Рехтина И.Г.

Гематологический научный центр Министерства здравоохранения России

Менделеева Л.П.

ГНЦ Минздрава России, Москва

Бидерман Б.В.

ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава России, Москва, Россия

Соловьев М.В.

ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава России, Москва, Россия

Судариков А.Б.

Гематологический научный центр Минздрава России, Москва

Полиморфизмы гена уромодулина у больных каст-нефропатией при множественной миеломе

Авторы:

Рехтина И.Г., Менделеева Л.П., Бидерман Б.В., Соловьев М.В., Судариков А.Б.

Подробнее об авторах

Журнал: Терапевтический архив. 2017;89(8): 68‑71

Просмотров: 2053

Загрузок: 593


Как цитировать:

Рехтина И.Г., Менделеева Л.П., Бидерман Б.В., Соловьев М.В., Судариков А.Б. Полиморфизмы гена уромодулина у больных каст-нефропатией при множественной миеломе. Терапевтический архив. 2017;89(8):68‑71.
Rekhtina IG, Mendeleeva LP, Biderman BV, Solovyev MV, Sudarikov AB. Uromodulin gene polymorphisms in patients with cast nephropathy in multiple myeloma. Therapeutic Archive. 2017;89(8):68‑71. (In Russ.)
https://doi.org/10.17116/terarkh201789868-71

Рекомендуем статьи по данной теме:
Двус­то­рон­няя вес­ти­бу­ло­па­тия и сен­со­нев­раль­ная ту­го­ухость у па­ци­ен­та с нек­ро­ти­чес­кой ксан­тог­ра­ну­ле­мой, мно­жес­твен­ной ми­ело­мой и ами­ло­идо­зом. Вес­тник ото­ри­но­ла­рин­го­ло­гии. 2024;(2):82-87

КН — каст-нефропатия

ЛЦ — легкие цепи

ММ — множественная миелома

ПН — почечная недостаточность

УМ — уромодулин

ХПН — хроническая почечная недостаточность

D8C — домен 8 цистеинов

Каст-нефропатия (КН) — наиболее частая причина почечной недостаточности (ПН) при множественной миеломе (ММ). В структуре поражений почек, обусловленных парапротеином, КН составляет 41— 65% [1—3].

Основным звеном патогенеза КН является образование белковых цилиндров в дистальном отделе почечных канальцев вследствие взаимодействия моноклональных легких цепей (ЛЦ) с уромодулином — УМ (белком Тамма—Хорсфалла). Установлено, что ЛЦ связываются с УМ посредством фрагмента СDR3 [4—6]. Обструкция просвета почечных канальцев белковыми цилиндрами приводит в последующем к тубулоинтерстициальному воспалению и острому повреждению почек.

Развитие КН сопряжено с высокой секрецией белка Бенс-Джонса, поэтому содержание моноклональных свободных ЛЦ в сыворотке более 1500 мг/л служит одним из диагностических критериев этого варианта поражения почек [7]. Вместе с тем хорошо известно, что не у всех больных ММ с секрецией ЛЦ развивается КН. В частности, в исследовании M. Drayson и соавт. [8] из 310 больных миеломой Бенс-Джонса только у 42% больных выявлена ПН. В настоящее время нет однозначного ответа на вопрос, почему не у всех больных ММ с секрецией моноклональных ЛЦ развивается КН.

Наибольшее распространение получила концепция о нефротоксичных свойствах ЛЦ у больных КН. В 1991 г. опубликована работа, в которой доказывалась возможность развития КН у подопытных животных при введении им ЛЦ, полученных от больных ММ с П.Н. При этом КН не формировалась, если белок Бенс-Джонса выделен от пациентов ММ без поражения почек [9]. Это исследование послужило толчком к изучению различий физико-химических свойств ЛЦ, которые могли бы объяснить их нефротоксичность [10—13]. Обнаружено множество структурных аномалий ЛЦ в виде изменения аминокислотной последовательности вариабельного региона, длины молекул, нарушения гликозилирования, повышения полимеризации и гидрофобности, что способствует их агрегации в тканях [12, 14—20]. Эти данные получили признание в качестве рабочей теории органных повреждений при AL-амилоидозе и болезни депозитов Л.Ц. Однако попытка выявить различия в строении вариабельного региона ЛЦ и отдельно фрагмента CDR3 у больных ММ с КН и без поражения почек оказалась неудачной. На основании полученных данных сделан вывод, что вероятность развития КН и тяжесть поражения почек невозможно прогнозировать на основании анализа нуклеотидной последовательности вариабельного региона ЛЦ иммуноглобулинов [21].

