Изучение действия акарицидного препарата на клещей вида Demodex folliculorum в исследовании in vitro

В настоящее время на российском рынке отсутствуют акарицидные препараты отечественного производства, у которых в инструкции по медицинскому применению был бы отмечен противопаразитарный эффект в отношении клещей рода Demodex, что вызывает острую необходимость разработки такого лекарства. В доклиническом исследовании эффективности нового лекарственного препарата изучали его специфическую активность в отношении паразитирующих в коже человека клещей рода Demodex. В норме клещи обитают в устьях сальных желез и волосяных фолликулах, являются сапрофитами, однако вследствие нарушения местного иммунитета (предположительно) могут становиться паразитами. На рис. 1 изображены

Цель исследования — изучение акарицидного действия препарата Д-18 (АО «Ретиноиды», Россия) в отношении клещей рода Demodex в эксперименте in vitro. В задачи работы входили:

1) изучение акарицидного действия препарата Д-18 (АО «Ретиноиды», Россия);

2) сравнительный анализ действия нового средства с акарицидным действием и препарата, содержащего ивермектин 1%.

Тестируемый препарат был предоставлен АО «Ретиноиды» в металлических тубах по 35 г. Тубы хранили в холодильнике (температурный интервал: +2—4 °C) в провизорской комнате с ограниченным доступом и контролируемыми условиями среды [1, 2]. По окончании исследования неиспользованные остатки препарата утилизировали. В работе участвовали 10 здоровых добровольцев в возрасте от 30 до 75 лет, у которых в утренние часы с помощью шпателя с крыльев носа выполняли забор содержимого сально-волосяных комплексов. Под микроскопом выделяли взрослых особей клещей и помещали в 50% водный раствор глицерина, после чего подтверждали их видовую принадлежность. Для эксперимента отбирали особей с выраженной двигательной активностью тела, конечностей и ротового аппарата. Взятие соскоба повторяли через 1 нед во всех экспериментальных группах. Выделенных клещей препаровальной иглой перемещали из капли раствора глицерина на левую половину стекла и в зависимости от группы исследования вплотную окружали препаратом Д-18, его мазевой основой или препаратом сравнения с 1% ивермектином (рис. 2).

Специфическую акарицидную активность мази в сравнении с препаратом со сходным действием изучали в соответствии с ранее опубликованной методикой [3]. Под микроскопом каждые 30 мин с момента окружения препаратами оценивали двигательную активность тела, конечностей и ротового аппарата клещей. Гибель констатировали по отсутствию признаков движения. Микроскопическое исследование проводили на световом микроскопе Axioskop 2 с камерой AxioCam и программным обеспечением AxioVision («Carl Zeiss», Германия).

Для оценки среднего времени гибели клещей рода Demodex применяли методы описательной статистики: подсчитывали среднее значение (M) и стандартную ошибку среднего (SE), которые представляли в итоговой таблице. Для определения достоверности межгрупповых различий данные проанализировали параметрическими или непараметрическими критериями в зависимости от типа распределения количественных данных. Анализ выполняли и усредняли для каждого добровольца отдельно, после чего усредняли для всех 10 человек, что позволило учесть ошибку с поправкой на индивидуальные особенности добровольцев. Таким образом, в знаменателе вычисляемой ошибки за число значений принимали 10 (число добровольцев), а не 50 (суммарное количество клещей в каждой группе, полученное от 10 человек). При определении нормальности распределения использовали критерий Колмогорова—Смирнова, согласно которому во всех случаях распределение величин было нормальным; это позволило применить для оценки достоверности различий между группами t-критерий Стьюдента. Расчеты проводили с использованием программного обеспечения Microsoft Excel. Различия определяли при уровне значимости в 5% [4, 5].

Результаты исследования акарицидного действия препарата Д-18, его основы и препарата сравнения (ивермектин 1%) на клещах рода Demodex представлены в таблице.

Отмечено акарицидное действие препарата Д-18, сопоставимое по времени гибели клещей с результатами, полученными для препарата сравнения (ивермектин 1%); статистически значимые различия между этими экспериментальными группами не обнаружены.

Отсутствие различий между изучаемыми признаками мази Д-18 и препарата сравнения (ивермектин 1%) свидетельствует о равноценном выраженном акарицидном эффекте при применении препаратов.

