Субпопуляции Т-лимфоцитов эндометрия в патогенезе невынашивания беременности ранних сроков

Частота невынашивания беременности в мире составляет около 10—15% [1]. Представляет интерес изучение активации Т-лимфоцитов при невынашивании беременности, так как они участвуют в индукции реакции «хозяин против трансплантата», а эмбрион является наполовину генетически чужеродным для организма матери. Известно, что при невынашивании беременности ранних сроков происходит нарушение баланса Th1/Th2-лимфоцитов [2]. В норме доминирующей субпопуляцией Т-лимфоцитов на ранних сроках беременности являются Th2, в то время как количество Th1, обеспечивающих активацию клеточного иммунитета, снижается.

Также в эндометрии присутствуют регуляторные Т-лимфоциты (Treg, Th3), которые поддерживают толерантность к собственным антигенам организма и ингибируют избыточный воспалительный ответ. Th17-лимфоциты (Th17) играют важную роль в удалении патогенов с поверхности слизистых оболочек, но также могут играть ведущую роль в развитии аутоиммунных реакций [3]. Дифференцировка субпопуляций CD4+ Т-лимфоцитов показана на рисунке

Однако роль Treg и Th17 в патогенезе невынашивания беременности изучена недостаточно.

Цель исследования — установить роль Th1, Th17 и Treg-лимфоцитов в патогенезе неразвивающейся беременности и самопроизвольных выкидышей ранних сроков.

Обследованы 22 пациентки с неразвивающейся беременностью, 22 женщины с самопроизвольными выкидышами ранних сроков и 57 пациенток, поступивших для проведения медицинского аборта (группа контроля). Срок беременности во всех случаях составил 6—10 нед. Из исследования были исключены пациентки с эндокринными нарушениями, тяжелыми экстрагенитальными заболеваниями, антифосфолипидным синдромом, а также отказавшиеся от участия в исследовании.

Для оценки экспрессии мРНК CD4+ T-лимфоцитов (CD4, CD25), Tbet (маркера Th1-лимфоцитов), FoxP3 (маркера Treg-лимфоцитов), STAT3 (маркера Th17-лимфоцитов) использовали метод обратной транскриптазной количественной полимеразной цепной реакции (кПЦР).

Ткань эндометрия получали путем выскабливания полости матки. Полученную децидуальную ткань помещали в консервант RNAlater («Ambion», США). Выделение РНК методом фенол-хлороформной экстракции и обратную транскрипцию выполняли по описанной ранее методике [5].

Дизайн праймеров выполнен в базе данных BLAST (www.ncbi.nlm.nih.gov) (табл. 1).

R= 2^{–(Cqtarget – (Cqref1 + Cqref2)/2)},

где R — нормализованная экспрессия изучаемого гена, Cq target — Cq изучаемого гена, Cq ref1 и Cq ref2 — Cq генов-нормировщиков [5].

Статистическая обработка полученных результатов была выполнена в программе Statistica 13.2 («StatSoft», США). Нормальность распределения признаков оценивали с помощью критерия Колмогорова—Смирнова. Так как полученные данные не подчинялись нормальному распределению, результаты представляли как медиану (нижний квартиль; верхний квартиль). Для оценки достоверности различий использовали критерий Манна—Уитни. Различия считали достоверными при p<0,05.

Экспрессия мРНК CD4 у пациенток с неразвивающейся беременностью не имела достоверных различий с группой контроля (табл. 2).

У пациенток с самопроизвольными выкидышами экспрессия мРНК Tbet (маркера Th1) была выше в 2,8 раза, а FoxP3 (маркера Treg) — в 2,5 раза в сравнении с группой контроля.

Экспрессия мРНК STAT3 (маркера Th17) в эндометрии у пациенток с неразвивающейся беременностью не имела достоверных различий с группой контроля.

Согласно данным литературы [7], у пациенток с неразвивающейся беременностью было выявлено увеличение экспрессии CD25, который является маркером активированных Т-лимфоцитов, и уровня интерлейкина-12, который важен для дифференцировки Th1-лимфоцитов по сравнению с группой пациенток с угрожающим выкидышем и пациентками с прогрессирующей беременностью [7].