В то же время показано, что ЛЦ обладают различной способностью связываться с У.М. Аминокислотная последовательность фрагмента CDR3 и вторичная структура ЛЦ являются определяющими в силе этого взаимодействия. Удалось даже синтезировать циклический пептид, который, связываясь с УМ, предотвращал развитие КН у экспериментальных животных [6]. В настоящее время концепция о различной способности ЛЦ связываться с УМ является ведущей в понимании патогенеза К.Н. Вместе с тем это единственное исследование, которое пока не подтверждено в клинических работах.

УМ (белок Тамма—Хорсфалла) секретируется эпителиальными клетками восходящего отдела петли Генле в количестве 20—100 мг/сут [22]. Синтез У.М. кодируется геном, располагающимся на хромосоме 16p12.3. Ген У.М. состоит из 11 экзонов. В 4-м экзоне находится домен 8 цистеинов (D8C), биологическая функция которого неясна. Однако посредством именно этого участка УМ взаимодействует с фрагментом CDR3 ЛЦ при КН. В настоящее время выявлено 113 мутаций в гене У.М. Большинство мутаций обнаружено в 4-м (более 80%) и 5-м (более 11%) экзонах. В D8C известно 35 мутаций [23—28].

Благодаря расшифровке генома человека в последние годы появились данные об ассоциированных с УМ болезнях почек и участии УМ в развитии хронической почечной недостаточности (ХПН). Предполагают, что мутантный УМ задерживается в эндоплазматической сети клеток, что приводит к их повреждению. С внутриклеточной аккумуляцией УМ связывают нарушение концентрационной способности почек, повышение реабсорбции натрия и мочевой кислоты в проксимальном отделе канальцев, а также развитие интерстициального воспаления и фиброза [29]. Фенотипически мутации гена УМ проявляются гиперурикемией, подагрой, образованием кист в почках, хроническим тубулоинтерстициальным нефритом с ранним развитием терминальной стадии ХПН [30].

Несмотря на непосредственное участие УМ в формировании КН, отсутствуют данные о возможных изменениях его структуры, особенно в D8C, при М.М. Нуждается в изучении вопрос о наличии мутаций гена УМ и их значении в развитии КН.

Цель исследования: изучить характер мутаций в 4-м и 5-м экзонах гена УМ у больных ММ с секреций моноклональных ЛЦ и сравнить их частоту при КН и без поражения почек.

Материалы и методы

В исследование включили 24 больных ММ, находящихся в ремиссии. В дебюте заболевания у 5 (21%) больных выявлена секреция PIgG, у 2 (8%) — PIgА, у 1 (4%) — PIgD, у 1 (4%) — PIgM, у 15 (63%) пациентов диагностирована миелома Бенс-Джонса. У всех больных в моче определялся белок Бенс-Джонса. У 17 (71%) пациентов отмечалась секреция ЛЦ κ-типа, у 7 (29%) — λ-типа. Пациентов разделили на 2 группы. В 1-ю группу вошли 14 больных ММ с диализозависимой ПН, обусловленной К.Н. Диагноз К.Н. устанавливали на основании критериев IMWG [4], у 7 пациентов характер нефропатии подтвержден гистологически. Во 2-ю группу (группу сравнения) включили 10 больных ММ, у которых в дебюте заболевания при наличии моноклональной секреции ЛЦ ПН отсутствовала. Критерием включения пациентов в группу сравнения служило наличие одного из следующих критериев: 1) наличие белка Бенс-Джонса в сыворотке по результатам иммуноэлектрофореза и денситометрии или содержание моноклональных свободных ЛЦ в сыворотке более 1500 мг/л; 2) наличие белка Бенс-Джонса в моче более 1 г/сут.

Для исследования мутаций в гене УМ использована геномная ДНК, выделенная из образцов периферической крови пациентов. Амплификацию 4-го и 5-го экзонов гена УМ проводили с помощью праймеров Umod45_for 5’-CTGAAGCTGGGCTTTTCTGT-3’ и Umod45_rev 5’-CTCACAGGGGAGGAATGTGT-3’ с использованием реакционной смеси PCR MasterMix 2X («Promega», США) при следующих условиях: первоначальная денатурация 5 мин; 35 циклов 94 °C — 30 с, 60 °C — 30 с, 72 °C — 90 с; итоговая элонгация 72 °C — 10 мин. Определение нуклеотидной последовательности проводили методом Сэнгера на автоматическом секвенаторе ABI3130 («Termofisher Scientific», Foster City, США) с использованием набора Big Dye Terminator V3.1 Cycle Sequencing Kit («Termofisher Scientific», Foster City, США) и указанных праймеров и двух дополнительных: Umod45_seq1 5’GCCCTGGCCACATGTGTCAATGTGG 3’ и Umod45_seq4 5’GGGTCACAGGGACAGACAGACAAT 3’.

