Сайт издательства «Медиа Сфера»
содержит материалы, предназначенные исключительно для работников здравоохранения. Закрывая это сообщение, Вы подтверждаете, что являетесь дипломированным медицинским работником или студентом медицинского образовательного учреждения.

Копылова О.И.

Институт биохимической физики им. Н.М. Эмануэля РАН

Кураева Т.Л.

ФГУ Эндокринологический научный центр Минздравсоцразвития Российской Федерации, Москва

Лаврикова Е.Ю.

Институт биохимической физики им. Н.М. Эмануэля РАН

Титович Е.В.

ФГУ Эндокринологический научный центр Минздравсоцразвития Российской Федерации, Москва

Никитин А.Г.

Институт биохимической физики им. Н.М. Эмануэля РАН

Смирнова Г.Е.

ФГБУ "Эндокринологический научный центр" МЗ РФ, Москва

Петеркова В.А.

Эндокринологический научный центр, Москва

Дедов И.И.

ФГБУ «Эндокринологический научный центр» Минздрава России

Носиков В.В.

Институт биохимической физики им. Н.М. Эмануэля РАН

Ассоциация полиморфного маркера G6230А гена СTLA4 с сахарным диабетом 1-го типа у больных русского происхождения

Авторы:

Копылова О.И., Кураева Т.Л., Лаврикова Е.Ю., Титович Е.В., Никитин А.Г., Смирнова Г.Е., Петеркова В.А., Дедов И.И., Носиков В.В.

Подробнее об авторах

Журнал: Проблемы эндокринологии. 2012;58(4): 14‑17

Просмотров: 237

Загрузок: 0

Как цитировать:

Копылова О.И., Кураева Т.Л., Лаврикова Е.Ю., Титович Е.В., Никитин А.Г., Смирнова Г.Е., Петеркова В.А., Дедов И.И., Носиков В.В. Ассоциация полиморфного маркера G6230А гена СTLA4 с сахарным диабетом 1-го типа у больных русского происхождения. Проблемы эндокринологии. 2012;58(4):14‑17.
Kopylova OI, Kuraeva TL, Lavrikova EIu, Titovich EV, Nikitin AG, Smirnova GE, Peterkova VA, Dedov II, Nosikov VV. Association of the polymorphous marker G6230A of the CTLA4 gene with type 1 diabetes mellitus in the patients of Russian descent. Problemy Endokrinologii. 2012;58(4):14‑17. (In Russ.).

?>

Cахарный диабет 1-го типа (СД1) — широко распространенное, тяжелое заболевание, приводящее к ранней инвалидности и преждевременной смерти [1]. При СД1 происходит аутоиммунное разрушение b-клеток островков Лангерганса поджелудочной железы, что приводит к полной зависимости больных от экзогенного инсулина, который необходим для регуляции уровня глюкозы в крови. Постоянное введение препаратов экзогенного инсулина продлевает жизнь, но не предотвращает развитие поздних осложнений, которые являются основной причиной ранней смертности больных. В целом средняя продолжительность жизни у заболевших СД1 в детстве на 20 лет меньше средней продолжительности жизни в общей популяции [1].

Развитие СД1 более чем наполовину связано с генетическими факторами. Актуальность изучения молекулярной генетики СД1 обусловлена главным образом возможностью идентификации генов, предрасполагающих к СД1, что существенно для понимания того, какие именно механизмы определяют этот процесс [2].

Ассоциация хромосомной области 2q33 с СД1 впервые была установлена в 1996 г. [3] при анализе сцепления с СД1 группы полиморфных маркеров, расположенных около генов CTLA4 и CD28. Эти гены рассматривались в качестве кандидатов, так как, во-первых, структурная организация данной области генома человека подобна области хромосомы 1 мыши, содержащей локус idd5, который вовлечен в развитие СД у мышей линии NOD. Во-вторых, гены CTLA4 и CD28 кодируют поверхностные рецепторы Т-клеток и играют важную роль в пролиферации этих клеток.

Как известно, активация Т-клетки происходит после связывания с ней комплекса антигена с молекулой HLA вследствие последовательного фосфорилирования гидроксигрупп остатков тирозина нескольких белковых факторов, обеспечивающих передачу сигнала в ядро клетки [4, 5]. Внутриклеточная часть белка CTLA-4 обладает фосфатазной активностью, и CTLA-4, дефосфорилируя соответствующие белковые факторы, понижает эффективность передачи такого сигнала [6], играя таким образом важную роль в формировании «разумного» иммунного ответа.

Ассоциация гена CTLA4 с СД1 установлена с точностью до блока неравновесия по сцеплению, содержащего весь ген. Кроме того, разные уровни ассоциации были обнаружены в случае полиморфного микросателлита (АТ)n, расположенного в 3`-некодирующей области гена, а также в случае однонуклеотидных полиморфных маркеров A49G и C(–318)T.

Расположенному в экзоне 1 полиморфизму A49G соответствует аминокислотный полиморфизм аланин/треонин в сигнальном пептиде молекулы CTLA-4 [7, 8]. Исследования in vitro показали, что у носителей аллеля Ala имеет место пониженный уровень гликозилирования молекулы CTLA-4 в эндоплазматическом ретикулуме, что в свою очередь приводит к снижению содержания молекул CTLA-4 на поверхности клеток [9].

Аллель T полиморфного маркера C(–318)T ассоциирован с более высокой активностью промотора и, следовательно, с повышенным уровнем экспрессии гена CLTA4 [8, 10], что приводит к снижению уровня активации Т-клеток. Таким образом, носительство аллеля T понижает риск развития аутоиммунных заболеваний.

