Общеизвестно, что источником развития нейтрофильных лейкоцитов является стволовая кроветворная клетка. В среднем общая продолжительность формирования нейтрофилов в красном костном мозге составляет 13 сут и включает фазу пролиферации с продолжительностью в 6 сут и фазу созревания - 7 сут. Именно в фазу созревания начинается сегментация ядер нейтрофилов. В крови нейтрофилы циркулируют до 14-16 ч, а затем мигрируют в ткани [1-4].

В нормальной коже количество нейтрофильных лейкоцитов незначительное. В основном они локализуются в сосочковом слое дермы и периваскулярно в сетчатой дерме, а также в подкожно-жировой клетчатке. Нейтрофилы дермы и гиподермы ничем не отличаются от тканевых нейтрофилов другой локализации. В эпидермисе нейтрофилов практически нет. Проникновение их в эпидермис связано с продукцией кератиноцитами хемоаттрактанта для нейтрофилов - интерлейкина-8, что регистрируется при псориазе в виде очаговых скоплений нейтрофилов в роговом слое [2, 5-8].

Нейтрофилы традиционно относятся к фагоцитирующим клеткам, которые благодаря ряду уникальных свойств рассматриваются как высокопрофессиональные «убийцы», составляющие своеобразный «отряд быстрого реагирования» в системе противоинфекционной защиты организма [2, 4]. Нейтрофилы обладают всеми функциями фагоцитирующих клеток: адгезивностью, подвижностью, способностью к хемотаксису и захвату бактерий и других частиц, способностью убивать захваченные микроорганизмы с помощью кислородзависимых и кислороднезависимых механизмов, переваривать захваченные объекты фагоцитоза [4, 9, 10]. Имеются свидетельства о роли нейтрофилов в представлении антигенов моноцитам и лимфоцитам, а также о возможности регулировать функции иммунокомпетентных клеток через продукцию цитокинов [7-9, 11, 12]. Нейтрофилы участвуют в поддержании тканевого гомеостаза, регулируя функционирование других клеток путем проявления цитотоксической и цитостатической активности [3, 4].

Поведение нейтрофилов в крови определяется несколькими классами мембранно-связанных белков адгезии, в том числе селектинами, интегринами, суперсемейством иммуноглобулинов [3, 9]. В настоящее время фактически нет сведений относительно зависимости уровня экспрессии молекул адгезии циркулирующего пула нейтрофилов от морфологических изменений со стороны этих клеток, в частности сегментации их ядра.

Цель исследования - определение уровня экспрессии молекул адгезии нейтрофилами в зависимости от сегментации их ядра.

Проведено клинико-иммунологическое обследование 71 больного (34 мужчины и 37 женщин) в возрасте от 20 до 60 лет с вульгарным и экссудативным псориазом в прогрессирующую и стационарную стадии. Контрольную группу составили 50 человек (22 мужчины и 28 женщин) в возрасте от 20 до 60 лет, не имеющих хронической патологии в анамнезе. Венозную кровь для исследования брали утром натощак. На проточном цитометре FC-500 (Beckman Coulter) определяли экспрессию нейтрофилами молекул L-селектина (CD62L), LFA-1 (CD11a/CD18), ICAM-1 (CD54), LFA-3 (CD58), PECAM-1 (CD31).

В мазке крови, зафиксированном смесью Никифорова и окрашенном по Романовскому-Гимзе, определяли удельный вес нейтрофилов среди других лейкоцитов: эозинофилов, базофилов, моноцитов, лимфоцитов. Цитоскопическое исследование нейтрофильных лейкоцитов проводили путем подсчета среднего количества фрагментов ядра у 100 клеток [13].

Статистическую обработку результатов проводили с помощью SPSS 13.0 for Windows. Распределение параметров было ненормальным, в связи с чем описание выборок проводили с помощью подсчета медианы (Мd) и межквартильного интервала (С25-С75). Вероятность различий оценивали по непараметрическому критерию Колмогорова-Смирнова. Корреляционный анализ проведен с использованием коэффициента корреляции Спирмена.

Общее содержание нейтрофильных лейкоцитов у больных псориазом и практически здоровых лиц как в относительных (51,0-63,0%, среднее - 56,0%; и 49,0-62,0, среднее - 56,0%; Z=0,65; р=0,78), так и в абсолютных (2,89-4,58·10⁹ кл/л, среднее 3,51·10⁹ кл/л; 3,02-4,78·10⁹ кл/л, среднее - 3,90·10⁹ кл/л; Z=0,79; p=0,55) цифрах не различалось. Различия заключались в структуре сегментограммы. У больных псориазом отмечали статистически достоверное увеличение 2- (в среднем с 12,0 до 14,0%; Z=1,4; p=0,03) и 3-сегментных форм (с 38,0 до 41,0; Z=1,44; p=0,03) на фоне снижения удельного веса 4- (с 31,0 до 27,0%; Z=1,63; p=0,01) и 5-сегментных форм нейтрофилов (с 13,0 до 7,0%; Z=2,44; p=0,001). Итогом изменений в структуре сегментограммы было достоверное снижение индекса сегментации у больных псориазом (с 3,38 до 3,17; Z=2,16; p=0,001).

