В последние годы значительно возросло число публикаций, посвященных биохимии ротовой жидкости (РЖ), что связано с разработкой инновационных микрометодов анализа и с открытием новых диагностических маркеров [2, 3, 10]. Известно, что ряд биохимических показателей слюны отражают состояние не только полости рта, но и всего организма, однако РЖ все еще является наименее изученной из всех биологических жидкостей организма [4, 11, 13]. Показано, что после аппликации на зубные ряды растворов кариесогенных углеводов (глюкозы и сахарозы) происходит быстрое снижение водородного показателя рН на зубном налете в результате микробного гликолиза с образованием лактата [11]. Это явление нашло применение в прогнозировании кариеса зубов по состоянию кислотно-основного равновесия смешанной слюны, так как при его нарушении изменяется баланс между процессами минерализации и деминерализации в пользу последней. Согласно решению Всемирной федерации стоматологов [7], молекулярные механизмы метаболических сдвигов при применении калорийных и некалорийных подсластителей и их роль в профилактике кариеса нуждаются в дальнейшем изучении.

Цель работы — изучение активности ферментов, показателей метаболизма белков, углеводов, состояние процессов липопероксидации (ЛПО) в РЖ и ее антиоксидантной активности (АОА) при воздействии кариесогенных сахарсодержаших продуктов и сахарозаменителей.

Нами проведено клиническое обследование 60 практически здоровых студентов-добровольцев медицинского вуза в возрасте от 18 до 23 лет, которые были распределены на 3 группы по 20 человек. Основные этапы исследования: снятие зубного налета со щечной поверхности моляров с помощью ватного тампона и растворение его в пробирке с дистиллированной водой; скрининговое определение содержания лактата в реакции Уфельмана (по интенсивности желтой окраски с реактивом фенолята железа) до и через 15—20 мин после употребления сахарсодержащих продуктов (карамель, рафинад) — 1-я группа, а также через 10—15 мин после использования жевательной резинки Орбит (2-я группа). Контрольная группа не получала сахарсодержащих продуктов и сахарозаменителей. После полоскания полости рта кипяченой водой комнатной температуры собирали РЖ. Использовали современные спектрофотометрические и фотоэлектроколориметрические методы изучения активности ферментов, метаболитов белкового и углеводного обмена [1, 5, 6, 8]. Содержание общего белка (ОБ) определяли методом Лоури, основанным на способности медных производных белка восстанавливать реактив Фолина с образованием окрашенных продуктов реакции, уровень глюкозы — глюкозооксидазным методом, содержание пирувата — динитрофенилгидразиновым методом [1], лактата — энзиматическим колориметрическим методом с помощью набора реактивов «Витал-лактат» (Россия). Активность ферментов трансаминирования — аспартатаминотрансферазы (АСТ) (К.Ф. 2.6.1.1) и аланинаминотрансферазы (АЛТ) (К.Ф. 2.6.1.2) — оценивали с помощью стандартного набора реактивов «Лахема» (Чехия). Активность лактатдегидрогеназы (ЛДГ) (К.Ф. 1.1.1.27) изучали колориметрическим методом с использованием редоксиндикаторов [9]. ЛПО и АОА устанавливали с помощью индуцированной пероксидом водорода и ионами железа хемилюминесценции (ХЛ) [12]. Светосумму ХЛ определяли за 30 с (S₃₀) и 60 с (S₆₀), максимальную вспышку ХЛ (I_max) за исследуемое время — на хемилюминометре «Emilite 1105» (Россия). Оценку общей АОА осуществляли методом ХЛ, определяя коэффициент I_max/S₃₀. Устанавливали также содержание в РЖ белка церулоплазмина (ЦП) как одного из основных антиоксидантов. Количество ЦП (КФ 1.16.3.1) измеряли в реакции окисления парафенилендиамина дигидрохлорида по В.С. Камышникову [5]. Активность гамма-глутамилтранспептидазы (ГГТП) (К.Ф. 2.3.2.2) изучали унифицированным методом с субстратом гамма-глутамил-3-карбокси-4-нитроанилидом по А.И. Карпищенко [8]. Полученный цифровой материал обработан методом вариационной статистики на IBM с использованием программы Biostat и Statistica 6.0. с определением M±m; достоверность различий определяли по t-критерию Стьюдента.

Скрининговое определение лактата показало, что образование молочной кислоты увеличивалось после употребления сахарсодержащих продуктов — фиолетовое окрашивание исходного раствора фенолята железа в реакции Уфельмана сменилось на желтое после добавления раствора, содержащего повторно снятый зубной налет; жевание резинки Орбит, в которой содержатся сахарозаменители — сорбит, аспартат и др., т.е. вещества, не содержащие сахарозу, снижало образование лактата в зубном налете (желтое окрашивание не появлялось, сохранялась фиолетовая окраска).

У лиц, употреблявших сахарсодержащие продукты, установлено достоверное снижение на 57,8% АОА на фоне активации процессов ЛПО в ротовой жидкости (S₃₀ составила 978,4±67,4 кФотон, максимальная вспышка ХЛ — 101,4±4,2 кФотон) по сравнению с таковой в контроле (светосумма ХЛ — 486,6±42,4 кФотон, I_max — 63,9±2,8 кФотон соответственно). Отмечалось адаптивное возрастание количества ЦП — основного антиоксиданта (табл. 1).

Применение жевательной резинки Орбит (2-я группа) сопровождалось тенденцией к возрастанию процессов ЛПО, однако эти данные недостоверны. При этом возрастал уровень антиоксиданта ЦП в РЖ и достоверно повышалась энзиматическая активность ГГТП, что в конечном счете направлено на восстановление антиоксиданта глутатиона.

Выявленные нарушения оксидантно-антиоксидантного баланса коррелировали с количественными сдвигами в уровнях ОБ, креатинина, глюкозы, лактата, пирувата, ферментативной активности ЛДГ, АСТ и АЛТ (табл. 2).

Таким образом, нами подтвержден факт усиления процессов гликолиза в РЖ с образованием лактата после употребления сахарсодержащих продуктов, что сопровождается активацией процессов свободнорадикального окисления (СРО) и снижением антиоксидантной защиты. Сахарозаменители не вызывают достоверных сдвигов процессов ЛПО и способствуют повышению содержания ферментов-антиоксидантов в РЖ.

Результаты исследования могут быть рекомендованы для неинвазивной оценки в стоматологической практике процессов СРО и метаболизма.