Пожарская В.О.

Научно-производственное объединение по медицинским и иммунобиологическим препаратам 'Микроген' МЗ и СР РФ, филиал в Ставрополе 'Аллерген', Ставропольская биофабрика

Климанович И.В.

Научно-производственное объединение по медицинским и иммунобиологическим препаратам 'Микроген' МЗ и СР РФ, филиал в Ставрополе 'Аллерген', Ставропольская биофабрика

Селиванова И.С.

Ставропольская государственная медицинская академия

Влияние антигена из очищенных протеинов клеточных структур культуральных бледных трепонем на течение экспериментальной сифилитической инфекции у кроликов

Авторы:

Пожарская В.О., Климанович И.В., Селиванова И.С.

Подробнее об авторах

Прочитано: 790 раз


Как цитировать:

Пожарская В.О., Климанович И.В., Селиванова И.С. Влияние антигена из очищенных протеинов клеточных структур культуральных бледных трепонем на течение экспериментальной сифилитической инфекции у кроликов. Клиническая дерматология и венерология. 2010;8(3):64‑69.
Pozharskaia VO, Klimanovich IV, Selivanova IS. The influence of antigen from purified proteins of cellular structures of cultured Treponema pallidum on the clinical course of experimental syphilitic infection in rabbits. Russian Journal of Clinical Dermatology and Venereology. 2010;8(3):64‑69. (In Russ.)

Рекомендуем статьи по данной теме:
Нес­пе­ци­фи­чес­кая со­ма­ти­чес­кая па­то­ло­гия у па­ци­ен­тов с си­фи­ли­сом. Кли­ни­чес­кая дер­ма­то­ло­гия и ве­не­ро­ло­гия. 2024;(4):398-404
Ве­не­ри­чес­кие за­бо­ле­ва­ния в Пермской гу­бер­нии в кон­це XVIII ве­ка и в XIX ве­ке. Кли­ни­чес­кая дер­ма­то­ло­гия и ве­не­ро­ло­гия. 2024;(5):626-630
Рет­рос­пек­тив­ный ана­лиз за­бо­ле­ва­емос­ти ин­фек­ци­ями, пе­ре­да­ва­емы­ми по­ло­вым пу­тем, в стра­нах ми­ра. Кли­ни­чес­кая дер­ма­то­ло­гия и ве­не­ро­ло­гия. 2025;(2):132-142

Распространение сифилитической инфекции в мире остается серьезной проблемой для здравоохранения, так как в соответствии с прогнозами число случаев заражения сифилисом будет составлять до 12 млн человек в год [1].

Снижение в Российской Федерации заболеваемости сифилисом в последние 10 лет характеризуется одновременным увеличением удельного веса ранних скрытых и поздних его форм, увеличением числа случаев врожденного сифилиса [2, 3]. Это связано с тем, что в настоящее время в области сифидологии не решен целый ряд проблем, обусловленных недостаточными знаниями иммунобиологических свойств возбудителя сифилиса Treponema pallidum. К числу таких проблем в первую очередь следует отнести возникновение высокой частоты развития серорезистентности, отсутствие достоверного контроля качества лечения сифилиса, недостаточность знаний о патогенезе образования и сохранения в организме невегетативных форм жизни T. pallidum и др.

Ведущим в диагностике различных форм сифилиса остается серологический метод исследования для определения в сыворотке крови больных специфических — антитрепонемных антител (АТАт) и неспецифических — антикардиолипиновых антител (АКАт). Наличие в организме АКАт при сифилитической инфекции свидетельствует об активности сифилитического процесса, а в отсутствие заболевания — о наличии антифосфолипидного синдрома [4].

Поскольку сифилис относится к антропонозной инфекции, то для изучения заболевания на модели широко используются кролики с экспериментальным сифилисом [1, 5, 6].

Сравнительное изучение патогенных бледных трепонем (ПБТ) и культуральных бледных трепонем (КБТ), утративших в процессе культивирования патогенные свойства, позволило выявить у них общие специфические протеиновые антигенные детерминанты и использовать эти детерминанты КБТ при конструировании эффективных диагностических тестов на сифилис [7, 8].

Достоверно установлено, что введение КСТ, содержащих специфические трепонемные и общие с другими микроорганизмами антигены, в организм кроликов с экспериментальным сифилисом приводит к увеличению в их сыворотках крови как АТАт, так и АКАт. Это послужило основой для получения высокотитражных кроличьих контрольных положительных сывороток для РСК на сифилис [9].