Результаты

Статистически значимых различий по количеству секретируемых моноклональных ЛЦ в сыворотке и моче не получено, что позволило считать сравниваемые группы сопоставимыми (табл. 1). Результаты исследования мутаций 4-го и 5-го экзонов гена УМ представлены в табл. 2. В результате изучения 4-го и 5-го экзонов гена УМ у больных ММ выявлено пять мутаций: 4 распространенных полиморфизма гетерозиготного характера (rs7193058, rs13335818, rs28544423, rs78691203), не приводящие к замене кодируемой аминокислоты, и одна миссенс-мутация p.142R>R/Q. Частота полиморфизмов гена УМ статистически значимо не различалась в обеих группах и составила 36% у пациентов с КН и 30% без КН (p>0,05). Две мутации (p.142R>R/Q и rs78691203) встречались только у больных с П.Н. Сочетание 2 или 3 полиморфизмов наблюдалось у 4 (29%) больных с КН и у 1 (10%) пациента в группе сравнения. В участке гена, кодирующем связующий с ЛЦ участок УМ — (D8C), выявлены 2 мутации rs13335818 и rs78691203, которые встречались как у больных КН (у 4), так и в группе сравнения (в 1 случае).

Таблица 1. Количество моноклональных ЛЦ в сыворотке и в моче у больных ММ с КН и без поражения почек

Таблица 2. Мутации 4-го и 5-го экзонов гена УМ у больных ММ с КН и без поражения почек

Обсуждение

Полиморфизмы гена УМ выявлены у 30% больных М.М. Частота минорного аллеля (MAF — minor allel frequency) полиморфизма rs7193058 в общей популяции составляет 0,419 (т.е. 419 раз на 1000 геномов), у больных ММ — 0,125. MAF rs13335818 составил 0,085 у больных ММ, в общей популяции MAF — 0,326. MAF rs28544423 — 0,105 у пациентов с ММ, в общей популяции MAF rs28544423 — 0,329. Обнаружен лишь один редкий полиморфизм rs78691203, который в общей популяции встречается с частотой 0,0198. Данных о частоте миссенс-мутации p.142R>R/Q в литературе нет [31]. Таким образом, частота выявленных полиморфизмов гена УМ у больных ММ оказалась существенно ниже, чем в общей популяции. Не исключено, что подобное несоответствие обусловлено малой выборкой пациентов.

Различий по частоте мутаций в зависимости от поражения почек не обнаружено. Отсутствие существенных различий в структуре 4-го и 5-го экзонов гена УМ, в том числе в участке, кодирующем D8C, позволяет сделать вывод, что первичная структура УМ у больных КН не имеет характерных особенностей. Соответственно процесс взаимодействия моноклональных ЛЦ с УМ определяется другими факторами, например свойствами самих ЛЦ или количеством секретируемого УМ.

В крупном исследовании, выполненном на выборке из 10 884 человек, выявлены полиморфизмы, влияющие на количество секретируемого УМ: rs12917707 (ген UMOD), rs12446492 (соседний ген PDILT), rs4533720 (соседний ген MARCH), rs6988636 (соседний ген FAM83). Обращает внимание, что 3 из 4 полиморфизмов локализованы вне гена У.М. Обнаружена сильная прямая корреляция между наличием этих полиморфизмов и повышением содержания УМ в моче, а при rs12917707 — с ПН [26].

Не исключено, что дальнейший анализ генома человека и изучение биологии УМ позволит выявить новые звенья в патогенезе поражения почек, в том числе при КН.

Заключение

У больных ММ не найдено статистически значимых различий по частоте и характеру полиморфизмов 4-го и 5-го экзонов гена УМ, в том числе в участке, кодирующем D8C, при КН и без поражения почек. Обнаружена миссенс-мутация p.142R>R/Q в гене УМ, которая ранее не была описана.

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Подтверждение e-mail

На test@yandex.ru отправлено письмо со ссылкой для подтверждения e-mail. Перейдите по ссылке из письма, чтобы завершить регистрацию на сайте.

Подтверждение e-mail

Мы используем файлы cооkies для улучшения работы сайта. Оставаясь на нашем сайте, вы соглашаетесь с условиями использования файлов cооkies. Чтобы ознакомиться с нашими Положениями о конфиденциальности и об использовании файлов cookie, нажмите здесь.