Считается, что в регуляции сократительной деятельности матки и развитии акушерской патологии большую роль играет β-адренорецепторный ингибирующий механизм (β-АРИМ), формирующийся, вероятно, под влиянием прогестерона [1, 5, 11]. Его влияние проявляется в том, что во время беременности за счет повышения числа β-адренорецепторов (β-АР) в миоцитах матки [10], а также в результате повышения содержания в крови и околоплодных водах эндогенного сенсибилизатора β-адренорецепторов (ЭСБАР) [11] возрастает способность эндогенных агонистов β-АР тормозить сократительную деятельность матки (СДМ). Перед родами в результате уменьшения эффективности активации β-АР степень ингибирующего влияния β-АРИМ на миоциты матки снижается, что индуцирует родовую деятельность [11]. Предполагается, что нарушение функционирования β-АРИМ может приводить к развитию преждевременных родов, слабости родовой деятельности и других акушерских осложнений [1, 11]. Поэтому в акушерской практике возникает потребность в определении состояния β-АРИМ, в том числе β-адренореактивности миометрия. Ранее были предложены методы ее оценки по β-адренореактивности эритроцитов беременных женщин [2, 3, 7, 8, 12]. Однако до настоящего времени эти методы не нашли применения в клинической практике. Вместе с тем очевидно, что благодаря наличию в эритроцитах α- и β-АР [15], эти безъядерные клетки крови могут быть удобным объектом исследования, позволяющим определять эффективность активации адренорецепторов, а тем самым - адренореактивность висцеральных органов, в том числе матки. Исходя из этих представлений, в 2008 г. было предложено [13] оценивать адренореактивность эритроцитов человека по степени изменения под влиянием адреналина скорости агглютинации эритроцитов в изогемагглютинирующей сыворотке анти-(А+В) у людей с группами крови А, В и АВ. Однако этот метод до настоящего времени не применялся для оценки адренореактивности эритроцитов женщин, находящихся на различных этапах репродуктивного процесса. В связи с этим в работе была поставлена цель - оценить по изменению скорости агглютинации под влиянием адреналина адренореактивность эритроцитов у небеременных женщин в фолликулярную или лютеиновую фазы цикла и у женщин с неосложненным течением беременности (I, II и III триместры) и родов (латентная фаза первого периода).

Исследовали гепаринизированную венозную кровь, полученную в объеме 1-2 мл у 60 женщин с их личного устного согласия и доставленную в научно-исследовательскую лабораторию «Физиология мышц и биологически активных веществ» Вятского государственного гуманитарного университета в пределах 1 ч. Все обследованные женщины были разделены на 6 групп: 1-я группа - 10 небеременных женщин, находящихся в фолликулярной фазе менструального цикла (3-12-й день, в среднем на 6,6±0,9 дня цикла; M±m), она представлена студентками Кировской государственной медицинской академии в возрасте от 18 до 23 лет, в среднем 19,9±0,6 года; 2-я группа - 10 небеременных женщин в лютеиновую фазу цикла (16-27-й день, в среднем 21,2±1,1), она представлена студентками Кировской государственной медицинской академии в возрасте 19-22 года, в среднем 19,8±0,3 года; 3-я группа - 10 беременных женщин в I триместре (5-12 нед, в среднем 8,1±0,8 нед) в возрасте 18-35 лет в среднем 26,3±1,6 года; 4-я группа - 10 беременных женщин во II триместре (14-20 нед, в среднем 17,4±0,5 нед) в возрасте от 20 до 40 лет, в среднем 28,0±2,5 года; 5-я группа - 10 беременных женщин в III триместре (28-37 нед, в среднем 30,2±1,0 нед) в возрасте от 23 до 36 лет, в среднем 29,9±1,6 года. Женщины 3-й, 4-й и 5-й групп наблюдались в женских консультациях № 2 и 7 Кирова; 6-я группа - 10 рожениц в латентную фазу первого периода неосложненных родов (39-40 нед беременности, в среднем 39,6±0,2 нед) в возрасте 25-39 лет, в среднем 29,6±1,6 года. Из них 8 женщин были первородящими, роды проходили в родильном отделении Северной городской клинической больницы.

В исследование не включали женщин, имеющих группу крови 0, а также имеющих в анамнезе острые и хронические соматические заболевания, а среди беременных женщин и рожениц - имеющих какие-либо акушерские осложнения, избыточную массу тела.

