В конце 2012 г. в связи с новым всплеском общественного и профессионального внимания к обстоятельствам наступления смерти в 2004 г. бывшего палестинского лидера, первого Президента Палестинской национальной администрации (ПНА) и лауреата Нобелевской премии мира Ясира Арафата (Yasser Arafat; 24.08.1929, Каир — 11.11.2004, Париж), руководство ПНА приняло решение об эксгумации его останков для проведения комплексного (судебно-медицинского, радиотоксикологического и химико-токсикологического) исследования, призванного дать окончательный ответ на вопрос о причине его смерти.
Утром, на рассвете 27 ноября 2012 г., в Мавзолее Ясира Арафата в Рамалле (Ramallah) (ПНА) международная экспертная комиссия в составе российских, французских, швейцарских и палестинских специалистов произвела эксгумацию и исследование останков Ясира Арафата. (От российской стороны в эксгумации и исследовании останков непосредственно в Мавзолее принимали участие д.м.н. А.В. Ковалев, специалисты ФГБУ «Государственный научный центр Российской Федерации — Федеральный медицинский биофизический центр им. А.И. Бурназяна» ФМБА России к.м.н. Ю.Е. Квачева и к.т.н. В.Н. Яценко).
В ходе эксгумации были исследованы само место погребения и останки покойного, а также изъяты биологические и небиологические объекты, предназначенные для проведения судебно-медицинского, радиотоксикологического и судебно-химического (химико-токсикологического) исследований.
Параллельно с лабораторными исследованиями было принято решение назначить еще одно − судебно-генетическое экспертное исследование эксгумированных останков Ясира Арафата.
По просьбе палестинской стороны и по поручению МИД России данное исследование выполнено нами в ФГБУ «Российский центр судебно-медицинской экспертизы» Минздрава России.
Сам факт назначения судебно-генетического исследования в данном случае весьма примечателен и заслуживает отдельного обсуждения. Суть в следующем. По своему предназначению молекулярно-генетическое исследование является идентификационным. Значит ли это, что в данном случае речь идет об идентификации останков Ясира Арафата? Если да, то зачем это было нужно? Разве могут быть у кого-то сомнения по поводу того, кто именно захоронен в охраняемом почетным караулом Мавзолее в административной столице Государства Палестина?
Ответ, разумеется, отрицательный.
В данном случае задача состояла не в том, чтобы установить, чьи останки захоронены в Мавзолее Первого главы ПНА в Рамалле. Смысл заключался в другом.
Данное исследование было назначено для аутентификации, т. е. для подтверждения принадлежности направляемых в радиотоксикологические, химико-токсикологические и иные лаборатории фрагментов останков именно Ясиру Арафату. На юридическом языке это означает, что молекулярно-генетическое исследование назначено с целью гарантировать соблюдение принципа относимости доказательств (в данном случае результатов, которые планировалось получить в ходе указанных лабораторных исследований) безоговорочно к останкам Ясира Арафата.
Таким образом, в данном случае это наглядный пример расширения функционала и по существу «смены парадигмы» молекулярно-генетического исследования.
Статья посвящена этому новому аспекту судебно-генетического экспертного исследования. Это прежде всего тот методический подход, в контексте которого молекулярно-генетический анализ эксгумированных останков Ясира Арафата призван выполнить функцию надзорно-контрольного теста для достижения максимального доказательственного значения результатов всех остальных целевых лабораторных исследований. Этот, на первый взгляд неуместный, тест явился необходимым условием для последующего объективного рассмотрения всех существующих медицинских гипотез и оценки результатов проведенных в настоящий момент исследований представленных медицинских документов и лабораторных экспертиз с целью установления истинной причины смерти Ясира Арафата.
В статье приведены детали погребения, методики исследования места захоронения, костных останков и забора биологических образцов лишь в той части, которая имеет значение для проведения дальнейших судебно-генетических исследований, тем более что такие работы (в том числе и наши) уже публиковались [1—3]. Тем не менее считаем необходимым оптимально подробно осветить предшествующие этапы, поскольку только комплексная оценка всей медицинской ситуации позволит прийти к достоверному окончательному выводу о причине смерти. В статье сделан дополнительный акцент на работе с контактными следами, поскольку по этому вопросу пока накоплен существенно меньший опыт.