Целью настоящих исследований является изучение особенностей влияния протеинов клеточных структур КБТ, очищенных от общих групповых неспецифических протеиновых антигенов, на течение экспериментальной сифилитической инфекции кроликов в динамике вплоть до полной негативации специфических и неспецифических серологических реакций на сифилис с их сыворотками крови.

Материал и методы

Клеточные структуры (КСТ) выделяли из биомассы КБТ 5 штаммов (V, VII, VIII, IX и Reiter, принадлежащих к различным иммунологическим группам) в соответствии с известными методиками выращивания КБТ и получения КСТ [8]. Освобождение суммарных протеинов КСТ от общих групповых антигенов проводили методом их аффинной очистки по известным методикам [10, 11]. Стандартизировали полученные очищенные протеины КСТ (ОП КСТ) по сухому весу (0,023 г/мл), разливали в ампулы по 1 мл, лиофилизировали, проводили контроль стерильности.

В опыте использовали 40 кроликов породы Шиншилла массой 3±0,3 кг, которые были разделены на 2 группы по 20 кроликов: 10 контрольных и 10 опытных животных. Для получения экспериментального сифилиса в каждой группе все кролики были одновременно заражены взвесью 108 трепонем/мл ПБТ штамма Никольс, которую вводили по 2 мл интратестикулярно каждому кролику. Взвесь ПБТ перед заражением кроликов получали из тестикул кроликов с экспериментальной сифилитической инфекцией (СИЭ) на 7—8-й день после заражения по известной методике [7] и стандартизировали до содержания 108 трепонем/мл. Всем опытным животным двух групп на 14-й день после заражения вводили внутривенно ОП КСТ в дозе 0,023 г/мл в 2 мл изотонического раствора натрия хлорида.

Микроскопические исследования материалов из пунктатов сифилитического орхита и шанкров кроликов опытной и контрольной групп (20 животных) проводили в темнопольном микроскопе. Подсчитывали количество «извитых», «зернистых», и «цистных» форм ПБТ на 100 клеток в поле зрения (в 5 полях зрения) при помощи счетчика форменных элементов крови с маркировкой клавиш: «извитые Ф», «зернистые Ф», «цистные Ф». Исследование пунктатов проводили с 7-го по 49-й день после заражения с интервалом 1 нед до срока полного отсутствия в пунктатах извитых форм ПБТ. Это связано с тем, что видимая подвижность зерен-гранул и цистных форм клеток со временем резко снижается и их дифференциальная диагностика в общем содержимом пунктатов в отсутствие извитых форм не представляется возможной.

Клинические характеристики развития орхита и шанкра учитывали путем осмотра, пальпации яичек и семенников от начала до завершения видимых и определяемых пальпацией патологических изменений в контрольной и опытной группах кроликов в сроки от 7 до 84 дней (от 1 до 12 нед) каждые 4—5 дней. По развитию клинических проявлений течение первичного сифилиса разделено на 7 этапов: развивающийся орхит, развитый орхит, развивающийся шанкр, зрелый шанкр, начинающийся распад шанкра, распад шанкра, заживление шанкра, с описанием каждого этапа по методике [12]. Учитывали сроки 100% совпадения симптомов каждого этапа в группе контроля и в группе опыта.

Сроки вторичного проявления сифилиса определяли от момента появления папул на морде кроликов до отпадания корочек и появления плешивости волосяных покровов на их месте. Проводили темнопольную микроскопию отделяемого папул для определения в материале извитых форм ПБТ.

Предварительные серологические тесты сывороток крови у всех кроликов, взятых в исследование, позволили выявить отрицательные результаты в РСК с ультраозвученным трепонемным антигеном (УЗТА) и с кардиолипиновым антигеном (КА), а также в реакции микропреципитации с кардиолипином (РМП-К). Набор этих реакций использовали при проведении всех серологических исследований сывороток крови опытной и контрольной групп кроликов, выполняли по стандартным методикам [7, 13]. Забор крови и получение сывороток крови кроликов в контрольной и опытной группах проводили на 14, 21, 28, 45, 52 и 60-й день после заражения и затем ежемесячно до определения в них полной негативации титров специфических и неспецифических антител в РСК-УЗТА, РСК-К и РМП-К соответственно.

