Изучение распределения арипипразола во внутренних органах и биологических жидкостях лабораторных животных при острых отравлениях

Разработка быстрых и надежных методик изолирования, обнаружения и количественного определения токсичных веществ позволяет диагностировать отравления с высокой точностью. Опубликовано крайне мало результатов исследований по химико-токсикологическому анализу нового поколения «атипичных» нейролептиков.

Арипипразол — препарат нового класса «атипичных» нейролептиков, оказывающих достаточно выраженное общее антипсихотическое действие, у которых отсутствуют дозозависимые экстрапирамидные и нейроэндокринные побочные эффекты. Он является антагонистом серотониновых рецепторов 5-HT2A подтипа и агонистом 5-HT1A— рецепторов. Среди всех «атипичных» нейролептиков препарат имеет наименьшее сродство с адренергическим (α1), гистаминовым (H1) и мускариновым (m1) рецепторами. Такой фармакодинамический спектр объясняет высокую лечебную эффективность арипипразола при шизофрении и биполярных расстройствах и в то же время низкие частоту и тяжесть наблюдаемых побочных эффектов, в том числе роста массы тела и двигательных расстройств. Суточная доза препарата составляет 10—30 мг [1].

В настоящее время арипипразол используется широко, но встречаются случаи его передозировки и отравлений [2]. Клиническими проявлениями являются гиперпирексия, мышечная ригидность, изменение психического статуса и признаков вегетативной нестабильности (нерегулярный пульс или артериальное давление, тахикардия, потливость и нарушение сердечного ритма).

Цель исследования — определение содержания арипипразола во внутренних органах и биологических жидкостях при острых отравлениях лабораторных животных.

По химической структуре арипипразол (7-[4-[4-(2,3-дихлорофенил)пиперазин-1-ил]бутокси]-3,4-дигидро-1Н-хинолин-2-он) представляет собой производное пиперазинилхинолинона:

Номер регистрации CASRN: 129722−12−9.

Экспериментальные исследования проводили на белых мышах обоего пола массой 20,5—25,7 г. Уход за животными и их содержание осуществляли в соответствии с требованиями приказа Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации № 708н от 23.08.10 «Об утверждении Правил лабораторной практики». Арипипразол вводили в виде суспензии в желудок в токсичной концентрации 15 мг/кг [3]. Мочу собирали в течение суток. Признаки острого отравления арипипразолом чаще всего наблюдаются в течение первых суток, поэтому по истечении 24 ч животных вводили в наркоз, декапитировали и отбирали внутренние органы и кровь.

Изолирование арипипразола из печени, почек, головного мозга, сердца проводили по методу Васильевой, основанном на извлечении веществ водой, подкисленной щавелевой кислотой до рН 2,0—2,5. Экстракцию арипипразола осуществляли хлороформом из кислой и щелочной среды.

Предварительно изучали влияние некоторых факторов экстракции (органический растворитель, рН среды, влияние электролита, время и кратность экстракции) [4, 5]. Для изолирования арипипразола из плазмы крови использовали следующую методику: к 0,2 мл центрифугата добавляли 25% раствор аммиака до рН 12,0, 1 мл 20% раствора натрия хлорида и 3 мл хлороформа. Содержимое взбалтывали в течение 5 мин и помещали в делительную воронку. Экстракцию повторяли еще дважды порциями по 3 мл хлороформа. После разделения фаз отделяли слой органического растворителя. Растворители удаляли при комнатной температуре. Сухие остатки, полученные после испарения экстрагента, растворяли в 5 мл 96% этанола.

Для изолирования арипипразола из мочи использовали следующую методику: к 0,5 мл мочи добавляли 0,2 мл кислоты хлористоводородной концентрированной и кипятили 1 ч на водяной бане. После охлаждения добавляли 25% раствор аммиака до рН 12,0, 1 мл 20% раствора натрия хлорида и 3 мл хлороформа. Содержимое взбалтывали в течение 5 мин и помещали в делительную воронку. Экстракцию повторяли 2 раза порциями по 3 мл хлороформа. После разделения фаз отделяли слой органического растворителя. Растворители удаляли при комнатной температуре. Сухие остатки, полученные после испарения экстрагента, растворяли в 5 мл 96% этанола.

Разработанные методики изолирования арипипразола из плазмы и мочи валидированы по показателям: прецезионность, правильность, предел количественного определения и степень извлечения.

Обнаружение и количественное определение арипипразола в извлечениях проводили методом ВЭЖХ на приборе Миллихром А-02. Предварительно валидировали методику анализа по показателям: прецезионность, правильность, линейность и предел количественного определения [6]. Использовали следующие условия хроматографирования: хроматографическая колонка размером 2×75 мм, заполненная обращенно-фазовым сорбентом ProntoSil 120−5-C18 AQ; подвижная фаза: элюент, А — 0,1% раствор трифторуксусной кислоты, элюент Б — ацетонитрил; скорость потока 200 мкл/мин; время измерения 0,18 с; температура термостата колонки комнатная, объем пробы 10 мкл, длина волны 210 нм. Расчет количественного содержания арипипразола в извлечениях проводили по стандартному образцу арипипразола.

Статистическую обработку данных производили с помощью пакета программ EL и Statistica 6.0 с определением t-критерия Стьюдента и Дана.

Через 24 ч после перорального введения арипипразола производили забор внутренних органов лабораторных животных. На хроматограмме арипипразола, выделенного из внутренних органов, при сравнении с хроматограммой стандарта заметного увеличения фонового поглощения не наблюдали. Параметры хроматографирования арипипразола, выделенного из внутренних органов, совпадают с таковыми стандартного образца. Данные и статистическая обработка результатов определения арипипразола в печени, почках, мозге представлены в табл. 1.

Полученные данные свидетельствуют о том, что в течение 24 ч после острого отравления максимальное количество арипипразола накапливается в почках (17,23±0,88%) и мозге (15,38±5,72%, tэмп.=27,5). В пече-ни содержание вещества было значительно меньше (5,15±0,73%, tэмп.=3,9). В извлечениях из сердца арипипразол не обнаружили.

Приказ Минздравсоцразвития России № 346 от 12.05.10 «Об утверждении Порядка организации и производства судебно-медицинских экспертиз в государственных судебно-экспертных учреждениях Российской Федерации» рекомендует при проведении судебно-химических экспертиз использовать различные внутренние органы, учитывая распределение, скорость выведения, фармакокинетику токсичных веществ. На основании полученных результатов мы рекомендуем в качестве оптимального биологического объекта при исследовании внутренних органов на наличие арипипразола использовать почки и мозг. Уступающим по содержанию арипипразола биологическим объектом является печень.

Кровь и моча — предпочтительные биологические жидкости при химико-токсикологических исследованиях у живых лиц. Данные и статистическая обработка результатов определения арипипразола в плазме крови и моче представлены в табл. 2.

Полученные данные свидетельствуют, что максимальная степень экстракции арипипразола по истечении 24 ч наблюдалась из плазмы крови (42,80±1,51%). В моче арипипразол в неизменном виде обнаруживали в концентрации 6,13±0,70% (tэмп.=57,3). Острое отравление лабораторных животных со смертельным исходом происходило в стадию резорбции концентрация арипипразола в плазме крови (42,80%) больше, чем в моче (6,13%).

1. Предложены оптимальные биологические объекты для проведения судебно-химического анализа арипипразола: почки и головной мозг.

2. Разработаны методики изолирования арипипразола из биологических жидкостей (плазма крови, моча), которые могут быть включены в схему химико-токсикологического анализа арипипразола.

Конфликт интересов отсутствует.