Анамнез и клиническая картина заболевания
Из отчета специальной медицинской комиссии, представленного 28 августа 2012 г. ежегодному собранию Организации «Ясир Арафат» в Каире, краткого медицинского заключения сопровождающего (личного) врача Ясира Арафата доктора Омара Дака (Omar Daka) от 29 ноября 2004 г.; истории болезни (отчет палестинских врачей) за период наблюдения и лечения с 12 по 29 октября 2004 г.; историй болезни из военного госпиталя Перси в Кламаре (Percy de Clamart) в пригороде Парижа за период наблюдения и лечения с 29 октября по 3 ноября и с 3 по 11 ноября 2004 г.; отчета отдела токсикологии Института криминалистики Центра технического обеспечения Национальной жандармерии Французской Республики от 5 ноября 2004 г. известно следующее [4].
Ясир Арафат, возраст которого на момент рассматриваемых событий составлял 75 лет, не страдал гипертонической болезнью, сахарным диабетом, болезнями сердца, сосудов, почек, дыхательной системы и пр. Он не курил, не принимал алкоголя, наркотиков и психостимулирующих средств, например кофе и пр. В авиакатастрофе в Ливии 7 апреля 1992 г. он получил закрытую черепно-мозговую травму с последующим развитием хронической субдуральной гематомы, по поводу которой был прооперирован в Иордании. Гематому удалили посредством наложения фрезевых отверстий спустя 6 мес, что подтверждается результатами исследования эксгумированных 27 ноября 2012 г. останков. У пациента наблюдались витилиго, стабилизированный эссенциальный тремор, гастрит (Helicobacter pylori), «щелевая» грыжа с эзофагитом. У брата и сестры покойного был рак ободочной кишки.
11 октября 2004 г., около 11.30 вечера, спустя 2 ч пос-ле приема пищи в собственной резиденции Муката (Al Muqata’ah) в Рамалле, первый Президент Палестины Ясир Арафат пожаловался на тошноту и двукратную рвоту (рвотные массы желтоватого цвета с частицами пищи) без болей в эпигастральной области и грудной клетке, после чего не предъявлял никаких жалоб; осмотрен утром следующего дня. 15 октября (1-й день Рамадана) больной настоял на своем желании поститься несмотря на настойчивые рекомендации палестинских и египетских врачей воздержаться от поста (строгий пост соблюдал на протяжении всего периода болезни: в течение светового дня не принимал никаких жидкостей и пищи).
С 18 октября появились признаки гемоконцентрации (содержание гемоглобина до 18,8 г/л) и тромбоцитопении (тромбоциты 72·109/л), которые сохранялись вплоть до 29 октября (27 октября — гемоглобин 18,8 г/л, 28 октября — тромбоциты 26·109/л).
В целом можно констатировать, что у пациента развились острый гастроинтестинальный синдром, сопровождающийся тошнотой, рвотой, болями в области живота и водянистой диареей; нарушение свертывающей системы крови, гемоконцентрация, тромбоцитопения. Признаков системного воспаления и миелосупрессии не было. К 28 октября состояние здоровья резко ухудшилось. Консилиум в составе палестинских, египетских, иорданских и тунисских врачей принял решение о необходимости перевода пациента в другое медицинское учреждение.
В 07.00 утра 29 oктября Ясир Арафат был доставлен вертолетом из Рамаллы в Амман, а затем самолетом в Париж.
За период наблюдения и лечения в гематологическом отделении и отделении интенсивной терапии госпиталя Перси у больного наблюдалось развитие следующего комплекса симптомов и синдромов: гиперлейкоцитоз (лейкоциты 39·109/л) без выраженного сдвига лейкоцитарной формулы; энтероколит воспалительной природы; ДВС-синдром тяжелой степени; костно-мозговой гемофагоцитоз без признаков истинного синдрома системной макрофагальной активации; прогрессирующее снижение количества гемоглобина без стигматов гемолиза; гипербилирубинемия — от 76 до 218 мкмоль/л (за счет конъюгированного билирубина), умеренное повышение содержания аммиака в крови до 80—200 мкмоль/л (N<50); неврологическая кома. Состояние 75-летнего больного продолжало прогрессивно ухудшаться на фоне развития острой почечной недостаточности, нарастания холестатической желтухи и неврологической комы.