Результаты

В пунктатах из орхитов и шанкров контрольной и опытной групп кроликов с экспериментальным сифилисом (табл. 1)

при темнопольной микроскопии установлено, что на 14-й день после заражения кроликов ПБТ в обеих группах произошло одинаковое снижение количества извитых форм ПБТ в среднем на 60% с одновременным увеличением содержания в них в среднем до 50% зернистых и до 10% цистных форм ПБТ. При дальнейшем развитии сифилитического процесса в контрольной группе кроликов на 28-й день по сравнению с 14-м днем отмечены значительное снижение количества извитых форм трепонем (в среднем с 40 до 5%), незначительное нарастание количества зернистых форм (в среднем с 50 до 55%) и значительное увеличение (в среднем с 10 до 40%) количества цистных форм ПБТ. На 35-й день наблюдений извитые формы ПБТ в пунктатах кроликов обнаружены не были.

Введение очищенных протеинов клеточных структур КБТ опытной группе кроликов на 14-й день после заражения привело через 7 дней (на 21-й день наблюдений) по сравнению с 14-м днем в контрольной группе к резкому увеличению в среднем в 1,75 раза числа извитых форм ПБТ (с 40 до 70%) и снижению в 2,5 раза среднего количества зернистых форм (с 50 до 20%), не затрагивая количественного изменения цистных форм ПБТ (10%).

На фоне введенного ОП КСТ к 42-му дню наблюдений прослеживались снижение среднего содержания извитых форм и более выраженная динамика нарастания зернистых форм по сравнению с цистными формами ПБТ.

Анализ соотношений форм ПБТ при одинаковом в контрольной и опытной группах кроликов среднем количестве извитых форм ПБТ (5%) позволил выявить, что в контрольной группе (на 28-й день) среднее количество зернистых форм ПБТ превышало среднее количество цистных форм в среднем в 1,4 раза, а в опытной группе (на 42-й день) — в среднем в 2,2 раза.

Длительность периода определения извитых форм ПБТ в пунктатах из орхитов и шанкров опытной группы превышало этот период в контрольной группе кроликов в среднем в 1,5 раза (42 и 28 дней соответственно).

Временны`е характеристики клинических проявлений первичного сифилиса по этапам от развивающегося орхита до заживления шанкра и вторичного сифилиса от момента появления папул на морде кроликов до образования на их местах участков плешивости в контрольной и опытной группах кроликов представлены в табл. 2.

Установлено, что в контрольной группе кроликов длительность процесса проявления первичного сифилиса от момента их заражения до заживления шанкра составила 12 нед. В то же время на фоне введения ОП КСТ на 14-й день после заражения кроликов этот период завершился за 10 нед за счет уменьшения длительности развития и распада шанкра (3—5 и 3—7 нед соответственно).

Сроки заживления шанкра в опытной и контрольной группах кроликов совпадают и составляют 35 дней.

Сроки клинических проявлений вторичного сифилиса в опытной и контрольной группах кроликов совпадают и приходятся на 23—26-ю неделю. На 23-й неделе на морде кроликов появлялись от 2 до 5 папулезных высыпаний в области надбровных дуг, переносицы и у основания ушей в различных сочетаниях. В этот период было определено при темнопольной микроскопии в отделяемом материале одной из папул наличие 2—3 трепонем у 2 кроликов опытной и контрольной групп, что подтверждает их сифилитическое происхождение.

Результаты исследований динамики средних титров специфических и неспецифических антител в сыворотках крови кроликов контрольной группы с экспериментальным сифилисом представлены на рис. 1,

Рисунок 1. Динамика средних титров специфических и неспецифических антител в сыворотках крови кроликов с экспериментальным сифилисом и в контрольной группе.
а опытной группы кроликов на фоне введения ОП КСТ на 14-й день — на рис. 2.
Рисунок 2. Динамика средних титров специфических и неспецифических антител в сыворотках крови кроликов с экспериментальным сифилисом на фоне введения на 14-й день очищенных протеинов клеточных структур культуральных бледных трепонем.

Согласно полученным данным, в опытной и контрольной группах в сыворотках крови кроликов средние титры АТАт и АКАт в РСК совпадают на протяжении всего периода наблюдений. Установлено, что максимальные средние титры АКАт в РСК достоверно (р<0,05) больше максимальных титров АКАт в РМП-К на 45-й день, как в контрольной (1:18±2 и 1:8,4±0,5 соответственно), так и опытной группах (1:40±2 и 1:24±2 соответственно).