Также показано, что количество Th1 и соотношение Th1/Th2 в эндометрии увеличиваются у пациенток с самопроизвольными выкидышами неустановленного генеза по сравнению с пациентками с нормальной прогрессирующей беременностью [8].

В нашем исследовании выявлено увеличение экспрессии мРНК FoxP3, маркера регуляторных Т-лимфоцитов. Наши результаты не подтверждают данные других исследований, в которых показано, что содержание Treg в децидуальной ткани и периферической крови пациенток с привычным невынашиванием неустановленного генеза было достоверно ниже, чем в группе контроля [9, 10]. Однако известно, что дифференцировка, увеличение локального пула и пролиферация Treg происходят под влиянием простагландина E2 [11]. Поэтому увеличение содержания Treg у пациенток с самопроизвольными выкидышами, при которых сокращения матки возникают из-за выработки простагландинов, может быть результатом такого увеличения уровня простагландинов. Данный факт также объясняет, почему в нашем исследовании количество Treg было нормальным в группе пациенток с неразвивающейся беременностью, у которых не наблюдалось сокращений матки и отторжения плодного яйца.

Мы не нашли достоверных различий в экспрессии мРНК STAT3 (маркера Th17) в эндометрии пациенток с неразвивающейся беременностью и самопроизвольными выкидышами ранних сроков по сравнению с группой контроля, в то время как W. Wang и соавт. [12] показали, что в случае неразвивающейся беременности процент Th17 в периферической крови и эндометрии был выше, чем при прогрессирующей беременности. Авторы также выявили увеличение уровня интерлейкина-17 и интерлейкина-23, вырабатываемых Th17, в сыворотке крови и децидуальной ткани. В другом исследовании [2] не было отмечено изменений количества Th17 в эндометрии при неразвивающейся беременности, если в клинической картине на наблюдалось кровяных выделений из половых путей и структурных изменений шейки матки. Авторы полагают, что увеличение количества Th17 в случае неразвивающейся беременности является последствием отторжения плодного яйца, а не причиной гибели эмбриона.

Роль Th17/Treg в патогенезе неразвивающейся беременности и самопроизвольных выкидышей ранних сроков остается противоречивой, а ее дальнейшее изучение позволит выявить иммунные маркеры невынашивания беременности ранних сроков [13].

У пациенток с неразвивающейся беременностью в эндометрии было выявлено увеличение экспрессии мРНК CD25+ (маркера активированных CD4+ T-лимфоцитов) и STAT4 (маркера Th1). У пациенток с самопроизвольными выкидышами наблюдалось увеличение в эндометрии экспрессии мРНК Tbet (маркера Th1) и FoxP3 (маркера Treg).

Это подтверждает, что сдвиг баланса Th1/Th2 в сторону Th1 играет важную роль в патогенезе неразвивающейся беременности и самопроизвольных выкидышей ранних сроков. Пока неясно, почему в эндометрии пациенток с самопроизвольными выкидышами выявлено увеличение экспрессии регуляторных Т-лимфоцитов (Treg). Мы предполагаем, что это может быть результатом повышения уровня простагландинов, которые известны как индукторы дифференцировки и пролиферации Treg. Это предположение также объясняет, почему в группе пациенток с неразвивающейся беременностью, у которых отсутствовали сокращения матки и отторжение плодного яйца, уровень Treg не отличался от такового в контрольной группе. Экспрессия STAT3 (маркера Th17) у пациенток с невынашиванием беременности не имела достоверных различий с группой контроля.

Благодарности

Исследование выполнено при поддержке гранта Президента Р.Ф. МД-2326.2017.7.

Участие авторов:

Концепция и дизайн исследования — О.Л.

Сбор и обработка материала — И.Ж., О.Н., О.Л.

Статистическая обработка — О.Л., С.П.

Написание текста — О.Л.

Редактирование — О.Л.

Обеспечение работы оборудования лаборатории — М.Ч.

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

*e-mail: safonova2@yandex.ru