3 ноября Ясир Арафат был переведен в отделение интенсивной терапии, но, несмотря на усилия врачей, 11 ноября 2004 г. в 03.30 утра по центральноевропейскому времени (05.30 MSK), через 30 дней после появления первых симптомов заболевания, скончался от обширного геморрагического инсульта с вклинением стволовых отделов головного мозга в большое (затылочное) отверстие. (Проведенная 9 ноября МРТ головного мозга выявила острые геморрагические интрааксиальные повреждения мозжечка справа, червя мозжечка, ствола мозга и таламуса в сочетании с кровоизлиянием в желудочки мозга, субарахноидальным кровоизлиянием и «исчезновением» цистерн основания головного мозга).
Непосредственно после смерти Ясира Арафата экспертные исследования: судебно-медицинское вскрытие, гистологическое и токсикологическое исследования биологических образцов от трупа не проводили. В связи с тем, что тело не подверглось вскрытию, окончательный медицинский диагноз заболевания не был установлен. Каких-либо явных симптомов инфекции, сердечно-сосудистого, аутоиммунного или онкологического заболевания не отмечено. Лечение пациента имело исключительно симптоматический характер. В результате заболевание Ясира Арафата было охарактеризовано как патология неясной этиологии. В окончательном заключении медицинского отчета госпиталя Перси отмечено, что по итогам консультации с широким кругом экспертов различных специальностей и результатам проведенных исследований не представилось возможным указать конкретную нозологическую единицу, объясняющую перечисленные синдромы [4].
Все это породило множество версий.
Специальная медицинская комиссия в своем отчете, представленном ежегодному собранию Организации «Ясир Арафат» в Каире, пришла к выводу, что болезненное состояние Ясира Арафата, приведшее к его скорой смерти, не было вызвано какой-либо известной медицине болезнью, а явилось следствием того, что он подвергался воздействию отравляющего вещества, не изученного или не выявленного в ходе обследований [4]. При жизни Ясира Арафата версия отравления не была независимо подтверждена какими-либо химико-токсикологическими исследованиями.
Эта версия вновь стала актуальной в начале 2012 г. после того, как специалисты Института радиофизики в Лозанне по просьбе журналистов телеканала Аль-Джазира (Al Jazeera) и членов семьи экс-президента исследовали предоставленный в их распоряжение несессер с находившимися в нем объектами (предметы спортивной одежды и нижнего белья с пятнами пота, крови и мочи; шапка с обнаруженными на ней волосами; зубная щетка; таблетки, капсулы, различные бутыли и фляги). В следах биологических выделений на личных вещах, которыми, со слов вдовы Сухи Арафат (Suha Arafat), покойный политик пользовался непосредственно перед смертью, швейцарские эксперты установили повышенный по сравнению с нормой уровень радиоактивного изотопа полония-210 (210Po). На этом основании наблюдавшаяся у Ясира Арафата клиническая симптоматика, в частности тошнота, рвота, упадок сил, диарея, анорексия, недостаточность функции печени и почек, была расценена как вероятная симптоматика радиоактивного отравления 210Po [5—10].
В связи с озвученной швейцарскими радиофизиками «полониевой» версией причины смерти бывшего палестинского лидера по иску вдовы, обвинившей неизвестных лиц в убийстве своего супруга, 13 ноября 2012 г. прокуратура Французской Республики объявила о начале официального расследования. Это явилось поводом к проведению эксгумации его останков 27 ноября 2012 г. и последующему назначению судебно-медицинского, радиотоксикологического и судебно-химического (химико-токсикологического) исследований, которые были независимо друг от друга выполнены в судебно-экспертных учреждениях Швейцарии, Франции и России [7, 10—12].
Согласно опубликованным в открытом доступе результатам швейцарских специалистов, проведенный ими генетический анализ подтвердил, что представленные им личные вещи (из несессера) и человеческие останки, извлеченные из места погребения в Рамалле, принадлежали Ясиру Арафату [7, 10]. Результаты химико-токсикологического исследования показали наличие только лекарственных препаратов, назначавшихся Ясиру Арафату по медицинским показаниям, и их метаболитов. По итогам радиотоксикологических исследований в изъятых при эксгумации образцах ребер, гребня подвздошной кости и грудины выявили существенно повышенную (до 18—36 раз по сравнению с описанными в литературе референтными значениями) активность изотопа 210Po. Одновременно была установлена повышенная (в пределах тех же значений) активность другого радионуклида — свинца-210 (210Pb) при нормальном содержании стабильных (нерадиоактивных) изотопов свинца [7, 10].
