Воспалительные заболевания матки и придатков у женщин репродуктивного возраста занимают ведущее место среди гинекологической патологии, а частота их возникновения не имеет тенденции к снижению. Известно, что течение и исход воспалительных процессов зависят от индивидуальной генетически обусловленной реактивности организма. Очевидно, что индивиды с определенным HLA-генотипом обладают таким устройством иммунной системы, которое предопределяет характер реакции организма на любой антиген и многие факторы окружающей среды [2]. На основании накопленных данных сформулировано представление об иммунном статусе, функции которого определяются суммарным эффектом активности генов, кодирующих клеточные и гуморальные факторы иммунитета и определяющих однотипный по силе иммунный ответ на наличие широкой группы антигенов [1].

В настоящее время появились единичные исследования по ассоциированности генов HLA с количеством иммунокомпетентных клеток. Показана высокодостоверная ассоциация специфичности HLA-A1 с высоким количеством Т-клеток CD8+ и менее сильная ассоциация HLA-A9 с их низким содержанием у здоровых лиц. Для Т-клеток CD4+ подобных ассоциаций не выявлено [7]. Комбинации общих специфичностей HLA-A*03, -A*02 и -A*01 были ассоциированы с достоверно сниженным количеством Т-лимфоцитов CD8+ при наследственном гемохроматозе. Предложена новая эволюционная гипотеза наследования фенотипа количества Т-лимфоцитов CD8+, ассоциированных с частными гаплотипами HLA [6]. Исследования в этом направлении открывают новые возможности в разработке индивидуального подхода к диагностике, лечению и профилактике процесса хронизации воспалительных заболеваний органов репродуктивной системы у женщин.

В связи с этим нами была поставлена цель исследования: изучить характер ассоциированности относительного содержания в периферической крови хелперов/индукторов (CD4+) и эффекторов/цитотоксических (CD8+) Т-клеток с HLA-генотипом у здоровых жительниц Западной Сибири и у женщин с неспецифическими воспалительными гинекологическими заболеваниями (НВГЗ).

Под нашим наблюдением находились 223 женщины репродуктивного возраста. Из них 81 женщина с воспалительными заболеваниями гениталий (основная группа) и 142 здоровые женщины с нормальной генеративной функцией, составившие 2 контрольных группы: у женщин 1-й контрольной группы (n=112) определяли содержание иммунологических показателей - CD4+ и CD8+, у женщин 2-й контрольной группы (n=30), кроме указанных показателей, определяли генетические - специфичности HLA. Средний возраст больных был 24,6±5,16 года, здоровых - 27,7±5,70 года. Всем больным проводили общее клиническое обследование, бактериоскопию мазков содержимого влагалища и цервикального канала, по показаниям - лечебно-диагностическую лапароскопию. Исследование иммунного статуса - определение общего количества Т-лимфоцитов и их субпопуляций в периферической крови - проводили методом проточной цитофлюорометрии на приборе Becton Dickinson с меченными FITC моноклональными антителами серии ИКО: ИКО86 (клетки CD4+), ИКО31 (клетки CD8+) в соответствии с прилагаемыми рекомендациями. Диагноз вторичного иммунодефицита (ВИД) устанавливали по общепринятым критериям [4]. Учитывали клинические данные и данные анамнеза, а также снижение 2-3 лабораторных показателей одного звена иммунной системы или комбинированные нарушения [5].

Для установления характера ассоциированности специфичностей генов HLA с относительным количеством Т-клеток CD4+, CD8+ в периферической крови были проведены комплексные иммунологическое и иммуногенетическое исследования в группах здоровых лиц и пациенток с гинекологическими заболеваниями воспалительной природы.

Серологическое типирование специфичностей HLA класса I осуществлялось в стандартном лимфоцитотоксическом тесте по методу P. Terasaki (1978) на панели типирующих сывороток. Типирование специфичностей генов DRB1 (HLA класса II) проводилось методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) ДНК с использованием специальных наборов. Геномную ДНК из цельной венозной крови выделяли стандартным фенол-хлороформным методом. Результаты типирования специфичностей гена DRB1 представлены как серологические субтипы HLA по международной номенклатуре Workshop-2004, поскольку часть контрольной группы была типирована серологическим методом [8]. В группу генетического контроля распределения специфичностей HLA в европеоидной популяции населения Западной Сибири (n=341) вошли 143 здоровых женщины [3].

Для математического анализа результатов использовали t-критерий Стьюдента, критерий Вилкоксона-Манна-Уитни, критерий Фишера, критический уровень значимости полученных результатов - p<0,05. Для анализа распределения иммунологических показателей в группах исследования использовали метод квартилей. Производили расчет распространенности антигенов HLA и относительного риска. Оценку генетического сходства небольших популяций проводили с использованием поправки Л.А. Животовского.