Полный геномный анализ позволил обнаружить еще один маркер гена CTLA4 [11], ассоциированный с рядом аутоиммунных заболеваний (rs3087243—G6230А), в наибольшей степени с тиреоидитом. В недавнем исследовании, проведенном на японской популяции, утверждалось, что полиморфный маркер rs3087243 ассоциирован исключительно с аутоиммунным тиреоидитом, при этом аллель G не имеет прямого влияния на предрасположенность к СД1 [12]. Позднее в трех других исследованиях было доказано, что данный полиморфный маркер ассоциирован с совместным развитием СД1 и аутоиммунного тиреоидита [13—15]. Таким образом, роль полиморфизма rs3087243 в целом пока еще неясна и к тому же до сих пор не исследовалась у больных СД1 русского происхождения.

Ранее у больных русского происхождения с использованием семей с конкордантными и дисконкордантными сибсами были обнаружены сцепление и ассоциация с СД1 полиморфного микросателлита (АТ)n, расположенного в 3`-некодирующей области гена, и полиморфного маркера A49G [16].

Цель настоящей работы — изучение ассоциации полиморфного маркера rs3087243 (G6230А) гена CTLA4 с СД1 методом «случай—контроль» на больших группах больных СД1 и здоровых лиц русского происхождения.

Материал и методы

В работе использовали образцы крови больных СД1 (257 человек) и здоровых лиц (526 человек) русского происхождения, любезно предоставленные сотрудниками ЭНЦ. Использовали термостабильную ДНК-полимеразу Taq производства ЗАО «Диалат» (Москва). Олигонуклеотидные праймеры синтезированы ЗАО «Евроген» (Москва). Флюоресцентные зонды синтезированы ООО «ДНК-Синтез» (Москва). Геномную ДНК выделяли из цельной крови больных посредством экстракции фенолом-хлороформом после инкубации образцов крови с протеиназой К в присутствии 0,1% додецилсульфата натрия [17].

Амплификацию полиморфного участка гена проводили с помощью полимеразной цепной реакции «в реальном времени» на термоциклере ABI 7500 Fast («Applied Biosystems») в 10 мкл реакционной смеси следующего состава: 70 мМ Трис-HCl, pH 8,8, 16,6 мМ сульфат аммония, 0,01% Твин-20, 2 мМ хлорид магния, 200 нМ каждого dNTP, 300 нМ праймеров, 150 нМ зондов,1,5 ед. Taq ДНК-полимеразы, 50—100 нг геномной ДНК. Условия амплификации фрагмента ДНК: 95 °C/2 мин — 1-й цикл; 94 °C/10 с, 56 °C/60 — 40 циклов для полиморфного маркера rs3087243 гена CTLA4. Размер продукта амплификации 102 п.н. Анализ продуктов амплификации проводился методом детекции «по конечной точке» с помощью встроенных средств программного обеспечения версии SDS 1.4.

Статистический анализ распределения частот и генотипов проводили с использованием таблиц сопряженности и критерия χ2. Достоверными считали различия при p<0,05. Для описания относительного риска развития заболевания рассчитывали отношение шансов (OR). Вычисления производили с помощью программы «Калькулятор для расчета статистики в исследованиях «случай—контроль» [18].

Результаты и обсуждение

В нашем исследовании аллель G полиморфного маркера G6230А гена CTLA4 был преобладающим в группах больных и здоровых лиц. Однако частота аллеля А у здоровых лиц существенно превышала частоту аллеля А в группе больных (см. таблицу).

Генотип АА встречался реже в группе больных СД1, чем в контрольной группе (11,3 и 22,1% соответственно), а частота генотипа GG была выше у больных СД1 (44,7 и 37,5% соответственно). Можно сделать вывод, что носители аллеля G и генотипа GG имеют повышенный риск развития СД1, тогда как носители аллеля А и генотипа АА — пониженный риск развития этого заболевания.

Полученные результаты показывают, что полиморфный маркер rs3087243 гена СTLA4 тесно ассоциирован с предрасположенностью к СД1 у больных русского происхождения. Однако трудно решить, какой из четырех изученных к настоящему времени маркеров (полиморфный микросателлит (АТ)n, A49G, C(–318)T и G6230А) гена CTLA4 вносит наибольший вклад в развитие СД1.

Все эти маркеры тесно ассоциированы с СД1 и в то же время не сцеплены между собой. Для маркеров A49G и C(–318)T показана функциональная значимость. У носителей аллеля A (Ala) полиморфного маркера A49G снижено содержание молекул CTLA-4 на поверхности клеток [9]. У носителей аллеля T полиморфного маркера C(–318)T имеет место повышенная активность промотора гена CTLA4 [8, 10], что приводит к снижению уровня активации Т-клеток.

Для двух других маркеров (полиморфный микросателлит (АТ)n и G6230А) функциональная значимость до настоящего времени не обнаружена. Однако это не означает, что они не оказывают влияния на реализацию функций молекул CTLA-4. В данной ситуации при расчете риска развития СД1, по-видимому, следует учитывать совокупное влияние всех изученных маркеров.

Участие авторов:

Концепция и дизайн исследования — А.Г. Никитин, В.В. Носиков, И.И. Дедов, О.И. Копылова

Сбор и обработка материала — Т.Л. Кураева, Г.Е. Смирнова, В.А. Петеркова, Е.Ю. Лаврикова, О.И. Копылова

Статистическая обработка данных — А.Г. Никитин, О.И. Копылова

Написание текста — А.Г. Никитин, О.И. Копылова, В.В. Носиков

Редактирование — В.В. Носиков

Подтверждение e-mail

На test@yandex.ru отправлено письмо с ссылкой для подтверждения e-mail. Перейдите по ссылке из письма, чтобы завершить регистрацию на сайте.

Подтверждение e-mail