Исмагилов Ш.М.

Кафедра оториноларингологии Казанского государственного медицинского университета Минздрава России, Казань, Россия, 420012

Цыплаков Д.Э.

кафедра общей патологии Казанского государственного медицинского университета Минздрава России, Казань, Россия, 420012

Сравнительная иммуногистохимическая характеристика глоточной миндалины при разной степени экологической нагрузки

Журнал: Вестник оториноларингологии. 2015;80(4): 30-33

Просмотров : 30

Загрузок :

Как цитировать

Исмагилов Ш. М., Цыплаков Д. Э. Сравнительная иммуногистохимическая характеристика глоточной миндалины при разной степени экологической нагрузки. Вестник оториноларингологии. 2015;80(4):30-33. https://doi.org/10.17116/otorino201580430-33

Авторы:

Исмагилов Ш.М.

Кафедра оториноларингологии Казанского государственного медицинского университета Минздрава России, Казань, Россия, 420012

Все авторы (2)

Гиперплазия глоточной миндалины вносит существенный вклад в патологию ЛОР-органов у детей. Морфологическому изучению аденоидных вегетаций посвящено большое число работ. В то же время иммуногистохимические исследования весьма немногочисленны. Достаточно подробно с применением данного метода описано только состояние микроциркуляторного русла [1, 2]. В то же время глоточная миндалина является периферическим органом иммунной системы и отвечает на различные патологические воздействия специфическими иммуноморфологическими реакциями [3]. В настоящее время ни у кого не вызывает сомнений, что состояние иммунной системы во многом определяется экологическими факторами. Изменения глоточной миндалины также могут быть связаны с влиянием загрязняющих атмосферу веществ [4].

Среди населения, в первую очередь детского, в районах с высокой антропотехногенной нагрузкой увеличивается частота ЛОР-заболеваний. Однако гистологические исследования лимфоидной ткани носоглотки с применением моноклональных антител в зависимости от экологического воздействия в доступной нам литературе отсутствуют. Не проводился также и морфометрический анализ, позволяющий получить статистически достоверные результаты.

Цель настоящей работы — сравнительное комплексное иммуноморфологическое исследование ткани глоточной миндалины детей, проживающих в районах Республики Татарстан (РТ) с разной степенью экологической нагрузки.

Материал и методы

Было изучено 100 операционных образцов гиперплазированной ткани аденоидных вегетаций. Все наблюдения были разделены на три группы. В 1-й группе (n=20) исследовались глоточные миндалины детей, проживающих в районах РТ с низкой степенью загрязнения воздушного бассейна, во 2-й (n=48) — со средним уровнем загрязнения, в 3-й (n=32) — с высокой степенью загрязнения атмосферного воздуха.

Фиксацию образцов проводили в 10% нейтральном формалине по Лилли или жидкости Боуэна. После соответствующей проводки [5] материал заливали в парафин. Гистологические срезы окрашивали гематоксилином, эозином и пикрофуксином по Ван-Гизону.

Иммуногистохимическое исследование проводили с помощью набора моноклональных антител (МКАТ), характеристика которых представлена в табл. 1.

Таблица 1. Характеристика первых антител

Связывание антител с клеточными и структурными элементами определяли при помощи стандартного биотин-стрептавидин-пероксидазного метода (DAKO: LSAB + System-HRP, код K0690) с диаминобензидином в качестве хромогена [6]. Срезы заключали в канадский бальзам или в специальные среды фирмы DAKO (Ultramount, Faramount, код S302580−2).

Иммуногистохимические реакции в структурных и клеточных элементах глоточной миндалины оценивали с учетом интенсивности и процента окрашенных клеток [7]. В каждом случае подсчитывали 100 клеток. Критерии иммуногистохимического окрашивания представлены в табл. 2.

Таблица 2. Критерии иммуногистохимического окрашивания

Кроме того, на гистологических препаратах проводили морфометрическое изучение ряда структурных компонентов миндалины при помощи морфометрической сетки случайного шага [8]. Измерялись площади различных типов эпителиальной выстилки, лимфоидных фолликулов без светлых (реактивных) центров и с их наличием, кровеносных сосудов, соединительной ткани.

Полученные данные были обработаны статистически с вычислением критерия Стьюдента и величины p (достоверность различий).

