В клинике при диагностике инфаркта миокарда определяют активность креатинкиназы (МВ-изоформа), лактатдегидрогеназы (изоферменты ЛДГ1,2), соотношение активности аспартат- и аланинаминотрансфераз, тропонинов T и I и содержание миоглобина (чувствительность 98%) [1]. Миоглобин выявляется в крови уже через 2—3 ч после появления боли в грудной клетке, достигает пиковых значений через 7—10 ч и его содержание снижается до нормы в период через 24 ч до 2 сут [2]. Количество его в крови может повышаться в 4—10 раз и более, зависит от площади поражения миокарда.

Изменения на молекулярном уровне предшествуют функциональным и морфологическим нарушениям в тканях и органах, поэтому методы лабораторной диагностики существенно расширяют возможности судебной экспертизы. Для оптимизации танатологической экспертизы инфаркта миокарда, особенно его мелкоочаговых форм, перспективно использовать биохимические методы диагностики, в частности, определение содержания миоглобина в крови. Необходимо учитывать, что увеличение количества миоглобина при инфаркте миокарда обусловлено процессами тканевого некроза и неспецифической воспалительной реакцией ткани сердечной мышцы [3]. Явления посмертного аутолиза также сопровождаются распадом биологических структур организма, дезорганизацией ферментных систем, сдвигом рН в кислую сторону и активацией гидролитических ферментов. Аутолитические изменения зависят от условий окружающей среды, свойств организма, особенностей танатогенеза.

Цель исследования — изучение зависимости содержания миоглобина в крови от времени смерти, пола, возраста, а также метода анализа данного белка и времени хранения биологических объектов после вскрытия.

Определяли содержание миоглобина в крови 30 (19 мужчин и 11 женщин в возрасте 41—94 лет) трупов, умерших в результате острой сердечно-сосудистой недостаточности и хронической ишемической болезни сердца. Забор крови_осуществляли на вскрытии не позже 35 ч после наступления смерти. Кровь забирали в количестве 10 мл сухим шприцем из бедренной вены трупа в стерильную склянку, согласно параграфу VII, главы 88 приказа № 346н Минздравсоцразвития Р.Ф. от 12.05.10 «Об утверждении порядка организации и производства судебно-медицинских экспертиз в государственных судебно-экспертных учреждениях Российской Федерации». Использовали 2 метода: реакцию пассивной гемагглютинации с эритроцитарным диагностикумом ДС-ЭРИТРО-МИОГЛОБИН НПО «Диагностические системы» и иммунотурбидиметрический тест с набором DiaSys Diagnostic Systems GmbH. Методика с использованием эритроцитарного диагностикума является полуколичественной: производят визуальную оценку наличия гемагглютинации в зависимости от степени разведения исследуемого образца. Иммунотурбидиметрический тест — количественный: используется метод фиксированного времени. Он основан на фотометрическом измерении реакции антиген—антитело между антителами против человеческого миоглобина, иммобилизованными на латексных частицах, и присутствующим в образце миоглобином. Статистическую обработку полученных результатов проводили с помощью пакета программ BIOSTAT. Для анализа корреляционной связи данных двух выборок применяли корреляцию по Спирмену.

В ходе предварительных исследований установили, что количество миоглобина в сыворотке крови резко снижается уже через несколько часов после наступления смерти, поскольку этот гемопротеин, содержащий 153 аминокислотных остатка, оседает на поверхности эритроцитов. Провели параллельное исследование содержания миоглобина в сыворотке и гемолизате крови, полученном при разведении дистиллированной водой в 10 раз, иммунотурбидиметрическим методом. В негемолизированой сыворотке обнаружили 440±10 мкг/л миоглобина, а в гемолизате крови от того же трупа, полученном при разведении дистиллированной водой в 10 раз, 8000±250 мкг/л; в гемолизированной сыворотке и гемолизате крови от того же трупа, полученном при разведении дистиллированной водой в 10 раз — 6650±150 и 600±50 мкг/л соответственно. В связи с этим при экспертизе трупного материала оптимально определять содержание миоглобина не в сыворотке/плазме крови, как рекомендовано для диагностики инфаркта миокарда у живых пациентов, а в гемолизате цельной крови. Выбор кратности разведения (10, 20 или 40) подбирали таким образом, чтобы полученные значения оптической плотности попадали в среднюю часть калибровочного графика, построенного с использованием набора калибраторов TruCal Myoglobin, поскольку прямо пропорциональная зависимость между экстинкцией пробы и содержанием миоглобина наблюдается в диапазоне от 5 до 600 мкг/л. При определении количества миоглобина в гемолизате цельной крови разведение дистиллированной водой тем более необходимо для снижения оптической плотности образца, так как производителем данная методика рекомендована для сыворотки крови и/или гепаринизированной либо ЭДТА плазмы.