Для проведения эксперимента 1 мл крови смешивали с 0,25 мл раствора гепарина (50 ЕД на 1 мл раствора Кребса), т.е. в соотношении 4:1. Адренореактивность эритроцитов определяли по методике В.И. Циркина и соавт. [13] - по изменению времени начала их агглютинации в изогемагглютинирующей сыворотке анти-(А+В) под влиянием адреналина в концентрациях 10^-10, 10^-9, 10^-8, 10^-7, 10^-6 г/мл или раствора Кребса. Для исследования на плоскость наносили 3 капли: 1) каплю гепаринизированной крови, 2) каплю раствора Кребса (контроль) и каплю адреналина в каждой из исследуемых концентраций (опыт) и 3) каплю изогемагглютинирующей сыворотки анти-(А+В). Стеклянной палочкой смешивали первую и вторую капли, а через 10 с к ним примешивали каплю сыворотки и с этого момента определяли время начала агглютинации (ВНА) эритроцитов по появлению ее первых визуальных признаков – «зернышек» агглютината. Во всех 6 группах ВНА оценивали в секундах, при этом значения ВНА при добавлении адреналина выражали в процентах от численных значений ВНА в контроле, т.е. значений ВНА в отсутствие адреналина (при применении капли раствора Кребса). Необходимость выражения ВНА в процентах связана с тем, что в контроле абсолютные значения ВНА варьируют в определенных пределах.

Результаты исследования подвергнуты статистическому анализу с использованием программы SPSS 11.5.0 и BioStat 2009 Professional. 5.8.4. (в тексте они представлены в виде M±m, так как большинство выборок подчиняется нормальному распределению, определяемому по критерию Шапиро-Уилка). Учитывая небольшой объем выборок, различия между ними оценивали по критерию Манна-Уитни, считая их статистически значимыми при р<0,05. Зависимость эффекта адреналина от его концентрации оценивали по критерию ранговой корреляции Спирмена.

Установлено, что ВНА эритроцитов в контроле, т.е. при внесении эритроцитов в изогемагглютинирующую сыворотку с добавлением раствора Кребса, у женщин в фолликулярную фазу менструального цикла составило 18±2 с, в лютеиновую фазу - 15±1 с (различия между ними статистически незначимы, р>0,05). Это позволяет заключить, что у женщин скорость фоновой агглютинации эритроцитов не зависит от фазы менструального цикла. У женщин в I, II и III триместрах беременности ВНА составило соответственно 13±1, 13±2 и 12±2 с. При этом различия с показателями ВНА у небеременных женщин статистически незначимы (р>0,05). В родах ВНА составило 11±1 с, что статистически значимо ниже, чем у небеременных женщин, находящихся в фолликулярной (р<0,01) или в лютеиновой фазе (р<0,05). Таким образом, при физиологическом течении беременности скорость фоновой агглютинации существенно не меняется (см. рисунок)

Показано (см. таблицу и рисунок),

Выявлено (см. таблицу), что у женщин в I триместре беременности (3-я группа) добавление адреналина во всех исследуемых концентрациях не изменяло ВНА. Значения ВНА в присутствии адреналина у женщин этой группы были статистически значимо выше, чем у женщин 1-й группы (р<0,01), и не отличались от значений у женщин 2-й группы (р>0,05). Следовательно, в I триместре беременности, так же как и в лютеиновую фазу цикла, добавление адреналина не повышает скорость агглютинации.

Установлено, что у женщин во II триместре беременности (4-я группа) наличие адреналина в концентрациях 10^-9, 10^-8, 10^-7 и 10^-6 г/мл не снижало ВНА, а в концентрации 10^-10 г/мл увеличивало ВНА до 109% от значения в контроле (р<0,01). Значения ВНА на фоне адреналина у женщин во II триместре беременности были статистически значимо выше, чем у небеременных женщин в фолликулярную фазу цикла (р<0,01), и не отличались от значений, характерных для лютеиновой фазы (р>0,05). Статистически значимые различия между 3-й и 4-й группами характерны только для ВНА на фоне адреналина в концентрации 10^-10 г/мл (р<0,01). Это означает, что добавление адреналина в крови беременных, находящихся во II триместре, способствует снижению скорости агглютинации эритроцитов, но при условии использования его в низких концентрациях.