Общие признаки воспаления были выражены у всех женщин. При бимануальном исследовании отмечаются болезненные тракции за влагалищную часть шейки матки у 59 пациенток (72,8%), пастозность матки - у 29 (35,8%), болезненность - у 68 (84%); пастозность и болезненность придатков - у 52 (64,2%). Одностороннее поражение придатков диагностировано в 8 случаях (9,9%), двустороннее - в 73 (90,1%). В крови отмечалось достоверное повышение содержания лейкоцитов до 10,31±2 · 10⁹/л, лейкоцитарный индекс интоксикации составлял 4,33±0,34, СОЭ - 21,63±4,46 мм/ч. Положительный С-реактивный белок был определен у 49 (50,52%) больных, уровень фибриногена повышался до 5,75±0,46 г/л. У всех больных мазок из цервикального канала был III и IV степени чистоты, фон мазка - «темный» за счет детрита, цитолиза и обилия смешанной микрофлоры, у 73 (75,26%) женщин в мазке отсутствовали B. vaginalis.

Проводилось иммунологическое исследование в группах здоровых женщин и пациенток с гинекологическими заболеваниями воспалительной природы. Ряды показателей относительного содержания клеток CD4+ или CD8+ в периферической крови, ранжированные по CD4+ и CD8+, разделялись на четыре квартиля. Их обозначали как четыре типа уровней содержания CD4+ и CD8+ в периферической крови: низкий уровень (первый квартиль), средний уровень, состоящий из второго и третьего квартилей, и высокий уровень (четвертый квартиль) (табл. 1).

Для нормального распределения показателей содержания Т-клеток в крови здоровых женщин 1-й контрольной группы было характерно более высокое содержание CD4+, чем клеток CD8+. Иммунорегуляторный индекс (ИРИ) был равен 1,76±0,60. Однако у 17% (n=19) здоровых женщин имелось обратное (инвертированное) соотношение этих субпопуляций, или ИРИ<1,0. Во 2-й контрольной группе отмечалась тенденция к более низкому содержанию клеток CD4+, чем CD8+ (ИРИ=0,89±0,39). Среди женщин, страдающих НВГЗ (основная группа), отмечено достоверное снижение низких значений CD4+ и достоверное повышение высоких показателей содержания Т-клеток CD4+, CD8+ по сравнению с соответствующими уровнями в 1-й контрольной группе, что, вероятно, связано с наличием у них острого воспаления или вторичного иммунодефицита (ВИД).

Диагноз ВИД клинически и лабораторно был установлен у 44 (54,3%) женщин. Клинически подтвержденный ВИД у 18 (85,7%) женщин был связан с низкими показателями содержания клеток CD4+, и у 3 (15,8%) - с их высокими показателями. Среди женщин с низкими показателями содержания клеток CD8+ диагноз ВИД имели 19 (86,4%), а с высокими показателями - 2 (10%).

Проведен иммуногенетический анализ распространенности специфичностей HLA при разных типах уровней содержания (низком, среднем и высоком) клеток CD4+, CD8+ у женщин 2-й контрольной группы в сравнении с показателями группы основного генетического контроля для Западной Сибири (табл. 2).

Установлено, что при низком содержании клеток CD4+ у здоровых лиц достоверно чаще встречались фенотипы HLA-B5/B13 и -B14/B27 по сравнению с таковым в группе генетического контроля для Западной Сибири [3]. Средний уровень содержания CD4+ клеток был ассоциирован со специфичностями HLA-A1 и -B13 в сочетаниях с -A9, -B17 и с фенотипами -A2/A9, и -B5/B17 относительно группы генетического контроля. Высокий уровень содержания клеток CD4+ ассоциировался с фенотипами -B8/B40, -A9/B13, -B22/B27 и -A10/B27.

Низкие показатели содержания клеток CD8+ у здоровых лиц были ассоциированы с антигеном HLA-A1, его сочетаниями с -A10, -B21, -B35 и фенотипами -B12/B40, -B21/B35. Средний уровень содержания клеток CD8+ был ассоциирован с антигеном HLA-B13, его сочетаниями с -A2, -A9, -B12, -B17 и с фенотипами - A2/A9, -B5/B17. Высокий уровень содержания клеток CD8+ ассоциировался с антигеном HLA-A2 и с фенотипами -B5/B13 и -B8/B40. При сравнении низкого и высокого уровней содержания CD8+ клеток со средним уровнем выявлено достоверное преобладание специфичностей -B13 при среднем типе уровня и -A2 среди высоких показателей.