Установили зависимость содержания миоглобина от срока давности наступления смерти: по прошествии 18—21 ч оно резко возрастает (рис. 1).

Зависимость содержания миоглобина в крови от времени наступления смерти подтверждена корреляционным анализом с использованием коэффициента ранговой корреляции Спирмена: выявили статистически значимую взаимосвязь между этими параметрами (r=0,792). В результате постмортального аутолиза в клетках происходит повреждение мембран, увеличивается их проницаемость, при этом лизосомальные и митохондриальные ферменты гидролизуют компоненты клетки. Мембрана лизосом может повреждаться очень быстро после прекращения доступа кислорода. Имеются сведения, что в миокарде, почках и печени лизосомы могут сохраняться неповрежденными до 10 ч после смерти. Трансформация гистоархитектоники миокарда начинается уже к началу первых суток после смерти при температуре 37 °C [4]. Можно утверждать, что резкое увеличение количества миоглобина в крови через 18—20 ч после наступления смерти вызвано аутолизом ткани сердца. Известно [5], что аутолиз наступает раньше в миокарде, чем в скелетных мышцах, следовательно, выявленный пик содержания миоглобина обусловлен именно постмортальными процессами в кардиомиоцитах.

При исследовании зависимости количества миоглобина от времени хранения биологических объектов при температуре от +2 до +5 °С выявили его снижение начиная с 9—10 ч после секционного исследования (рис. 2).

Время полураспада миоглобина составляет в среднем около 3—6 ч [6], поэтому уже через 2 сут после секционного исследования его содержание в крови практически не выявляется.

Результаты, полученные при сравнении воспроизводимости и чувствительности двух методов определения содержания миоглобина, представлены в табл. 1.

Как видно из данных табл. 1, среднее количество миоглобина в крови, рассчитанное с помощью метода пассивной гемагглютинации, на 40% больше полученного иммунотурбидиметрическим методом. Стандартное отклонение — степень отклонения (разброс) данных измерений от среднего значения при полуколичественном методе гораздо больше (в 7,4 раза), чем при иммунотурбидиметрическом тесте. Небольшое стандартное отклонение указывает на то, что данные измерений группируются вокруг среднего значения, а значительное свидетельствует о том, что начальные данные располагаются далеко от него [7].

В данном исследовании количество миоглобина в каждом образце измеряли по 3 раза обоими методами. Большее стандартное отклонение при определении содержания миоглобина с помощью эритроцитарного диагностикума свидетельствует о низкой воспроизводимости данных этим методом. Такие результаты могут быть обусловлены методикой теста, основанного на многократных разведениях, поскольку известно [8], что разведение биологических жидкостей при анализе увеличивает ошибку измерения и приводит к искусственному завышению результатов. Целесообразно пользоваться эритроцитарным диагностикумом в реакции пассивной гемагглютинации в качестве предварительного метода: для определения интенсивности разведения при осуществлении более точного количественного иммунотурбидиметрического теста методом фиксированного времени.

Для выявления зависимости содержания миоглобина в крови трупа от возраста, половой принадлежности и давности наступления смерти провели корреляционный анализ с использованием коэффициента ранговой корреляции Спирмена (табл. 2).

Установили зависимость содержания миоглобина в крови от пола умерших, что обусловлено большей мышечной массой у мужчин (см. табл. 2).

1. В ходе судебно-биохимического исследования содержания миоглобина в крови трупов более информативным является его содержание в цельной крови.

2. Следует учитывать, что постмортальные процессы могут вносить различные изменения в концентрацию миоглобина в крови трупа. Оптимально определение количества этого гемопротеина не позднее 10—13 ч после наступления смерти.

3. Лабораторное определение содержания миоглобина не следует проводить позднее 9 ч после вскрытия во избежание снижения его в результате разрушения данного белка.

4. Результаты определения количества миоглобина в крови с помощью иммунотурбидиметрического теста отличаются большей точностью и воспроизводимостью. Применение эритроцитарного диагностикума в реакции пассивной гемагглютинации оптимально в качестве предварительного метода: для определения интенсивности разведения при осуществлении количественного иммунотурбидиметрического теста.

5. Пол и возраст умерших также оказывают влияние на уровень миоглобина в крови.

Конфликт интересов отсутствует.