Выявлено (см. таблицу, рисунок), что у женщин в III триместре беременности (5-я группа) добавление адреналина в концентрациях 10^-10, 10^-8, 10^-7и 10^-6 г/мл статистически значимо увеличивало ВНА. Значения ВНА под действием адреналина (10^-10-10^-6 г/мл) у женщин 5-й группы были статистически значимо выше, чем у женщин 1-й группы (р<0,01), и не различались от показателей у женщин 2-й и 4-й групп (р>0,05). Статистически значимые отличия между значениями ВНА у женщин 5-й и 3-й групп выявлены в опытах с адреналином в концентрациях 10^-9и 10^-7г/мл (р<0,01), а также 10^-6 г/мл (р<0,05). Эти данные указывают на то, что добавление адреналина к крови беременных, находящихся в III триместре беременности, способствует снижению скорости агглютинации эритроцитов по сравнению с таковой у беременных I триместра.

Показано, что у женщин в латентную фазу первого периода родов (6-я группа) присутствие адреналина во всех концентрациях (10^-10-10^-6 г/мл) статистически значимо снижало ВНА эритроцитов. Значения ВНА в 6-й группе статистически значимо отличались от таковых 1-й группы при добавлении адреналина в концентрации 10^-10 г/мл (р<0,05) и при добавлении всех концентраций адреналина (т.е. 10^-10-10^-6 г/мл) - от показателей 2, 3, 4 и 5-й групп (р<0,01). Эти данные позволяют заключить, что в латентную фазу первого периода срочных родов восстанавливается способность адреналина повышать скорость агглютинации эритроцитов.

Нами впервые показано, что фоновая скорость агглютинации эритроцитов у женщин не меняется на протяжении менструального цикла и при беременности, но возрастает (в сравнении с небеременными) в родах. Это мы объясняем известным из публикаций [14] ростом концентрации фибриногена в родах, так как, согласно данным Н.В. Корнеевой [6], фибриноген увеличивает вероятность межэритроцитарного взаимодействия и тем самым скорость агглютинации.

Мы подтвердили ранее полученные нами данные [4, 13] о том, что адреналин способен повышать скорость агглютинации эритроцитов. В частности, это выявлено в отношении эритроцитов женщин, находящихся в фолликулярной фазе цикла, и рожениц. В то же время впервые выявили, что эта способность зависит от гормонального статуса - адреналин не способствует повышению скорости агглютинации эритроцитов женщин, находящихся в лютеиновой фазе менструального цикла и в I триместре беременности. Более того, нами показано, что адреналин приобретает способность снижать скорость агглютинации эритроцитов женщин, находящихся во II и III триместрах беременности, а в родах адреналин вновь восстанавливает способность повышать скорость агглютинации эритроцитов.

Ранее нами в опытах с эритроцитами мужчин было показано, что адреналин повышает скорость их агглютинации [13]. Результаты этих опытов, в которых использовались неселективный блокатор α-АР ницерголин, селективный блокатор альфа2-АР йохимбин, неселективный блокатор β-АР пропранолол и селективный блокатор бета1-АР атенолол, позволили утверждать, что повышение скорости агглютинации эритроцитов под действием адреналина связано с активацией α1-АР. При этом активация α2- и β1-АР не влияет на эту способность, а активация β2-АР препятствует ее проявлению. Полагаем, что полученные в этих опытах сведения о роли соответствующих АР в изменении скорости агглютинации под влиянием адреналина применимы для объяснения изменений адренореактивности эритроцитов у небеременных, беременных и рожениц. В частности, мы считаем, что выявленные нами изменения обусловлены изменением под влиянием прогестерона и эстрогенов числа α1- и β2-АР и эффективности их активации. Наиболее вероятно, что у женщин в фолликулярную фазу цикла, как и у мужчин, в эритроцитах число α1-АР и эффективность их активации выше, чем число и эффективность активации β-АР. Поэтому адреналин повышает скорость агглютинации эритроцитов у этих женщин. В лютеиновую фазу цикла и при беременности (особенно во II и III триместрах) под влиянием прогестерона снижается число и эффективность активации α1-АР и возрастает число и эффективность активации β2-АР. Поэтому адреналин утрачивает способность повышать скорость агглютинации (в лютеиновую фазу и в I триместре беременности) и даже приобретает способность снижать ее (во II и III триместрах). В родах вследствие прекращения влияния прогестерона на клетки организма, в том числе на эритроциты, вновь возрастают число и эффективность активации α1-АР и снижаются число и эффективность активации β2-АР. Все это приводит к тому, что адреналин вновь приобретает способность повышать скорость агглютинации эритроцитов.

