Ооциты, лишенные прозрачной оболочки (zona pellucida — ZP), нередко встречаются в практике врача-эмбриолога, выполняющего манипуляции с гаметами в ходе проведения вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ).

Потеря ZP может быть результатом механического повреждения ооцита во время аспирации или при микроманипуляциях. Это явление может быть связано с повышенной хрупкостью прозрачной оболочки. В разных лабораториях частота регистрации таких ооцитов составляет от 0,7 до 16% [2, 4, 5].

Приводим клинический случай наступления беременности после переноса бластоцисты, полученной при оплодотворении ооцита, лишенного ZP.

Программу ЭКО в естественном цикле проводили с гормональным мониторингом и фолликулометрией [13]. Этап культивирования ооцитов и эмбрионов проводили согласно Z. Nagy и соавт. [9].

При проведении перкутанной аспирации сперматозоидов из придатка яичка (PESA) получали аспират, который центрифугировали при 900 g в течение 10 мин. Осадок ресуспендировали в 100 мкл среды и криоконсервировали двухэтапным методом [1].

Деконсервирование спермиев проводили путем помещения виалы в водяную баню при температуре 37 °С на 10 мин. Размороженный образец центрифугировали при 900 g в течение 10 мин. Надосадок удаляли. К осадку добавляли 1 мл культуральной среды. Деконсервированные и отмытые спермии в микрокапле среды помещали в инкубатор при температуре 37 °С, 6% СО₂. Через 1 ч оценивали количество подвижных сперматозоидов с правильной морфологией, которыми проводили процедуру ICSI.

Супружеская пара с диагнозом первичного бесплодия сочетанного генеза (трубно-перитонеальный и мужской фактор) прошла программу лечения бесплодия методом ЭКО/ICSI/PESA. Стаж бесплодного брака — 22 года. Возраст супругов: женщина — 42 года, мужчина — 53 года.

Проведено общее клинико-лабораторное обследование супругов, исследование гормонального статуса, цитогенетический анализ лимфоцитов периферической крови.

Учитывая возраст супругов, сниженный овариальный резерв женщины и наличие единичных эпидидимальных спермиев, было принято решение о проведении программы ЭКО в естественном цикле.

При трансвагинальной пункции произведена аспирация фолликула диаметром 18 мм. Выделен 1 ооцит. При денудации ооцита перед процедурой ICSI произошел разрыв ZP с вытеканием цитоплазмы (рисунок, а).

Принято решение о переносе эмбриона в полость матки пациентки. На 14-е сутки после эмбриопереноса показатели гормонального мониторинга были следующими: уровень эстрадиола — 477 пг/мл, прогестерона — 10,0 нг/мл, чХГ — 101,1 мМЕ/мл.

Через 3,5 нед после переноса эмбриона диагностирована моноамниотическая монохориальная беременность, уровень чХГ — 20 000 мМЕ/мл.

В 11 нед беременности проведен первый акушерский скрининг. На момент написания статьи беременность 28 нед развивается успешно.

Проведение ЭКО в естественном цикле в последнее время вызывает все больший интерес у специалистов, занимающихся репродуктивным здоровьем [3, 10, 12], ввиду приемлемости для пациенток с плохим ответом яичников на стимуляцию суперовуляции и множественными неудачными попытками ЭКО. В то же время этот подход имеет и свои недостатки, а именно преждевременная овуляция, отсутствие оплодотворения, плохое качество эмбриона.

В стимулированных циклах ВРТ ооциты без ZP обычно выбраковываются.

Существует лишь несколько публикаций, описывающих случаи успешного оплодотворения таких ооцитов методом ICSI, с последующим дроблением и развитием эмбриона до стадии бластоцисты in vitro [6, 8, 11]. Сообщения об успешной беременности после оплодотворения ооцитов, лишенных прозрачной оболочки, единичны [16, 17].

Zona pellucida — гликопротеиновая оболочка вокруг плазматической мембраны яйцеклетки играет важную роль в процессе оплодотворения и раннего эмбрионального развития, архитектонике клетки, способствуя ранней поляризации эмбриона на стадии 8 бластомеров.

Морфология прозрачной оболочки ооцитов является одним из показателей, на основании которых можно прогнозировать успех процедур ВРТ с использованием этих клеток. Так, считается, что утолщенная прозрачная оболочка может быть фактором бесплодия. При этом толщина прозрачной оболочки увеличивается с возрастом, а также при применении стимуляции высокими дозами гонадотропинов [4], что свидетельствует о влиянии гормонального окружения на толщину оболочки. Слишком толстая прозрачная оболочка (толщина ≥20 мкм) может быть показанием к применению ICSI, поскольку при оплодотворении методом IVF сперматозоиды не в состоянии пройти через такую оболочку. Также слишком толстая прозрачная оболочка может препятствовать экспансии и вылуплению бластоцисты, и в этом случае необходимо рассматривать вопрос о применении вспомогательного хэтчинга.

В отличие от утолщенной, тонкая прозрачная оболочка не является фактором, снижающим оплодотворение и развитие эмбрионов [15, 18], а даже, напротив, повышает показатели оплодотворения [2], но слишком тонкая оболочка больше подвержена повреждениям, что может привести к выходу ооцита из оболочки.

Причиной формирования тонкой прозрачной оболочки, вероятнее всего, являются генетические факторы (нарушение экспрессии белков группы ZP), о чем можно судить по данным, полученным в экспериментах на животных [14].

Зрелость ооцитов без ZP оценить сложно из-за невозможности констатировать наличие первого полярного тела. Если веретено деления будет нарушено процедурой ICSI, возможно возникновение анеуплоидных эмбрионов.

Показано, что присутствие ооцитов, лишенных прозрачной оболочки, среди всех выделенных ооцитов не коррелирует с числом переносимых эмбрионов, процентом беременности или абортов, т.е. присутствие таких ооцитов не является маркером снижения общего качества ооцитов [4].

Считается, что удаление ZP может оказать влияние на межклеточные контакты в раннем периоде развития, в связи с чем такие эмбрионы не способны к компактизации [7].

Отмечено, что эмбрионы без ZP формируют бластоцисты с несколькими бластоцелями [19].

Некоторые исследователи [17] проводят процедуру ICSI для ооцита, лишенного прозрачной оболочки, не очищая его от клеток кумулюса во избежание повреждений. Однако, если ооцит вышел из ZP при денудации, рекомендовано бережное инъецирование для введения спермия при ICSI.

В доступной литературе [16] мы встретили одно сообщение о рождении ребенка после переноса криоконсервированной бластоциты, полученной после инъецирования ооцита без ZP.

Клинический случай, описанный в работе, свидетельствует об успешном наступлении беременности после оплодотворения методом ICSI ооцита, лишенного ZP. Это свидетельствует в пользу того, что нужно использовать каждый шанс для наступления беременности у пациентов ВРТ-клиник, даже в самых непредсказуемых ситуациях.