Эти результаты совпадают с данными российских специалистов, также обнаруживших в исследованных биологических образцах повышенные от 10 до 100 раз активности радионуклидов 210Po и 210Pb [11], однако их интерпретация и трактовка клинико-лабораторных данных истории болезни Ясира Арафата оказались принципиально различными.
По мнению швейцарских специалистов, применивших подход Байеса для расчета вероятности события отравления 210Po, эти находки в совокупности с перечисленными ранее клиническими симптомами, гипотетически расцененными в качестве патогномоничных для полониевой интоксикации, умеренно (в пределах разумного) поддерживают гипотезу смерти Ясира Арафата от отравления полонием-210 (les résultats soutiennent raisonnablement la proposition selon laquelle la mort est la conséquence d’un empoisonnement au polonium-210 — так в оригинале доклада. Прим. авторов данной статьи) [10]. Швейцарские специалисты придерживаются точки зрения, что наличие в останках покойного радиоактивного изотопа 210Pb обусловлено технологической примесью 210Pb, присутствовавшей изначально в полониевом «токсиканте» (уточняющее примечание авторов данной статьи). Подобная примесь в соответствии с итоговым отчетом была идентифицирована ими в приобретенном специально для «проверочных» целей коммерческом источнике 210Po активностью 3 МБк [7].
В этой связи авторы настоящей статьи хотели бы внести следующую ремарку.
Находящийся в естественных природных условиях радиоактивный изотоп 210Pb (период полураспада 22,3 года) является дочерним продуктом распада природного урана-238 (238U, период полураспада 4,5·109 лет). Попадая в организм человека, данный радионуклид (210Pb) вследствие своей остеотропности накапливается преимущественно в компактном веществе костей скелета и становится одним из источников появления в организме радиоактивного изотопа 210Po (период полураспада 138,3 сут). Последний в свою очередь превращается в стабильный (нерадиоактивный) изотоп 206Pb, представляющий собой финальную «точку» указанной цепочки естественного распада природного урана (рис. 1). Наличие зарегистрированного состояния радиоактивного равновесия между 210Pb и 210Po (состояние, при котором за единицу времени происходит распад одинакового числа атомов двух перечисленных радионуклидов) указывает, таким образом, на ситуацию, при которой конечный этап цепочки распада урана-238 — превращение радионуклида 210Pb (долгоживущего) в радионуклид 210Po (короткоживущий) — проходит в организме (прижизненно) или останках (посмертно).
В этой связи российские специалисты из ФГБУ «Государственный научный центр Российской Федерации — Федеральный медицинский биофизический центр им. А.И. Бурназяна» ФМБА России на основе обобщения результатов комплексных физических и медицинских исследований, принимая во внимание отсутствие в представленных медицинских документах объективных данных, свидетельствующих о наличии симптомов острой лучевой болезни, а также учитывая результаты проведенных измерений содержания 210Pb и 210Po в пробах биологических объектов и оценки дозовых нагрузок, исключили прямую причинную связь наличия повышенного содержания указанных радионуклидов в останках покойного с наступлением его смерти [11].
Французские специалисты наравне с российскими экспертами отвергли версию о том, что Арафат был отравлен 210Po, на основании чего 21 июля 2015 г. прокуратура парижского пригорода Нантер (Nanterre) потребовала закрыть дело о предполагаемом убийстве бывшего палестинского лидера «из-за отсутствия состава преступления».
Обсуждение других медицинских гипотез причины смерти Ясира Арафата выходит за рамки настоящего сообщения, однако необходимо отметить следующее.
Специалистами ФГБУ «Российский центр судебно-медицинской экспертизы» Минздрава России д.фарм.н., проф. Е.М. Саломатиным, д.х.н. С.А. Савчуком, д.м.н. А.В. Ковалевым и В.Е. Саломатиным было выполнено судебно-химическое и химико-токсикологическое исследование биологических и небиологических объектов из места захоронения, а также предметов личного обихода Ясира Арафата и медицинских документов. Заключение передано 3 ноября 2013 г. в Рамалле палестинской стороне. Результаты исследования будут опубликованы в дальнейшем [12].
Морфология захоронения, исследование останков в саркофаге, забор образцов для лабораторных исследований
Самолет с телом Ясира Арафата приземлился в ночь с 11 на 12 ноября (пятница) 2004 г. в аэропорту Каира. Этому предшествовала торжественная траурная церемония с участием французских и палестинских руководителей, в ходе которой Ясиру Арафату были отданы последние воинские почести.
