Введение

Кожа — один из основных органов, выполняющих защитную функцию организма от обезвоживания, стресса, травм и других повреждающих факторов. Нарушения функции кожи нередко могут быть связаны с уменьшением (количественным и качественным) продукции коллагена [1]. Для стимуляции синтеза коллагена предложено несколько различных способов, одним из которых является метод биоревитализации — интрадермальное введение препаратов, преимущественно гелей или растворов, содержащих гиалуроновую кислоту [2]. Впервые предложил термин «биоревитализация» и начал использовать этот метод проф. А. Ди Пьетро.

Выбор для этих целей гиалуроновой кислоты не случаен, поскольку этот мукополисахарид является важным компонентом кожи человека и выполняет многие функции, главная из которых — способность удерживать воду. При восстановлении содержания влаги в коже нормализуются многие процессы, в том числе активность фибробластов [3, 4].

Группа компаний Диарси (ООО «ВДС Фарма») разработала новаторский продукт под названием Femegyl R БИОЛИФТ (Регистрационное удостоверение на медицинское изделие №РЗН 2018/7271 от 25.05.20), в состав которого, помимо гиалуроновой кислоты, входят германий-органический комплекс с янтарной кислотой и лизин.

Германий является полуметаллом; в соединении с хелатным комплексом он оказывает мощное стимулирующее действие на синтез митохондриальных факторов дыхания, повышая тем самым обеспеченность клеток энергией и нормализуя регенерацию клеток [5]. Помимо мембраностабилизирующего эффекта германий-органический хелатный комплекс оказывает мощное антиоксидантное действие, повышает устойчивость клеток к гипоксии, защищает клеточные структуры от повреждающих факторов внешней и внутренней среды [6], стимулирует синтез коллагена и васкуляризацию кожи [7]. Кроме того, он способствует формированию клеточной оболочки путем стимулирования синтеза церамидов, улучшая тем самым барьерную функцию кожи [8].

Янтарная кислота относится к двухосновным карбоновым кислотам и участвует в клеточном дыхании. Соли янтарной кислоты (сукцинаты) известны со времен Римской империи. Считалось, что янтарь — это окаменевший сок сосны. Одним из первых, кто начал применять лечебные свойства янтаря в медицине, был известный врач Гиппократ. Янтарная кислота была получена при перегонке янтаря в XVII веке, после чего начались исследования по изучению ее влияния на организм человека. В результате ряда исследований установлено, что при стрессе и интенсивных физических нагрузках развивается дефицит янтарной кислоты [9, 10], что приводит к нарушению жизнедеятельности организма. Показано, что янтарная кислота способствует ингибированию процессов перекисного окисления липидов, оказывает влияние на физико-химические свойства мембран, увеличивая их текучесть и уменьшая вязкость липидного слоя, обладает адаптогенным действием и повышает сопротивляемость организма неблагоприятным факторам внешней среды.

В состав препарата входит также аминокислота лизин, активно участвующая в синтезе коллагена и регенерации поврежденных тканей.

Воздействие препарата Femegyl R БИОЛИФТ на кожу приводит к изменению структуры дермы, по-этому метод, основанный на его использовании, назван «биореструктуризация кожи» (данная формула запатентована) [11]. Препарат выпускается во флаконах объемом 6,5 мл. Максимальное количество препарата, необходимое для обработки зон лица, шеи и декольте, составляет 3 мл. Полный курс биореструктуризации состоит из 2 процедур.

Применение препарата Femegyl R БИОЛИФТ позволяет обеспечить высокую степень увлажнения кожи, уменьшить признаки хроно- и фотостарения, а также глубину морщин, восстановить защитный барьер кожи и увеличить эластичность и упругость кожи.

Цель работы — оценка морфологических изменений, возникающих в коже при интрадермальном введении препарата Femegyl R БИОЛИФТ с использованием гистологических и иммуногистохимических методов исследования.

Материалы и методы

Работа выполнена совместно с кафедрой патологической анатомии Первого Московского государственного медицинского университета им. И.М. Сеченова.

Препарат Femegyl R БИОЛИФТ применен у 20 добровольцев (12 женщин и 8 мужчин, средний возраст 55 лет). Имплантаты препарата вводили с помощью мультипунктурной техники в кожу заушной области 4-кратно с интервалом 14 дней.

У всех добровольцев на 5 этапах наблюдения (до начала курса, после 2 процедур, через 2 нед после 4 процедур, спустя 2,5 мес после 4 процедур, через 5,5 мес от начала процедур) в зоне введения препарата, на расстоянии 0,5–0,8 см друг от друга, осуществляли панч-биопсию кожи с последующим гистологическим и иммуногистохимическим исследованием биоптатов.