В литературе имеются данные о том, что при беременности возрастает содержание ЭСБАР [11] и это связано, как полагают О.В. Колчанова и В.И. Циркин [5], с влиянием прогестерона. Это означает, что ЭСБАР повышает эффективность активации β-АР миоцитов матки и других клеток, в том числе и эритроцитов. Очевидно, что, как и предполагали А.В. Крысова и соавт. [7], ЭСБАР встраивается в мембрану эритроцитов и тем самым повышает эффективность активации их β2-АР. Полагаем, что по этой причине адреналин утрачивает способность повышать скорость агглютинации эритроцитов. Известно также [10], что прогестерон повышает экспрессию гена β-АР в миометрии и тем самым увеличивает число этих рецепторов. Очевидно, что подобная ситуация наблюдается и в костном мозге в отношении β-АР эритроцитов. Поэтому, как мы полагаем, по мере прогрессирования беременности в крови увеличивается процент эритроцитов с высоким содержанием β-АР. Этот процент, вероятно, достигает максимума в III триместре беременности, что проявляется в способности адреналина снижать скорость агглютинации эритроцитов в этот период. Перед родами, когда снижается чувствительность тканей к прогестерону и возрастает чувствительность к эстрогенам, в миометрии и, вероятно, в эритроцитах возрастает число α-АР. В этот период, как показано Е.О. Самоделкиной и соавт. [9], возрастает содержание эндогенного сенсибилизатора α-АР (ЭСААР), что увеличивает эффективность активации α1-АР в миоцитах матки и в других клетках организма, включая эритроциты. Все это приводит к восстановлению способности адреналина повышать скорость агглютинации эритроцитов.

Наши данные об изменении адренореактивности эритроцитов при беременности коррелируют с данными об изменении эффективности активации АР миометрия женщин, которые мы получили ранее. Эти данные установлены в экспериментах с изолированным миометрием женщин. В частности, в них было показано, что адреналин повышает сократительную активность миометрия небеременных женщин (за счет активации α-АР), снижает ее у беременных женщин (за счет активации β2-АР) и вновь повышает ее у рожениц (за счет активации α-АР). Это подтверждает наше представление о том, что характер изменения адренореактивности эритроцитов при беременности и в родах в определенной степени отражает изменение содержания и эффективности активации β-АР и α-АР в миометрии женщин и не противоречит представлению о том, что такая способность эритроцитов зависит от наличия в крови ЭСБАР, ЭСААР и других эндогенных модуляторов адренореактивности. Поэтому полагаем, что оценка α1- и β2-адренореактивности эритроцитов женщин, определяемая по изменению времени агглютинации эритроцитов в присутствии адреналина, может использоваться для определения состояния β-АРИМ. Отметим, что предлагаемая нами методика оценки адренореактивности эритроцитов не позволяет обследовать женщин с группой крови 0, так как в их эритроцитах отсутствуют агглютиногены А и В. Возможно, что использование определенного фитогемагглютинина вместо изогемагглютинирующей сыворотки анти-(А+В) или цоликлона анти-(А+В) позволит в будущем снять это ограничение для использования данной методики в клинике.

1. Скорость фоновой агглютинации эритроцитов женщин, судя по времени начала их агглютинации в изогемагглютинирующей сыворотке на фоне раствора Кребса, не меняется на протяжении менструального цикла и при физиологически протекающей беременности, но возрастает (по сравнению с таковой у небеременных) в родах.

2. Способность адреналина изменять скорость агглютинации эритроцитов зависит от этапа репродуктивного процесса, т.е. от гормонального фона. Так, добавление адреналина в опыте повышает скорость агглютинации эритроцитов у женщин, находящихся в фолликулярной фазе менструального цикла, не изменяет ее у женщин в лютеиновой фазе цикла и у женщин в I триместре беременности, снижает у женщин во II и III триместрах беременности и вновь повышает ее у рожениц.

3. Способность адреналина повышать скорость агглютинации эритроцитов объясняется доминированием эффективности активации α1-АР, что характерно для женщин, находящихся в фолликулярной фазе цикла, и для рожениц. Утрата этой способности или ее инверсия обусловлены доминированием эффективности активации β2-АР у женщин, находящихся в лютеиновой фазе цикла, и у женщин во время беременности.

4. Оценка адренореактивности эритроцитов женщин, определяемая по изменению времени их агглютинации в присутствии адреналина, может использоваться для определения состояния β-адренорецепторного ингибирующего механизма (β-АРИМ).