Опыт применения отечественной тест-системы для линейного иммуноблоттинга в лабораторной диагностике сифилиса

Несмотря на очевидную тенденцию к снижению заболеваемости сифилисом в РФ, медико-социальная значимость этой инфекции остается очень высокой, а эффективность и своевременность ее диагностики отнюдь не утратили своей актуальности [1]. По-прежнему актуальна проблема эффективности лабораторных исследований в диагностике сифилиса, в особенности его ранних и скрытых форм.

В практике лабораторных исследований на сифилис особая роль отведена подтверждающим тестам, в частности иммунному блоттингу (ИБ), позволяющему выявлять в исследуемом образце антитела к отдельным антигенам Treponema pallidum.

По мнению Т.И. Долгих, ИБ целесообразно применять в следующих случаях:

1) с целью подтверждения положительных результатов выявления антител класса G и М при иммуноферментном анализе (ИФА), особенно у беременных и пациентов, страдающих аутоиммунными заболеваниями, поскольку у этих групп лиц возможно получение ложноположительного результата ИФА, обусловленного перекрестным реагированием антител, а также у пациентов, анамнестические и клинические данные которых позволяют сомневаться в наличии сифилиса;

2) с целью установления диагноза «врожденный сифилис» (обнаружение IgM к отдельным антигенам или ко всему спектру специфичных антигенов Treponema pallidum с молекулярными массами 15, 17, 41—45 и 47 кДа дает основание для постановки такого диагноза);

3) с целью мониторинга течения сифилитической инфекции на разных стадиях лечения, а также с целью оценки эффективности проводимой терапии;

4) во время диспансерного наблюдения пациентов, перенесших сифилис (особенно при серологической резистентности и аутоиммунном процессе);

5) с целью исключения/подтверждения повторного заражения [2].

Особую значимость ИБ приобретает для уточнения диагноза в тех случаях, когда при предварительном обследовании различные серологические реакции дают противоречивые результаты.

В 2010 г. была зарегистрирована Росздравнадзором и внедрена в практику для использования в качестве подтверждающего теста при лабораторной диагностике сифилиса тест-система для ИБ в формате Line-blot («Лайн-Блот Сифилис» производства ЗАО «ЭКОлаб»), включающая комплекты для выявления антител классов М и G [3, 4]. За прошедшие годы накоплен определенный опыт использования этой системы, в том числе при обследовании пациентов, результаты предварительного тестирования которых не позволяли сделать какое-либо определенное заключение об их состоянии.

При обследовании пациентов с подозрением на сифилис в последние 10 лет был получен ряд сывороток, в предварительных исследованиях которых с использованием реакций микропреципитации (РМП) и пассивной гемагглютинации (РПГА), а также скрининговых иммуноферментных тест-систем (ИФТС) различных производителей получены противоречивые результаты, не позволяющие однозначно диагностировать состояние обследуемых. В связи с этим возникла необходимость дополнительного тестирования указанных образцов на наличие IgM и IgG к отдельным антигенам T.pallidum в обоих комплектах тест-системы «Лайн-Блот Сифилис». Целью настоящего исследования стало обобщение полученных при этом результатов.

Исследовано 54 сыворотки, полученные из ЛПУ Московской области и предварительно охарактеризованные в РМП (с использованием набора реагентов «АгКЛ-РМП» ЗАО «ЭКОлаб»), РПГА («Сифилис-РПГА-тест» ЗАО «ЭКОлаб») и иммуноферментном анализе (ИФА) (с использованием скрининговых ИФТС производства ЗАО «ЭКОлаб», ЗАО «ВекторБест» и ООО «НПО “Диагностические системы”».

Линейный иммуноблоттинг (ЛИБ) выполнен с использованием тест-системы «Лайн-Блот Сифилис» (ЗАО «ЭКОлаб»; комплекты для выявления антител классов М и G в соответствии с требованиями инструкции по применению данной тест-системы).

На первом этапе данной работы было проведено исследование 54 спорных образцов на наличие IgG к отдельным антигенам T.pallidum в комплекте № 1 тест-системы «Лайн-Блот Сифилис» — «Лайн-Блот Сифилис-IgG». Результаты данного исследования приведены в таблице

Из 54 протестированных образцов 35 (65%) показали отрицательный результат (отсутствие IgG к T.pallidum), 17 (31%) — положительный, 2 (4%) — неопределенный.

Далее было проведено исследование всех 54 образцов на наличие IgМ к отдельным антигенам T.pallidum в комплекте № 2 тест-системы «Лайн-Блот Сифилис» — «Лайн-Блот Сифилис-IgМ» (табл. 2).

Из 54 проанализированных образцов 46 (85%) показали отрицательный результат (отсутствие IgМ к T.pallidum), 5 (9%) — положительный, 3 (6%) — неопределенный.

Далее были сопоставлены итоговые результаты исследования всех 54 образцов в обоих комплектах тест-системы «Лайн-Блот Сифилис» (табл. 3).

В итоге из 54 исследованных образцов 4 (7,4%) остались неопределенными, причем в трех из них неопределенными были результаты оценки наличия IgM при отрицательных результатах оценки наличия IgG, а в одном, наоборот, неопределенным был результат оценки наличия IgG при отрицательном результате оценки наличия IgM.

По результатам ЛИБ 29 (53,7%) образцов оказались отрицательными, т. е. в них не были обнаружены ни IgM, ни IgG, а 21 (38,9%) образец — положительным, причем только в одном из них (образце № 6) были обнаружены и IgM, и IgG; в 4 образцах были выявлены IgM при отсутствии IgG, в 1 образце IgM были выявлены при неопределенном результате оценки наличия IgG, в 16 образцах были выявлены только IgG.

Использование иммунного блоттинга в формате линейного блота позволило исключить неопределенность результатов скрининговых исследований на наличие антител к T.pallidum в 50 случаях из 54, что подтверждает высокую диагностическую эффективность тест-системы «Лайн-Блот Сифилис».

Сведения об авторах

Марданлы С.Г. — http://orcid.org/0000-0002-4556-135X

Авдонина А.С. — https://orcid.org/0000-0002-2990-4930

Ротанов С.В. — http://orcid.org/0000-0002-3222-1401

Иванова М.Ю. — http://orcid.org/6000-0002-7696-9809

Помазанов В.В. — http://orcid.org/0000-0002-7336-99

Автор, ответственный за переписку: Марданлы С.Г. —
e-mail: ekolab-president@mail.ru