На 21-й день наблюдений в опытной группе по сравнению с контрольной выявлено увеличение средних титров АТАт и АКАт в РСК в 3 раза, а средних титров АКАт в РМП-К — в 3,6 раза, которые оставались высокими в течение почти 2 мес во всех реакциях. В течение 6-го месяца в опытной группе кроликов выявлена стабилизация средних титров антител во всех тестах, а в контрольной группе — в течение 6—7 мес (см. рис.1, 2). С 7-го месяца средние титры АТАт и АКАт в используемых серологических тестах в опытной и контрольной группах совпадают (или достоверно не различаются).

Сроки негативации титров АКАт в РМП-К в опытной и контрольной группах кроликов совпадают и равны 8 мес, а негативации титров АТАт и АКАт в РСК — 9,5 мес.

Обсуждение

Комплексное изучение закономерностей влияния антигена из очищенных протеинов клеточных структур КБТ на течение экспериментального сифилиса кроликов позволило выявить взаимосвязь характеристик возбудителя T. pallidum в пунктатах из яичек кроликов, клинических проявлений первичного и вторичного сифилиса кроликов и динамики изменения средних титров антитрепонемных и антикардиолипиновых антител до их полной негативации в серологических реакциях.

Введение на 14-й день после заражения кроликов ПБТ очищенных протеинов клеточных структур КБТ сопровождается резким увеличением относительного количества извитых форм ПБТ в пунктатах из яичек кроликов с одновременным увеличением в их сыворотках крови антитрепонемных и антикардиолипиновых антител. Это наряду с данными клинических проявлений подтверждает свойство ОП КСТ резко активизировать течение экспериментальной сифилитической инфекции через неделю после введения.

Несмотря на снижение относительного количества извитых форм ПБТ в пунктатах кроликов через 2—3 нед после введения ОП КСТ, на фоне стабильно высоких титров АТАт и АКАт сокращаются сроки развития и распада шанкров, тем самым сокращая сроки проявления первичного сифилиса у кроликов.

Характерной особенностью развития сифилитической инфекции кроликов на фоне введения ОП КСТ является удлинение сроков определения извитых форм ПБТ с увеличением в среднем в 2 раза зернистых форм ПБТ по сравнению с цистными формами в пунктатах из их яичек. Полученные данные свидетельствуют о ведущем значении зернистых форм в этом процессе.

Введение ОП КСТ не влияет на сроки заживления шанкра, сроки проявления и характеристики вторичного сифилиса, а также на сроки негативации специфических и неспецифических антител в сыворотках крови кроликов.

Заключение

Введение антигена из очищенных протеинов клеточных структур трепонем в организм кроликов на 14-й день после их заражения экспериментальным сифилисом приводит к резкой активизации сифилитического процесса и сокращению сроков проявления первичного сифилиса и не влияет на сроки проявления вторичного сифилиса и сроки негативации реакций на сифилис.

* Комментарий редакционной коллегии . Изучение иммунобиологических характеристик течения сифилитической инфекции на экспериментальной модели кроликов представляет значительный научный и практический интерес, но в силу известных обстоятельств в России в последние годы практически не проводится. Авторы — одни из немногих — попытались восполнить пробел знаний о развитии патологического процесса при внедрении бледной трепонемы, наряду с этим изучая динамику специфических и неспецифических антител, а также особенности клинических проявлений заболевания.

Однако нам представляется спорным создание столь сложной модели заболевания в силу неясных перспектив в понимании патогенеза заболевания, а главное — каким образом можно использовать эти данные? Кроме того, авторы проводят исследования под контролем РСК, отмененного Приказом №87 от 2001 г., на который они, тем не менее, ссылаются.

Не умаляя ценности представленных результатов, мы считаем целесообразным указать в данном исследовании направление поиска инструмента, позволяющего изучать воздействие современных бактерицидных препаратов на Treponema рallidum и/или физических факторов, оптимизирующих комплекс лечебных мероприятий.

Подтверждение e-mail

На test@yandex.ru отправлено письмо со ссылкой для подтверждения e-mail. Перейдите по ссылке из письма, чтобы завершить регистрацию на сайте.

Подтверждение e-mail

Мы используем файлы cооkies для улучшения работы сайта. Оставаясь на нашем сайте, вы соглашаетесь с условиями использования файлов cооkies. Чтобы ознакомиться с нашими Положениями о конфиденциальности и об использовании файлов cookie, нажмите здесь.