АКТУАЛЬНОСТЬ
Энтеровирусная инфекция (ЭВИ) имеет широкий спектр клинических проявлений — от легких респираторных заболеваний до тяжелых неврологических проявлений. Особую озабоченность вызывает энтеровирус D68 (EV-D68), ассоциированный со всплесками тяжелых респираторных и неврологических заболеваний у детей по всему миру. В Российской Федерации случаи EV-D68 регистрируются с 2018 г., однако наборов для дифференциальной диагностики EV-D68 от других энтеровирусных инфекций нет.
ЦЕЛЬ
Разработка и внедрение диагностического набора реагентов для определения РНК энтеровирусов с дифференциацией EV-D68 в биологическом материале человека методом ОТ-ПЦР.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Дизайн специфических олигонуклеотидов для амплификации РНК энтеровирусов видов A/B/C/D и EV-D68 проводили с использованием программы Ugene и ресурса NCBI. Для экстракции РНК использовали комплекты РИБО-преп ЭВ и Магно-Сорб-Комбо ЭВ. Проводили ОТ-ПЦР с детекцией результатов амплификации кДНК энтеровирусов A/B/C/D, EV-D68 и внутреннего контрольного образца на каналах HEX, Cy5 и FAM. Аналитическую чувствительность оценивали с использованием рекомбинантного Ms2 бактериофага, содержащего фрагмент РНК EV-D68. Специфичность оценивали при исследовании панели штаммов вирусов и бактерий. Для оценки диагностических характеристик использовали набор АмплиСенс Human enterovirus-FL и метод секвенирования VP1 гена вируса.
РЕЗУЛЬТАТЫ
Аналитическая чувствительность была оценена на модельных образцах биоматериала человека и составила 1·103 ГЭ/мл для мазков со слизистой оболочки носо- и ротоглотки и цереброспинальной жидкости и 5·103 ГЭ/мл для фекалий. Показано отсутствие перекрестных реакций с РНК близкородственных риновирусов, других вирусов и бактерий. Для оценки диагностических характеристик исследовали 175 образцов клинического материала от пациентов с ЭВИ и 135 образцов, не содержащих РНК энтеровирусов. Наблюдалось полное совпадение результатов с результатами, полученными с использованием ПЦР набора другого производителя, результаты выявления EV-D68 подтверждены секвенированием VP1 гена вируса. Диагностические чувствительность и специфичность составили 100% (86,3—100%, p=0,95).
ВЫВОДЫ
По результатам проведенных испытаний подтверждено, что разработанный набор реагентов имеет высокие аналитические и диагностические характеристики, эффективен и безопасен. Набор зарегистрирован в качестве медицинского изделия для диагностики in vitro, получено регистрационное удостоверение Росздравнадзора №РУ 2024/23935 от 7 ноября 2024 г.