин (PVL-F), а также энтеротоксин С (SEC3), определяемых в 58,54 и 41,46% случаев в гнойном отделяемом у больных основной группы.

Полученные данные подтверждают результаты бактериологического исследования об этиологически значимой роли S. aureus, персистирующего на слизистой оболочке носовых ходов, зева и на коже, в возникновении гнойных поражений мягких тканей лица, а также свидетельствуют о том, что наличие протеинов — PVL, энтеротоксина С3 служит патогенетической основой развития и рецидивирования фурункула челюстно-лицевой области.

Все авторы в равной степени участвовали в подготовке материала.

Конфликт интересов отсутствует.