Клещи рода Demodex являются сапрофитами кожи человека, однако существуют причины, способствующие их переходу в патогенную форму. Так, воздействие высоких температур, ультрафиолетовое излучение, неблагоприятные бытовые и рабочие условия относят к внешним причинам; изменения в иммунной системе человека, связанные с заболеваниями нервной, сосудистой, гормональной систем, желудочно-кишечного тракта, нарушение функций обменных процессов — к внутренним [6]. Осложнение демодекозом является седьмым по частоте среди кожных заболеваний и составляет 2—5%, его частота у пациентов с розацеа — 88,7%, у лиц с папуло-пустулезными дерматозами — 10,5%, а с периоральным дерматитом — 58,8% [7—10]. По данным литературы [11, 12], демодекоз может быть как самостоятельным первичным процессом, так и сопровождать такие заболевания, как акнеформные дерматозы, фолликулиты, себорейный дерматит и т. д.

В 2010 г. R. Segal и соавт. [13] предложили в качестве диагностического инструмента использовать дерматоскоп, позволяющий увидеть клещей на поверхности кожного покрова. К бескровным методам исследования также относят стандартизированную биопсию поверхности кожи с дальнейшим изучением материала с помощью световой или электронной микроскопии [14—16]. Другие атравматичные методы исследования включают применение оптической когерентной томографии, позволяющей в режиме реального времени оценить состояние кожи пациентов в двух проекциях, и конфокальной лазерной сканирующей микроскопии поверхностных слоев кожи in vivo, с помощью которой можно получить объемное четырехмерное изображение [9, 13]. Преимуществами методов являются неинвазивность и комфорт пациента, а также их высокая информативность. Применение этих методов позволяет подтвердить эффективность лечения согласно имеющимся диагностическим критериям, а также выполнить подбор и своевременную корректировку врачебных назначений. В настоящее время терапию демодекоза проводят поэтапно, системно с включением противовоспалительных, антибактериальных, десенсибилизирующих и прочих препаратов, а также профилактических мероприятий [17].

Сложившиеся эмпирические представления о лечении демодекоза не в полной мере учитывают возможность этиологической терапии препаратами с акарицидным эффектом как в качестве монокомпонентной, так и в составе комплексной терапии. Это связано с тем, что в развитии данного заболевания могут играть роль не только нарушение функции гистогематических барьеров, но и проникновение продуктов жизнедеятельности паразитов в систему местной микроциркуляции крови. Снижение локальной иммунорезистентности обусловливает увеличение количества паразитов и возрастание их активности. Это в свою очередь может стать причиной скопления токсических веществ в сосудах микроциркуляции кожи, что снижает их эластичность, увеличивает проницаемость эндотелия и расширение сосудистой сети. Возникает местный ангионевротический отек, визуально выглядящий как розацеа. Поскольку этиология и патогенез демодекоза мало изучены, следует учитывать антипаразитарный эффект и нормализацию регуляции сосудистого компонента гистогематического барьера в качестве подходов к лечению.

В данном исследовании показан акарицидный эффект от применения препарата Д-18 и его компонентов, а также препарата сравнения (действующее вещество — ивермектин 1%) в эксперименте in vitro на клещах рода Demodex. Представленный на рынке препарат, содержащий ивермектин 1%, имеет такие противопоказания, как индивидуальная непереносимость, беременность, лактация, возраст до 18 лет, а также ряд побочных эффектов, таких как жжение, раздражение, зуд, сухость кожи, контактный и аллергический дерматит. Препарат ограничен в применении у пациентов с патологией печени.

По данным доклинических исследований, проведенных в компании АО «Ретиноиды», экспериментальный препарат Д-18 имеет низкую степень токсичности, что свидетельствует о его большей безопасности.

В связи с предполагаемым включением в МКБ-11 нового заболевания, вызванного клещами Demodex, актуальной задачей становится создание отечественного препарата с акарицидным эффектом в отношении вышеуказанных паразитов. Результаты настоящего исследования состава Д-18 in vitro продемонстрировали его выраженный противопаразитарный эффект в сравнении с имеющимся на рынке аналогом. Таким образом, концепция импортозамещения, проводимая в Российской Федерации, позволит реализовать создание нового конкурентоспособного отечественного лекарственного средства Д-18, обладающего акарицидным действием.

Д-18 и препарат сравнения (ивермектин 1%) вызывают гибель клещей рода Demodex через 2—2,5 ч от начала исследования. Статистически значимые различия в этих группах по отсутствию двигательной активности клещей в условиях настоящего эксперимента не выявлены.

Сведения об авторах

К.Н. Пустовая — https://orcid.org/0000-0002-6108-8902

Г.А. Пьявченко — https://orcid.org/0000-0001-7782-3468

М.В. Арисов — https://orcid.org/0000-0002-2103-8468

В.И. Ноздрин — https://orcid.org/0000-0001-8488-0778

Автор, ответственный за переписку: Пустовая Кристина Николаевна — АО Фармацевтическое научно-производственное предприятие «Ретиноиды», Балашиха, Московская область, Россия; e-mail: pustovaya@retinoids.ru