Гроб с телом Ясира Арафата сопровождали в Каир его вдова Суха Арафат, министр иностранных дел ПНА Набиль Шаат (Nabil Shaath) и другие представители ближайшего окружения палестинского лидера.
В пятницу 12 ноября после торжественной траурной церемонии в Каире, где с покойным смогли проститься приглашенные представители иностранных государств, египетский военный вертолет доставил тело Ясира Арафата из Египта в Рамаллу. Его тело было временно захоронено в специальном мавзолее в резиденции Муката [13]. В своем завещании он написал, что хотел бы быть похороненным у мечети Аль-Акса (Al Aqsa Mosque) в Иерусалиме, но власти Израиля не дали на это разрешения. По этой причине в резиденцию Муката были привезены с территории у мечети Аль-Акса 10 мешков с землей, которая и была в дальнейшем помещена в могилу. Существующий в нынешнем виде мавзолей сооружен в 2007 г. Информация о каких-либо проведенных процедурах бальзамирования тела Ясира Арафата в представленных экспертам документах и открытых литературных источниках отсутствует, равно как и информация об особенностях омовения тела перед погребением.
27 ноября 2012 г. около 05.00 утра по местному времени началась официальная процедура эксгумации тела Ясира Арафата. В процедуре приняли участие духовенство, представители ПНА, приглашенные российские, швейцарские и французские специалисты, а также палестинские специалисты. Перед началом процедуры эксгумации российские, швейцарские и французские специалисты дали клятву на Библии в том, что они будут объективны и беспристрастны при проведении экспертных исследований.
После снятия надгробной плиты и каменных напольных плит был извлечен находящийся под ними насыпной гравий. Цементный саркофаг с телом покойного находился на глубине 240—405 см и представлял собой построенную по традициям мусульманского погребения могилу (погребальная камера) в естественном грунте (рис. 2) [14].
Для понимания морфологии захоронения, представляющей интерес с судебно-медицинской точки зрения, следует остановиться на географических и климатических характеристиках местности, где был погребен в 2004 г. Ясир Арафат и где спустя 8 лет осуществлена эксгумация его тела.
Рамалла — административная столица Государства Палестина, располагается в гористой местности (старые горы) в центральной части западного берега реки Иордан, в 13 км к северу от Иерусалима, на высоте 872 м над уровнем моря, приблизительно в 70 км от побережья Средиземного моря. Климат средиземноморский. Среднемесячная температура колеблется от +8,3 °C (январь) до +22,9 °C (август). Среднемесячная сумма осадков составляет от 0 (июнь—август) до 70 мм (февраль). Наиболее сухие и жаркие месяцы — с мая по октябрь (табл. 1) [15].
Состояние могилы и самого тела было обусловлено рядом факторов: временем года, когда было осуществлено погребение (ноябрь); коротким сроком от момента наступления смерти до погребения (чуть более суток); глубиной нахождения саркофага в земле, его конструктивными особенностями, в частности герметичностью, типом и дренажными свойствами почвы; климатогеографической характеристикой местности, давностью захоронения и др.
Саркофаг — полый цементный склеп, имеющий форму правильного параллелепипеда; высота внутреннего пространства 70 см, на дне которого насыпан грунт из 10 мешков, доставленных в 2004 г. от мечети Аль-Акса. Максимальная высота засыпного грунта в месте расположения тела, насыпь покато спускается к боковым граням погребальной камеры. Сверху склеп герметично закрыт плотно прилегающими друг к другу относительно узкими цементными блоками высотой 10 см, скрепленными между собой строительным раствором, располагаются поперек длинника захоронения. Над блоками — утрамбованный слой насыпного грунта высотой 50 см (из тех же 10 мешков, доставленных в 2004 г. от мечети Аль-Акса). Слои насыпного грунта и насыпного щебня разделяются герметичной цементной стяжкой толщиной 10 см. Само захоронение, как и почва внутри склепа, влажное. Грунт глинистой консистенции.