Фиксацию биоптатов проводили в нейтральном 10% растворе формалина, после чего заливали в парафин. При гистологических исследованиях серийные парафиновые срезы окрашивали гематоксилином и эозином, по Ван Гизону, толуидиновым синим, и по методике PAS-реакции. При иммуногистохимических исследованиях демаскировку антигенов осуществляли в ретривере в соответствии с общепринятым протоколом. В полученных препаратах методом двойных антител определяли экспрессию в коже коллагенов I и III типа, маркера клеточной пролиферации Ki-67 и фактора роста эндотелия сосудов VEGF (DakoCytomation, разведение 1:100). Экспрессию коллагенов I и III типа и VEGF оценивали полуколичественным методом по интенсивности их окрашивания (балльная система подсчета): при слабой окраске 2 балла, при умеренной — 4 балла, при высокой — 6 баллов. Количество Ki-67+ клеток в эпидермисе выражали в процентах (по соотношению положительно окрашенных клеток на 300 клеток в препарате).

Результаты

При изучении гистологических препаратов после интрадермального введения препарата Femegyl R БИОЛИФТ каких-либо патологических изменений эпидермиса не обнаружено. В дерме после проведения двух процедур определялось набухание экстрацеллюлярного матрикса (отличавшееся от мукоидного набухания), которое развивалось преимущественно периваскулярно и вокруг придатков кожи с образованием в этих участках лимфогистиоцитарных инфильтратов. Набухание сохранялось и на 3-м этапе исследования (т.е. через 2 нед после проведения 4 процедур), однако исчезало на 4-м этапе исследования (спустя 2,5 мес после 4 процедур). В глубоких слоях дермы и подкожно-жировой клетчатке выявлялось усиление неоангиогенеза, особенно выраженное на 2-м и 3-м этапах исследования (рис. 1, а).

Рис. 1. Гистологическая картина изменений кожи при введении препарата Femegyl R БИОЛИФТ на разных этапах воздействия, ×200.

а — окраска гематоксилином и эозином; б — окраска по Ван Гизону; в — PAS-реакция; г — окраска толуидиновым синим.

В экстрацеллюлярном матриксе отмечалось усиление образования коллагена и нейтральных мукополисахаридов, что проявлялось в увеличении относительной ширины дермы при окраске по Ван Гизону (см. рис. 1, б). После окончания курса процедур накопление коллагенов в дерме сохранялось, однако содержание нейтральных мукополисахаридов в экстрацеллюлярном матриксе уменьшалось (см. рис. 1, в).

При окраске толуидиновым синим феномена метахромазии не наблюдалось, что свидетельствует о встраивании препарата в клетки на этапе его введения (см. рис. 1, г).

При иммуногистохимических исследованиях биоптатов кожи после введения препарата наблюдалось увеличение экспрессии коллагенов I и III типа (рис. 2, а, б), усиление неоангиогенеза, проявлявшееся в увеличении экспрессии фактора роста эндотелия сосудов VEGF в глубоких слоях дермы (см. рис. 2, в, рис. 3, а, б), рост количества пролиферирующих клеток (Ki-67⁺) в эпидермисе в ответ на введение препарата и уменьшение их числа после окончания курса процедур (см. рис. 2, г, рис. 4, а, б).

Рис. 2. Изменения в коже при введении препарата Femegyl R БИОЛИФТ на разных этапах воздействия, по данным иммуногистохимических исследований (иммунопероксидазная реакция с ДАБ, ×200).

а — экспрессия коллагена I типа; б — экспрессия коллагена III типа; в — экспрессия фактора роста эндотелия сосудов VEGF; г — экспрессия маркера пролиферативной активности клеток Ki-67.

Рис. 3. Динамика экспрессии фактора роста эндотелия сосудов VEGF при введении препарата Femegyl R БИОЛИФТ на разных этапах воздействия.

а — в коже мужчин; б — в коже женщин.

Рис. 4. Динамика экспрессии маркера пролиферативной активности клеток Ki-67 при введении препарата Femegyl R БИОЛИФТ на разных этапах воздействия.

а — в коже мужчин; б — в коже женщин.

Максимальная стимуляция синтеза коллагена I и III типа выявлялась на 3–5-м этапах исследования (таблица).

Таблица 1. Динамика экспрессии коллагенов I и III типа в коже на разных этапах исследования, баллы

Следует отметить, что изменения, регистрируемые на 4-м этапе исследования, сохранялись и через 5,5 мес от начала проведения процедур (т.е. на 5-м этапе).

Заключение

Интрадермальное введение препарата Femegyl R БИОЛИФТ приводит к реструктуризации дермы: увеличению образования коллагенов I и III типа и нейтральных мукополисахаридов и усилению неоангиогенеза, что, в свою очередь, способствует укреплению каркаса кожи и предотвращению процессов старения.

Участие авторов:

Концепция и дизайн исследования: Н.Ю. Уколова, С.К. Матело, Е.А. Коган, А.Д. Исаев

Сбор и обработка материала: Н.Ю. Уколова, Е.А. Коган, Е.А. Косткина, Н.В. Жарков

Статистическая обработка: Е.А. Коган

Написание текста: Н.Ю. Уколова, Е.А. Коган

Редактирование: Н.Ю. Уколова, А.Д. Исаев,И.В. Амбросов, А.В. Дирш

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.