В современном обществе отмечается тенденция к увеличению числа людей, занимающихся различными видами спорта. Это в свою очередь приводит к увеличению числа травм челюстно-лицевой области. По статистике, травматизм челюстно-лицевой области составляет от 4 до 30% в зависимости от вида спорта [1, 10]. В настоящее время основным средством профилактики травм челюстно-лицевой области является защитная спортивная каппа. Из всех представленных на современном рынке видов спортивных капп наиболее эффективными и соответствующими всем требованиям считаются индивидуальные защитные спортивные каппы. Основными конструкционными материалами таких капп на сегодняшний момент являются полиуретан и этиленвинилацетат [3].
Состояние здоровья спортсменов, причины и особенности течения заболевания у них продолжают оставаться одной из центральных проблем спортивной медицины. Не резко выраженные компенсированные субклинические формы заболевания, присущие главным образом спортсменам, представляют более серьезную опасность для них, чем для лиц, не занимающихся спортом. Данный факт связан с воздействием большой физической нагрузки, стрессорных факторов, соревнований, переохлаждения. Исследования ряда авторов [4-6] показали, что высококвалифицированные спортсмены с очагами хронической инфекции характеризуются напряженной адаптацией, с нередким ее срывом и снижением местного иммунитета.
Защитная спортивная каппа, длительное время находящаяся в полости рта спортсмена, при неадекватном гигиеническом уходе может послужить местом образования и роста патогенных бактерий, что в свою очередь может стать причиной развития воспалительных заболеваний пародонта, поражения твердых тканей зубов, обострения хронических очагов инфекции [2, 7-9].
С целью изучения способности образования колоний патогенных микроорганизмов на конструкционных материалах индивидуальных защитных капп было проведено исследование первичной адгезии пародонтопатогенных и дрожжеподобных грибов к данным материалам.
Материал и методы
Для исследования были взяты два основных конструкционных материала для изготовления индивидуальных защитных спортивных капп: на основе полиуретана и этиленвинилацетата.
Образцы полиуретана изготавливались из материала, разработанного учеными-химиками ОАО «Научно-исследовательский институт резиновых и латексных изделий». Данный материал был специально разработан для изготовления защитных спортивных капп, прошел тщательную токсикологическую и санитарно-химическую экспертизу и выпускается под общей торговой маркой «Денталур». Образцы этиленвинилацетата изготавливались из стандартных фабричных пластин, предназначенных для изготовления индивидуальных защитных спортивных капп методом термовакуумформования.
Защитная спортивная каппа после изготовления имеет две поверхности: внутреннюю и внешнюю. Внешняя имеет гладкую поверхность, а внутренняя - шероховатую, так как в процессе изготовления она соприкасается с гипсовой поверхностью рабочей модели. Для исследования было изготовлено по 8 образцов материалов с гладкой поверхностью (вариант А) и по 8 образцов с шероховатой (вариант Б). Всего было изготовлено 32 образца круглой формы с площадью поверхности примерно 1 см2 (см. рисунок).
Для постановки эксперимента моделирования первичной адгезии микробов к образцам материалов использовались культуры Streptococcus sanguis как показатель основной стабилизирующей флоры полости рта, пародонтопатогенных видов микробов, выделенных из полости рта больных пародонтитом средней степени тяжести, - Porphyromonas gingivalis, Fusobacterium nucleatum, а также возбудителей неспецифических стоматитов (в том числе протезных) - Enterococcus faecalis и дрожжеподобных грибов Candida albicans.
Все исследования были выполнены в бактериологической лаборатории (разрешение главного государственного санитарного врача №77.01.16.000.М.015177.11.09, Москва от 18.11.09) кафедры микробиологии, вирусологии, иммунологии ГОУ ВПО МГМСУ. Для идентификации выделенных штаммов использовали идентификационные тест-системы API 20 A фирмы «БиоМирье» (Франция) и основные методические приемы, рекомендованные для анаэробной бактериологической лаборатории, а также ПЦР-диагностики (В.Н. Царев, 2009).
Исследуемые образцы материалов помещали во взвесь суточной тест-культуры микроорганизмов. Количество бактерий в 1 мл взвеси составляло 3·106 КОЕ/мл в соответствии со стандартом мутности 0,5 McFarland; грибов - 1·106 КОЕ/мл. Экспозиция - 40 мин в анаэростате при 37 оС - для анаэробных и микроаэрофильных бактерий, а для грибов - в обычных условиях при комнатной температуре.
Удаление микроорганизмов с образцов осуществляли поэтапно. Сначала образцы отмывали трижды 5 мл стерильного физиологического раствора для удаления неприлипших микробных клеток. Затем каждый материал был помещен в пробирку, содержащую 1 мл физиологического раствора. Эти пробирки с исследуемыми образцами подвергали обработке в ультразвуковой ванне Ultrаsonis (НПФ «Геософт», РФ) при частоте 60 кГц в течение 10 мин, что позволяло удалить микроорганизмы, которые вступили в адгезию на поверхности образца.
Далее из полученной взвеси с образцов осуществляли посев методом отпечатков на кровяной агар Columbia с последующим распределением микроорганизмов по поверхности питательной среды стерильной платиновой бактериологической петлей. Посевы инкубировали в анаэробных условиях при 37 оС - для анаэробных и микроаэрофильных бактерий и в обычных условиях при комнатной температуре - для дрожжеподобных грибов.
