Актуальность настоящего исследования обусловлена выраженной в настоящее время тенденцией роста мужского фактора в структуре бесплодного брака, что обосновывает необходимость тщательного изучения данной проблемы. Многочисленными исследованиями показано, что снижение фертильности у мужчин связано с возрастающим воздействием на организм человека вредных экзогенных факторов окружающей среды. Вместе с тем на сегодняшний день остается малоизученной роль нарушений условий внутриутробного развития различного генеза на становление сперматогенеза в постнатальном периоде.

В связи с этим в настоящем исследовании предпринята попытка провести сравнительный морфологический анализ сперматогенного пласта семенников у потомства самок крыс с экспериментальным аутоиммунным поражением печени различного генеза в период новорожденности, в котором отражаются особенности развития всех систем жизнеобеспечения, в том числе репродуктивной.

Исследования проведены на белых лабораторных крысах Вистар (самках) и их потомстве в период новорожденности. Для достижения поставленной цели у взрослых половозрелых самок вызывался аутоиммунный процесс с преимущественным поражением печени.

У одной группы животных (группа А1) аутоиммунный процесс создавался путем длительной сенсибилизации гомологичным антигеном печени с адъювантом Фрейнда по общепринятой методике [2, 9]. Полный цикл иммунизации продолжался 4 мес. Первоначально печеночный антиген вводился подкожно с адъювантом Фрейнда, а затем внутрибрюшинно в возрастающих дозах с интервалом 3 дня (всего 7 инъекций). Повторную иммунизацию проводили через 10—15 дней от момента последней инъекции гомологичного печеночного антигена по сходной схеме. Всего проведено 3 цикла иммунизации. Доза печеночного антигена, получаемого животными за полный курс иммунизации, составила 200 мг гомологичного антигена. Эту группу составили 18 новорожденных крысят из 15 пометов.

У другой группы взрослых половозрелых животных (группа А2) аутоиммунный процесс с преимущественным поражением печени создавался путем введения 0,2 мл фильтрата шестидневной культуры E. coli (штамм Американской коллекции типовых культур микроорганизмов, АТСС 25922 — Escherichia сoli (Migula) Castellani and Chalmers) в три участка печени — по одной с обеих сторон у основания мечевидного отростка и справа у края реберной дуги по срединно-ключичной линии. В течение 24 ч после введения сенсибилизирующей инъекции животные получали только воду. По истечении этого времени в хвостовую вену животным вводили фильтрат 6-дневной культуры E. coli из расчета 0,1 мл на 100 г массы тела животного [4]. Эту группу составили 15 новорожденных крысят из 14 пометов.

Аутоиммунный характер повреждения печени верифицировали на основании высокого титра противопеченочных аутоантител (1:640 и 1:1280), гипергаммаглобулинемии и характерной патоморфологической картины органа: некробиотические изменения гепатоцитов, носящие очаговый характер, дискомплексация гепатоцитов, гиперплазия печеночных макрофагов, расширение синусоидных капилляров, массивная лимфогистиоцитарная периваскулярная инфильтрация портальных трактов, распространяющаяся на периферию долек.

Контрольную группу (группа К) составили 14 крысят из 14 пометов.

Работа с лабораторными животными проводилась в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (приказ №755 от 12.08.77 МЗ СССР).

Объектом исследования явилось непосредственно однодневное потомство самок крыс с экспериментальным поражением гепатобилиарной системы, у которого проводилась оценка состояния сперматогенного эпителия. Оценка сперматогенного эпителия семенников проводилась на серийных гистологических срезах, окрашенных гематоксилином и эозином по общепринятой методике [5] с определением при помощи морфометрической установки Motic BA400 (Германия) площади семенных извитых канальцев, суммарного количества сперматогенных клеток и их субпопуляционного состава из расчета на один извитой семенной каналец, а также количества канальцев со слущенным эпителием и суммарного числа гигантских сперматогенных клеток в 30 поперечных срезах семенных извитых канальцев.

Полученные цифровые данные обрабатывали на компьютере с использованием программы Statistica v.6.0. («Statsoft Inc.»). Учитывая небольшую выборку животных, достоверность полученных результатов определялась при помощи непараметрического метода — критерия Манна—Уитни [3].