Результаты и обсуждение

Как показали наши исследования, во всех случаях имелись морфологические изменения глоточной миндалины, выраженность которых была различной, что касалось в той или иной степени всех ее структурных компонентов: эпителиальной выстилки, лимфоидной ткани, а также стромы и сосудов.

Для всех групп наблюдений были характерны микроциркуляторные расстройства. В 1-й группе общая площадь кровеносного микроциркуляторного русла составляла 5,10±0,53% (табл. 3).

Таблица 3. Площадь некоторых структурных компонентов глоточной миндалины (%), М±m

Как правило, имелись выраженное полнокровие и расширение просвета сосудов или их неравномерное кровенаполнение. Сосудистые стенки были отечны, иногда с явлениями плазматического пропитывания или мукоидного набухания. Имел место выход форменных элементов крови за пределы сосудов. Эндотелиальная выстилка, судя по экспрессии CD31, в этой группе существенно не менялась. Кровеносные сосуды были с неповрежденной базальной мембраной, которая при реакции с МКАТ к коллагену IV контурировалась в виде непрерывной тонкой полосы.

Во 2-й группе микроциркуляторные расстройства были выражены сильнее. Площадь кровеносного микроциркуляторного русла увеличивалась до 6,73±0,28%, что происходило не только за счет расширения просвета сосудов, но и увеличения их количества, особенно мелких капилляров в субэпителиальной области. Кроме того, МКАТ к CD31 выявляли набухание эндотелия. В этой же группе имелись неравномерное окрашивание и очаговые утолщения базальной мембраны, судя по экспрессии МКАТ к коллагену IV. В ряде случаев наблюдался склероз сосудистых стенок.

В 3-й группе экстраваскулярно встречались уже не только отдельные эритроциты, но и участки обширных кровоизлияний. Судя по экспрессии CD31, имело место не только набухание эндотелия, но и десквамация его в просвет сосудов. Были характерны расщепление и фрагментация базальных мембран, что выявлялось МКАТ к коллагену IV.

Кроме того, в миндалинах этой группы имелись как склероз стенок сосудов, так и периваскулярные разрастания соединительной ткани. Этим объясняется и уменьшение площади кровеносного микроциркуляторного русла в этой группе до 3,01±0,42%.

Следует отметить, что в процесс вовлекались не только кровеносные, но и лимфатические сосуды. Во 2-й группе имело место их расширение с явлениями лимфостаза в отдельных сосудах, а в 3-й — склероз и выраженный лимфостаз практически во всех сосудах (рис. 1).

Рис. 1. Склероз ткани миндалины, стенок кровеносных и лимфатических сосудов, выраженный лимфостаз. Окраска по Ван-Гизону. Ув. 200.

Реакция лимфоидной ткани проявлялась прежде всего гиперплазией лимфоидных фолликулов с появлением крупных светлых (реактивных) центров, площадь которых в 1-й группе составляла 48,76±2,97%. При этом фолликулы, расположенные под эпителием, были самыми крупными и имели наиболее выраженные реактивные центры. Такие фолликулы всегда имели отчетливую мантийную зону из малых лимфоцитов, толщина которой была больше на стороне, обращенной к эпителиальной выстилке. Иногда гиперплазированные фолликулы занимали практически всю площадь среза миндалины.

Иммуногистохимический анализ при этом показывал увеличение в них экспрессии МКАТ к CD20 — маркера В-лимфоцитов, а в ряде наблюдений — МКАТ к CD68 — маркера макрофагов (рис. 2, табл. 4). В последнем случае при рутинных окрасках наблюдалась так называемая картина «звездного неба». Кроме того, как В-клетки, так и макрофаги в той или иной степени диффузно располагались во всех структурных компонентах миндалины, инфильтрируя иногда эпителиальную выстилку. Это было характерно и для CD3 (+) Т-клеток, которые также обнаруживались повсеместно, хотя и в меньшем количестве, чем В-лимфоциты. Следует отметить преобладание лимфоцитов с В-клеточным фенотипом над элементами, экспрессирующими Т-клеточный маркер.

Таблица 4. Иммуногистохимический фенотип некоторых клеточных и структурных компонентов глоточной миндалины

Рис. 2. Реакция с МКАТ против CD68 в реактивном центре фолликула. LSAB-метод с докраской гематоксилином. Ув. 400.