Исследование тела и места захоронения проводили при хорошем искусственном освещении. При вскрытии погребальной камеры каких-либо посторонних запахов, в том числе гнилостного, и запаха от образования жировоска (сапонификация) не ощущалось. Тело полностью лишено мягких тканей, на костях скелета отсутствовали надкостница, хрящи и связки. По традициям мусульманского погребения тело положено на правый бок, головой к Мекке. На черепе и в области шейных позвонков фрагменты савана отсутствуют. Единичные, небольших размеров, истлевшие темно-серые фрагменты савана располагаются в проекции костей посткраниального скелета. Лицо повернуто к правому плечу. В проекции затылочной области сохранились мягкие ткани в виде бесструктурной кашицеобразной массы, а также небольшая прядь волос средней длины. Правая верхняя конечность выпрямлена, левая согнута в локтевом суставе почти под прямым углом, при этом кости предплечья располагаются на грудных позвонках, а кости кисти — по правому краю туловища. Левая нижняя конечность выпрямлена и располагается поверх берцовых костей, согнута в коленном суставе под углом около 145° к правой конечности. Каких-либо сопутствующих аксессуаров в саркофаге не было. За счет силы тяжести скелет как бы погрузился в поверхностные слои насыпанного на дно влажного, глинистой консистенции грунта. По этой причине после проведенного совместного совещания международной экспертной комиссией и представителями палестинской стороны принято решение исследовать останки и осуществлять забор биологических образцов непосредственно в месте захоронения. Предварительно провели необходимые радиометрические исследования воздуха, грунта, стен склепа и останков.
Поверхность костей скелета буровато-сероватого цвета, во многих местах покрыта черным пастообразным налетом разрушенных бесструктурных мягких тканей. По периметру скелета и непосредственно под ним насыпной грунт пропитан веществом черного цвета (разрушенные мягкие ткани), четко выражена граница с более светлым коричневато-сероватым насыпным грунтом (см. рис. 2). Все кости скелета относительно тяжелые, прочные, массивные, без макроскопических признаков диффузного остеопороза и посмертного «выветривания» наружной компактной пластинки. С торцов инструментального отделения визуализируется отсутствие в губчатом веществе плоских костей и костно-мозговом канале диафиза левой бедренной кости желтого костного мозга и признаков омыления. Компактное вещество диафиза левой бедренной кости с торца ее инструментального отделения влажное, имеет слегка (на небольших участках) блестящий вид и сероватый цвет, что свидетельствует о сохранении в нем органического компонента. На своде черепа — сквозные фрезевые отверстия с признаками формирования костной мозоли по краям (следы проведенной в 1992 г. трепанации черепа).
Расоводиагностические признаки строения черепа указывают на принадлежность тела представителю большой европеоидной расы. Полодиагностические признаки строения черепа и костей посткраниального скелета указывают на принадлежность тела мужчине. Возрастные дегенеративно-дистрофические изменения костей черепа, зубочелюстной системы и посткраниального скелета соответствуют таковым мужчине биологического возраста в интервале 70—80 лет. Каких-либо иных изменений, в том числе посттравматических, врожденных аномалий развития, нет. Посмертное состояние остатков мягких тканей, костей скелета, эмали и дентина зубов, степень тления савана соответствуют условиям и давности захоронения.
Изъятые биологические и небиологические образцы (21) имели однотипную локализацию для всех трех экспертных групп, упакованы в стерильные, герметично закрывающиеся лабораторные полиэтиленовые пакеты и пластиковые емкости, должным образом маркированы, на них проставлены подписи экспертов. Подписаны протоколы передачи объектов трем экспертным группам.
Официальная процедура эксгумации завершена около 10.00 утра по местному времени. В полдень состоялись официальные траурные мероприятия по случаю повторного погребения тела Ясира Арафата. С соблюдением дипломатических процедур переданные в Рамалле российской стороне изъятые при эксгумации биологические и небиологические образцы доставлены в Москву и направлены для исследования специалистам ФГБУ «Российский центр судебно-медицинской экспертизы» Минздрава России и ФГБУ «Государственный научный центр Российской Федерации — Федеральный медицинский биофизический центр им. А.И. Бурназяна» ФМБА России.
План молекулярно-генетического исследования
Молекулярно-генетическое экспертное исследование выполнялось в два этапа.
На первом этапе устанавливали генотипические признаки в изъятых в ходе эксгумации биологических объектах из захоронения Ясира Арафата, а именно: во фрагменте диафиза бедренной кости и зубе, которые предполагалось в дальнейшем направить на химико-токсикологическое и радиотоксикологическое исследования.