После завершения культивирования с помощью стереомикроскопа («Nikon», Япония) подсчитывали количество колоний, выросших на питательных средах, определяли десятичный логарифм этой величины и рассчитывали индекс адгезии для каждой из исследуемых тест-культур по формуле, предложенной В.Н. Царевым и соавт. (1997):
Ia= IgA/IgN,
где Ia - индекс адгезии; A - число прилипших бактерий; N - количество бактерий взвеси.
На основании изучения адгезии тест-культур к данным материалам в соответствии с существующими рекомендациями выделены 4 степени интенсивности адгезии:
- 0-0,30 (на образце реставрационного материала адгезировалось не более 30% микроорганизмов из нанесенной взвеси тест-культуры) - низкая степень;
- 0,30-0,50 (на образце адгезировалось от 31 до 50% микроорганизмов из нанесенной взвеси тест-культуры) - умеренная степень;
- 0,50-0,70 (на образце материала адгезировалось от 51 до 70% бактерий от нанесенной взвеси тест-культуры) - высокая степень;
- свыше 0,70 (на образце материала адгезировалось 71% и более бактерий от нанесенной взвеси тест-культуры) - очень высокая степень.
Результаты
Результаты исследования представлены в таблице.
Представленные данные свидетельствуют о существенных различиях индексов адгезии к исследуемым материалам в зависимости от вида микробов и характера поверхности. Так, значения индексов адгезии низкой степени отмечены у образцов этиленвинилацетата с гладкой поверхностью (вариант А) для всех тест-штаммов бактерий и грибов (от 0,15±0,03 у Enterococcus faecalis до 0,24±0,04 у Candida albicans), кроме наиболее вирулентного пародонтопатогенного вида Porphyromonas gingivalis (0,68+0,04; p<0,05). Однако в случае образцов того же материала с шероховатой поверхностью (вариант Б) индексы адгезии достоверно возрастали примерно в 2 раза у Streptococcus sanguis и в 3 раза - у Enterococcus faecalis, Fusobacterium nucleatum и грибов Candida albicans.
Адгезия у вирулентного пародонтопатогенного вида Porphyromonas gingivalis и дрожжеподобных грибов Candida albicans к шероховатой поверхности этиленвинилацетата была максимальной - индекс составлял 0,75±0,04 и 0,85±0,05 соответственно (p<0,05).
При оценке первичной адгезии бактерий и дрожжеподобных грибов к образцам полиуретана получены следующие данные. Как и в предыдущем случае, преимущественно индексы адгезии низкой степени выявлены к образцам полиуретана с гладкой поверхностью (вариант А) для тест-штаммов Enterococcus faecalis, Fusobacterium nucleatum и дрожжеподобных грибов Candida albicans (от 0,20 до 0,29), а у Streptococcus sanguis - средней степени (0,40±0,02).
Как и в случае с образцами этиленвинилацетата, наиболее вирулентный пародонтопатогенный вид Porphyromonas gingivalis давал максимально высокий уровень адгезии (0,62±0,04), который, однако, у образцов полиуретана был достоверно ниже (p<0,05).
В случае использования шероховатых образцов (вариант Б) индексы адгезии достоверно возрастали примерно в 1,5-2,5 раза у Enterococcus faecalis и грибов Candida albicans, в 3 раза - у Fusobacterium nucleatum и на 1/
Сравнивая полученные результаты адгезии разных видов микробов к материалам с разными поверхностями, следует подчеркнуть, что шероховатый полиуретан давал более низкую адгезию дрожжеподобных грибов Candida albicans по сравнению с этиленвинилацетатом. Полиуретан с гладкой поверхностью по степени адгезии практически не отличался от этиленвинилацетата - в обоих случаях индекс адгезии расценивался как низкая степень. Исключение составляли Streptococcus sanguis, которые являются основным стабилизирующим видом резидентной флоры полости рта. Среднюю степень адгезии, которую давал полиуретан, можно расценивать как положительный признак с точки зрения восстановления нормального микробиоценоза полости рта и протезной биопленки.
Выводы
1. Материалы, используемые для изготовления индивидуальных защитных капп, существенно различаются по степени адгезии стабилизирующих и вирулентных пародонтопатогенных видов бактерий, а также дрожжеподобных грибов Candida albicans, что определяется их физико-химическими параметрами. Степень адгезии микробов разных таксономических групп к таким материалам варьирует в широких пределах: индексы адгезии к образцам материалов составляют от 0,15 до 0,85. Адгезия к более шероховатым образцам материалов in vitro достоверно выше, чем у гладких образцов обеих групп.
2. Этиленвинилацетат и полиуретан являются оптимальными материалами для клинического применения с точки зрения сохранности нормального микробиоценоза протезной биопленки и профилактики протезных стоматитов, так как имеют низкую степень адгезии тест-штаммов микробов полости рта.
3. Преимуществом материала на основе полиуретана является его более высокая аффинность (сродство) к важнейшему стабилизирующему виду микрофлоры полости рта - Streptococcus sanguis, но достоверно более низкая к тест-штаммам вирулентных видов микробов и дрожжеподобных грибов - возбудителей воспалительных процессов в полости рта.