Сравнение исследуемых групп показало, что во 2-й группе гиперпластическая фолликулярная реакция в целом сохранялась (49,01±2,11%), однако чаще встречались крупные фолликулы со слабовыраженными или размытыми светлыми центрами, либо вообще без таковых. Площадь, занимаемая последними, была больше, чем в 1-й группе — 5,34±0,73%. Иногда имело место истончение мантийной зоны. При этом в фолликулах снижалась экспрессия МКАТ к CD20- и CD68-антигенам. Параллельно в интерфолликулярных зонах, судя по реакции с МКАТ к CD3, уменьшалось и количество Т-клеток.

Часто во 2-й группе в лимфоидной ткани миндалины обнаруживались участки склероза и очаговое разрежение клеточных элементов. Объем соединительной ткани возрастал по сравнению с 1-й группой до 17,04±1,01%.

В 3-й группе имело место уменьшение площади лимфоидных фолликулов со светлыми центрами до 41,72±1,92%. В ряде наблюдений встречались мелкие, редуцированные фолликулы, без светлых центров, иногда с явлениями деструкции, уменьшением в них количества лимфоцитов и оголением ретикулярной стромы. Мантийная зона у таких образований либо не определялась, либо была истонченной.

Значительно снижалась интенсивность иммуногистохимических реакций, что прежде всего касалось маркеров CD20, CD3 и CD68.

В некоторых случаях в этой группе имело место стирание рисунка миндалины, полное отсутствие фолликулов, резкое уменьшение общего количества клеток с образованием запустевших участков. В других наблюдениях преобладали склеротические процессы с диффузным разрастанием соединительнотканных волокон, окружавших отдельные островки лимфоидной ткани. Площадь соединительной ткани в 3-й группе увеличивалась до 23,18±0,93%.

Иммуногистохимические окраски, за исключением панцитокератинов и CD31, при этом были слабовыраженными, а МКАТ против CD3 иногда вообще давали отрицательную реакцию.

Определенные различия между исследуемыми группами наблюдались в эпителиальной выстилке миндалины. В 1-й группе эпителиальный покров был в основном представлен многослойным плоским неороговевающим эпителием (4,12±0,23% от общей площади среза) (рис. 3). В углублениях или складках миндалины он часто имел структуру однослойного многорядного (0,89±0,15%).

Рис. 3. Многослойный плоский неороговевающий эпителий. Реакция с МКАТ против панцитокератинов. LSAB-метод с докраской гематоксилином. Ув. 400.

Иммуногистохимически во всем эпителиальном пласте экспрессировались панцитокератины, а в его базальной мембране — коллаген IV. Как уже указывалось, эпителий часто был инфильтрирован клеточными элементами с фенотипом Т- и В-клеток, а также макрофагов.

Во 2-й группе несколько увеличивалась площадь многорядного эпителия (до 1,93±0,20%), который иногда обнаруживался и на гребнях складок миндалины. Иммуногистохимический анализ выявил сохранение экспрессии панцитокератинов и коллагена IV. Однако в ряде наблюдений МКАТ против последнего выявляли неравномерное окрашивание и утолщение базальной мембраны.

В 3-й группе, кроме многослойного плоского неороговевающего и однорядного эпителия, иногда встречались гиперплазированные участки слизистой оболочки с неопределенной гистологической структурой, занимающие до 1,94±0,21% площади среза миндалины. Иногда, напротив, имела место десквамация эпителия с оголением гребней складок. Экспрессия панцитокератинов в этой группе в целом сохранялась, но МКАТ против коллагена IV часто выявляли деструкцию базальной мембраны эпителия на многих участках.

Заключение

Морфологические изменения глоточной миндалины у детей при ее клинической гиперплазии зависят от степени экологической нагрузки. Лимфоидная ткань отвечает на воздействие экопатологических факторов как неспецифическими стромально-сосудистыми, так и специфическими иммуноморфологическими реакциями. Первые реализуются в виде микроциркуляторных расстройств с последующим склерозом, вторые — в снижении интенсивности местного иммунного ответа за счет инактивации Т- и В-клеточного его звеньев, а также моноцитарно-макрофагальной системы.

Подобные процессы, во многом аналогичные инволютивным, способствуют переходу пролиферативно-гиперпластической стадии процесса в фиброзно-склеротическую.

Подтверждение e-mail

На test@yandex.ru отправлено письмо с ссылкой для подтверждения e-mail. Перейдите по ссылке из письма, чтобы завершить регистрацию на сайте.

Подтверждение e-mail