Проведен корреляционный анализ во 2-й контрольной группе, установивший высокий коэффициент корреляции между показателями содержания клеток CD8+ и специфичностями HLA-A1, -A2, -A3 (r=0,50). Отрицательная корреляция отмечалась между параметрами содержания клеток CD8+ и специфичностями -B17, -B21, -B22, -B27, -B35, -B40 (r=–0,43). Слабоположительная связь была обнаружена между показателями содержания клеток CD4+ и специфичностями -B5, -B17, -B12, -B13, -B14 (r=0,28).

Проведено исследование частот распределения специфичностей HLA в основной группе женщин, больных НВГЗ (n=81), и в связи с различными уровнями содержания клеток CD4+ и CD8+ (табл. 3).

Изучен характер распределения специфичностей HLA среди больных с НВГЗ при различных типах уровней содержания клеток CD4+ в периферической крови по сравнению с группой генетического контроля (см. табл. 3). При низком количестве клеток CD4+ достоверно чаще, чем в группе генетического контроля, встречались антиген -DR1 и его сочетания с -A19, -B14, -B27 и -B35, а также фенотипы -A2/A19, -A1/B14, -A1/B27, -A19/B35. При низком типе уровня клеток CD4+ относительно их среднего уровня достоверно чаще встречались специфичности -A9 и -B35 в сочетаниях с -DR1.

Средний уровень CD4+ клеток ассоциировался со специфичностями -A9, -B18, -DR7 и сочетаниями -DR2, -DR5, -DR7 с -B13, -DR3, а также сочетаниями -DR3 с -A9, -B7, -DR1, -DR4. Достоверно реже встречались специфичности -DR2 и -DR5 в сочетании с -B12 и фенотипы -A1/DR5, -B12/DR5. Фенотип -A9/DR3 был связан со средним уровнем содержания клеток CD4+ относительно их низкого и высокого уровней.

Высокий уровень содержания клеток CD4+ ассоциировался с антигеном -A10 и его сочетаниями с -B13, -DR7, а также фенотипами -B14/B18, -DR5/DR7, -B21/DR7 по сравнению с группой генетического контроля. Фенотип -DR5/DR7 был связан с высоким уровнем содержания клеток CD4+ по сравнению с их средним уровнем. Антиген -A10 достоверно часто встречался среди высоких показателей относительно низких, а антиген -DR1 - среди низких относительно высоких и средних показателей этого параметра.

Исследован характер распределения специфичностей HLA среди больных с НВГЗ в связи с различными типами уровней содержания клеток CD8+ в периферической крови (табл. 4).

В результате иммуногенетического анализа установлена предрасположенность к низкому содержанию клеток CD4+ у здоровых женщин - обладательниц специфичностей HLA-B5, -B13, -B14, -B27 и у больных с НВГЗ (см. табл. 2) - носителей специфичностей -A1, -A2, -A19, -B14, -B27, -B35, -DR1. Таким образом, предрасположенность к низкому содержанию в периферической крови клеток CD4+ сохраняли как больные с НВГЗ, так и здоровые носители специфичностей HLA-B14, -B27 (см. табл. 2). Поэтому антигены -A1, -A2, -A19, -B35, -DR1 следует рассматривать как предрасполагающие к снижению количества клеток субпопуляции CD4+ и развитию ВИД у больных с НВГЗ.

Выявлена предрасположенность к высокому содержанию клеток CD4+ в периферической крови (см. табл. 2) у здоровых женщин - носителей специфичностей HLA-A9, -A10, -B8, -B13, -B22, -B27, -B40 и у больных с НВГЗ - обладательниц специфичностей -A10, -B13, -B14, -B18, -B21, -DR5, -DR7 (см. табл. 3). Таким образом, женщины, страдающие НВГЗ, - носители специфичностей HLA-A10, -B13, сохраняют предрасположенность к высокому уровню в крови клеток CD4+, как и здоровые женщины. А антигены -B14, -B18, -B21, -DR5, -DR7 можно рассматривать как предрасполагающие к повышению количества клеток CD4+ и возможному развитию воспалительного процесса по аутоиммунному типу. По нашим данным, антигены HLA-B18, -B21 встречаются с повышенной частотой при ревматоидном артрите у женщин - жительниц Западной Сибири [5].

Низкое содержание клеток CD8+ отмечено (см. табл. 2) у здоровых женщин - обладательниц специфичностей HLA-A1, -A10, -B12, -B21, -B35, -B40, а при НВГЗ (см. табл. 4) - у носителей специфичностей -A19, -B7, -B8, -B21, -DR3. Соответственно низкий уровень клеток CD8+ отмечен у здоровых женщин и больных с НВГЗ, имеющих общую специфичность HLA-B21. Больные с НВГЗ - обладатели специфичностей -A19, -B7, -B8, -DR3 могут быть предрасположены к понижению количества клеток CD8+ в периферической крови и развитию ВИД. Кроме того, антигены HLA-B7, -B8, -DR3 являются общепризнанными маркерами аутоиммунных заболеваний [5].