Несмотря на то что общее содержание нейтрофилов у больных псориазом и практически здоровых лиц не различалось, изменения в уровнях экспрессии молекул адгезии нейтрофилами, хотя и в виде тенденции, были зарегистрированы. Как известно, фаза скольжения обеспечивается селектинами, в том числе L-селектинами [9]. Молекулу L-селектина у больных псориазом экспрессировало несколько меньшее количество нейтрофилов: 2,43·10⁹ кл/л (1,34-3,63·10⁹ кл/л) против 2,20·10⁹ кл/л (1,39-2,99·10⁹ кл/л); Z=0,87; р=0,42. Уровень нейтрофилов, экспрессирующих молекулы фазы прочной адгезии, также имел тенденцию к снижению: ICAM-1 (с 1,91·10⁹ до 1,58·10⁹ кл/л; Z=0,94; р=0,33), LFA-1 (с 3,67·10⁹ до 3,25·10⁹ кл/л; Z=0,99; р=0,27), тогда как снижение содержания нейтрофилов, несущих рецептор LFA-3, было статистически достоверным (с 3,14·10⁹ до 2,32·10⁹ кл/л; Z=1,46; р=0,02). Концентрация нейтрофилов у больных псориазом, имеющих молекулу PECAM-1, которая обеспечивает фазу трансмиграции, также была снижена (с 3,53·109 до 3,0·109 кл/л; Z=0,95; р=0,31).

Таким образом, общее содержание нейтрофилов у больных псориазом было такое же, как и у здоровых лиц, но с той лишь разницей, что у больных псориазом снижение индекса сегментации происходило за счет увеличения 2-сегментных форм и уменьшения концентрации нейтрофилов с 4-мя и 5-ю сегментами в ядре на фоне снижения уровня экспрессии молекул адгезии, участвующих в фазах скольжения, прочной адгезии и трансмиграции.

Вполне вероятно, что процесс созревания нейтрофилов в костном мозге не изменен, поскольку не было зарегистрировано юных форм нейтрофилов. Указанные сдвиги сегментограммы у больных псориазом могут свидетельствовать об изменениях, происходящих в немитотическом пуле костного мозга, когда возникает потребность в 2-3-сегментных формах. Дальнейшая сегментация ядер нейтрофилов в немитотическом пуле не успевает проходить, что можно расценивать как компенсаторную реакцию, которая развивается в ответ на усиленную миграцию нейтрофилов из микроциркуляции в ткань [1, 3].

Корреляционный анализ показал, что у практически здоровых лиц наблюдались статистически достоверные отрицательные корреляции между концентрацией 2-сегментных форм нейтрофилов и содержанием нейтрофилов, несущих молекулы L-селектина (r=–0,48; р=0,001), ICAM-1 (r=–0,37; р=0,01), LFA-3 (r=–0,40; р=0,01), LFA-1(r=–0,25; р=0,08), а также между 3-сегментными формами нейтрофильных лейкоцитов и уровнем нейтрофилов, имеющих молекулы ICAM-1 (r=–0,43; р=0,003) и LFA-1 (r=–0,33; р=0,02), тогда как содержание нейтрофилов с 5-ю сегментами в ядре положительно коррелировало с содержанием нейтрофилов, экспрессирующих молекулы L-селектина (r=0,41; р=0,004), ICAM-1 (r=0,56; р=0,001), LFA-3 (r=0,41; р=0,01), LFA-1 (r=0,33; р=0,02). Вполне вероятно, что у практически здоровых лиц фазы скольжения и прочной адгезии связаны с 5-сегментными формами нейтрофилов, которые преимущественно и уходят из микроциркуляторного русла в ткани.

У больных псориазом в отличие от здоровых лиц регистрировали положительную корреляцию между содержанием нейтрофилов, экспрессирующих молекулу LFA-1 с концентрацией 2 (r=0,25; р=0,03) и 3-сегментными формами (r=0,26; р=0,02) нейтрофилов и отрицательную - с 4 (r=–0,24; р=0,04) и 5 (r=–0,24; р=0,04) сегментными нейтрофилами. Учитывая наличие статистически достоверной корреляции между уровнем экспрессии нейтрофилами молекулы LFA-1 и содержанием 2-3-сегментных форм создается впечатление, что микроциркуляторное русло покидают, преимущественно, нейтрофилы с 2-3-мя сегментами в ядре. Подтверждением этого может быть более низкий уровень экспрессии молекулы CD95 на нейтрофилах у больных псориазом (в среднем 0,92·10⁹ кл/л против 1,76·10⁹ кл/л; Z=1,56; р=0,01), а также наличие у практически здоровых лиц статически достоверной прямой корреляция между содержанием нейтрофилов с молекулой CD95 и концентрацией 5-сегментными формами нейтрофильных лейкоцитов (r=0,41; р=0,02). Таким образом, более усиленная миграция 2-3-сегментных форм нейтрофилов у больных псориазом может являться причиной менее активного апоптоза нейтрофилов.