Установлено, что у подопытных крысят обеих групп весовой индекс семенников несколько снижен по сравнению с интактными новорожденными крысятами. Так, если у интактных крысят данный показатель составил 0,13±0,003%, то у потомства самок крыс с аутоиммунным поражением печени — соответственно 0,05±0,004 и 0,09±0,02%. Наряду с этим у подопытных крысят произошло увеличение массы соединительной ткани в семенниках, о чем свидетельствует увеличение площади интерстициальной ткани. Так, если исследуемый показатель у интактных крысят составил 39,4 ± 0,013 мкм, то у подопытных новорожденных обеих групп площадь соединительной ткани составила соответственно 47,40±0,013 и 45,71±0,017 мкм. Эти данные согласуются с результатами, полученными нами при анализе диаметра и площади семенных извитых канальцев. Установлено, что у интактных животных эти показатели составили соответственно 48,21±0,111 и 1822,00±9,89 мкм. При этом у подопытных крысят обеих групп имеет место снижение величины диаметра (39,00±0,201 и 23,33±0,88 мкм соответственно) и, напротив, увеличение площади (1194,34±12,27 и 409,50±17,30 мкм) извитых семенных канальцев.

Одним из важнейших критериев состояния сперматогенного эпителия является показатель суммарного содержания сперматогенных клеток и их субпопуляционный состав. Как видно из таблицы,

Для оценки сперматогенного пласта нами также производился подсчет количества семенных извитых канальцев со слущенным эпителием, представляющих собой поперечные сечения семенных канальцев, содержащих клетки, потерявшие связь с клетками своего клона и находящиеся в просвете канальца. Данный показатель является чувствительным индикатором интенсивности апоптотических процессов в семенных канальцах. Установлено, что у новорожденных крысят как группы А1 (7,00±0,258%), так и группы А2 (8,625±0,53%) исследуемый показатель превысил таковой в контроле (6,00±0,258%). При этом у подопытных крысят обеих групп наблюдается увеличение в семенных извитых канальцах числа одноядерных и многоядерных гигантских сперматогенных клеток, в том числе с фрагментированными и пикнотизированными ядрами. Согласно современным представлениям [1], гигантские многоядерные клетки являются одним из критериев оценки гипоксического повреждения сперматогенного эпителия.

Развитие зародышевых клеток, а впоследствии и их дифференцировка, осуществляется при участии сустентоцитов [10, 12]. Нами установлено, что у новорожденных крысят группы А1 количество сустентоцитов из расчета на один семенной каналец повышено (5,27±0,002), а у животных группы А2, напротив, снижено (3,8±0,008) по сравнению с контролем (3,9±0,026). При этом за счет уменьшения суммарного содержания сперматогенных клеток клеточный индекс (отношение суммарного содержания сперматогенных клеток к числу сустентоцитов) в обеих подопытных группах оказался сниженным (2,8 и 3,4 соответственно) по сравнению с группой контроля (4,6).

У потомства самок крыс с аутоиммунным поражением печени различного генеза имеет место нарушение антенатального созревания сперматогенного эпителия. Одной из причин данного явления можно считать снижение количества сустентоцитов в семенных извитых канальцах подопытных крысят, о чем свидетельствует уменьшение клеточного индекса, отражающего отношение суммарного количества сперматогенных клеток к числу сустентоцитов. Так, согласно современным представлениям [10, 12—14], сустентоциты обеспечивают структурное поддержание и питание развивающихся зародышевых клеток, их дифференцировку, фагоцитоз дегенеративных зародышевых клеток секретирует многочисленные цитокины и белки, в том числе андрогенсвязывающий гормон, который опосредованно через гипофиз влияет на митотическую активность сперматогоний. Вместе с тем в последние годы к веществам, которые, воздействуя пренатально, вызывают нарушение сперматогенеза, относят соединения, дающие эстрогенный или антиандрогенный эффекты, в результате чего нарушается локальный гормональный гомеостаз в семенных извитых канальцах, обусловливающий в конечном итоге угнетение процессов сперматогенеза [6—8, 11]. Логично предположить, что моделирование поражения печени у самок крыс обусловливает, в конечном итоге, нарушение ряда жизненно важных функций, в том числе функция инактивации гормонов. В результате этого, накапливающиеся гормоны, в том числе половые, проникают через плаценту и обусловливают нарушение гормонального гомеостаза плода.

В целом анализ полученных результатов позволяет сделать заключение, что экспериментальное аутоиммунное поражение печени матери обусловливает рождение потомства с компроментированным репродуктивным здоровьем.