К высокому содержанию клеток CD8+ в периферической крови у здоровых женщин (см. табл. 2) предрасполагали специфичности HLA-A2, -B5, -B8, -B13, -B40, а при НВГЗ (см. табл. 4) - специфичности -A2, -A3, -A9, -B5, -B13, -B18, -B22, -DR1, -DR5, -DR7. Следовательно, высокому содержанию клеток CD8+ как у больных с НВГЗ, так и у здоровых лиц соответствовали специфичности HLA-A2, -B5, -B13. Оставшиеся антигены -A3, -A9, -B18, -B22, -DR1, -DR5, -DR7, вероятно, можно считать предрасполагающими к увеличению субпопуляции клеток CD8+.

Нормальное соотношение клеток CD4/CD8, или ИРИ>1,0, наиболее часто встречалось у здоровых носителей специфичностей HLA-A10 и -B40, а инвертированное соотношение CD4/CD8, или ИРИ<1,0 можно считать нормальным для обладателей специфичностей -B5 и -B13. В то же время только при НВГЗ у женщин антиген HLA-A19 встречался достоверно часто при низком содержании, а антиген HLA-B18 - при высоком содержании двух субпопуляций Т-клеток (CD4 и CD8), хотя у здоровых лиц указанные специфичности не ассоциировались с определенным уровнем содержания субпопуляций Т-клеток и редко встречались в обследованных контрольных группах. К тому же, у женщин, страдающих НВГЗ, специфичности HLA-A9 и -B22 достоверно чаще встречались при высоком уровне содержания клеток CD8+, тогда как у здоровых лиц эти специфичности обнаруживались достоверно чаще при высоком уровне содержания клеток CD4+, что может указывать на вероятное изменение CD-фенотипа Т-клеток при НВГЗ.

Следовательно, определенный уровень содержания субпопуляций Т-лимфоцитов в периферической крови связан с наличием в фенотипе индивида частных специфичностей HLA. При воспалении наблюдается подтвержденное многими авторами повышение количества субпопуляций Т-клеток, появление на них экспрессии HLA-DR, что, вероятно, сопровождается усилением экспрессии и CD8-рецепторов на тех же самых клетках с изменением их CD-фенотипа.

Таким образом, в результате проведенного иммуногенетического анализа получены доказательства ассоциированности количества субпопуляций Т-клеток с некоторыми специфичностями генов комплекса HLA у здоровых женщин и больных с НВГЗ. Типирование антигенов HLA может быть полезным в понимании механизмов генетической предрасположенности к развитию ВИД, в формировании групп риска развития аутоиммунных заболеваний, определении наиболее эффективного лечения женщин, страдающих НВГЗ.

1. Специфичности генов HLA ассоциированы с определенным уровнем относительного содержания субпопуляций Т-клеток CD4+, CD8+ в периферической крови здоровых лиц. У больных с НВГЗ, как и у здоровых женщин, специфичности HLA-B14, -B27 устойчиво ассоциировались с низким уровнем клеток CD4+, а низкое содержание клеток CD8+ ассоциировалось с антигеном HLA-B21. У 14,3 и 13,6% больных с НВГЗ низкие показатели содержания клеток CD4+ или CD8+ соответственно не были связаны с развитием ВИД.

2. Низкое содержание клеток CD4+ характерно для больных НВГЗ - обладательниц специфичностей -A1, -A2, -A19, -B35, -DR1 и не характерно для здоровых женщин. Низкое содержание клеток CD8+ характерно для больных НВГЗ женщин - носителей специфичностей HLA-A19, -B7, -B8, -DR3 и не характерно для здоровых женщин. Низкие показатели содержания клеток CD4+ или CD8+ были связаны с развитием клинически подтвержденного вторичного иммунодефицита у 85,7 и 86,4% больных женщин соответственно. Указанные специфичности HLA можно считать маркерами предрасположенности к развитию ВИД при НВГЗ.

3. Высокое содержание клеток CD4+ ассоциировалось у здоровых женщин со специфичностями HLA-A10, -B13, а у больных с НВГЗ с другими специфичностями - -B14, -B18, -B21, -DR5, -DR7. Высокое содержание клеток CD8+ ассоциировалось у здоровых женщин со специфичностями HLA-A2, -B5, -B13, а у больных с НВГЗ - со специфичностями -A3, -A9, -B18, -B22, -DR1, -DR5, -DR7. При высоких значениях одного параметра второй парный показатель у больных с НВГЗ был снижен. У 15,8% больных с НВГЗ с высокими показателями содержания клеток CD4+ и у 10% с высокими показателями содержания клеток CD8+ был установлен клинически подтвержденный диагноз ВИД.