По окончании этого этапа для осуществления молекулярно-генетической верификации (подтверждения) принадлежности останков Ясиру Арафату возникла потребность в объектах сравнения (референтные объекты), которыми в подобных случаях могут выступать биологические образцы от родственников устанавливаемого лица или его собственные образцы [16]. В качестве последних предложено использовать так называемые контактные следы — латентные наложения биологического материала, образующиеся аэрозольным путем на поверхности различных объектов при громком разговоре, кашле или чиханье, а также при контакте тела человека с окружающими предметами. Подобные следы обычно присутствуют на предметах личного пользования.
На втором этапе экспертная комиссия в составе авторов этой статьи 14 апреля 2013 г. в резиденции Муката в Рамалле произвела осмотр, сортировку и выемку предметов, потенциально содержащих биологические следы, имеющие идентификационную значимость, из числа хранящихся там предметов и личных вещей, принадлежавших Ясиру Арафату.
Далее устанавливали генотипические признаки в латентных биологических следах, присутствующих на изъятых объектах, и проводили сравнительный анализ этих индивидуализирующих характеристик с теми, которые были определены на первом этапе работы в костных фрагментах, на предмет установления их тождества или различия.
Методики исследования
1. Пробоподготовка
1.1. Для исследования предоставлен зуб — первый правый премоляр верхней челюсти (зуб 1 4). Масса зуба 0,981 г. На коронке зуба, в пришеечной области, локализуется пломба из амальгамы белого металла.
Зуб обрабатывали целиком: очищали с использованием раствора неионного детергента, промывали деионизованной водой и 70% раствором этилового спирта, высушивали при комнатной температуре и подвергали облучению УФ-светом в течение 30 мин. Далее зуб фрагментировали, извлекали пломбу и отделяли эмаль. Масса пломбы 0,088 г; масса эмали 0,129 г.
Измельчение твердых тканей зуба проводили с использованием гомогенизатора TissueLyser II (QIAGEN, Германия) в режиме 30 Гц/20 с. Получили костный порошок (масса 0,764 г). Из части порошка массой 0,382 г с помощью сорбентной технологии на роботизированной станции AutoMate Express DNA Extraction System («Applied Biosystems», США) экстрагировали ДНК.
1.2. Предоставлен фрагмент диафиза бедренной кости длиной 6 см и массой 30,83 г. Из этой кости сделали поперечный выпил толщиной около 7 мм для химико-токсикологического исследования. Оставшийся фрагмент бедренной кости очищали с использованием раствора неионного детергента, промывали деионизованной водой, высушивали при комнатной температуре и подвергали облучению УФ-светом в течение 30 мин. Костную ткань локально измельчали с помощью напильника круглого сечения. Для исследования использовали параллельно две порции полученного костного порошка по 0,2 г.
1.3. Предоставлены в качестве референтных объектов предметы личного пользования и предметы одежды Ясира Арафата. Для исследования отобрали следующее (рис. 3):
1) зубные нити;
2) бритвенный станок;
3) зубная щетка;
4) кислородная маска;
5) молельный коврик;
6) тапочки матерчатые;
7) ингалятор;
8) ремешок от часов;
9) парадный мундир;
10) губка-мочалка для душа.
С указанными предметами провели подготовительные манипуляции с целью получения объектов для последующего экстрагирования ДНК, в том числе:
— от предметов № 1 и № 3 отделили рабочие части;
— с поверхности предметов № 2, 4, 8, 7 и 9 сделали смывы дистиллированной водой с помощью ватного аппликатора;
— с предметов № 5 и № 6 сделали отпечатки на липкую ленту-скотч;
— из предметов № 2 и № 10 извлекли волосы и клетки кожного эпителия.
Полный перечень полученных для исследования объектов приведен в табл. 2.
2. Экстрагирование ДНК
2.1. Экстрагирование суммарной клеточной ДНК из костного порошка проводили с применением сорбентной технологии, используя специализированный набор реагентов PrepFiler Express Forensic DNA Extraction Kit («Applied Biosystems», США), на роботизированной станции AutoMate Express DNA Extraction System («Applied Biosystems», США). Процедура лизиса составила 2 ч при температуре 56 °C и затем еще 18 ч при температуре 37 °C. После экстрагирования ДНК два параллельно процессированных препарата объединили в один и сконцентрировали с использованием микроконцентратора Amicon Ultra-4 50 KD («Amicon», США).
2.2. Экстрагирование суммарной ДНК из латентных биологических следов, имеющихся на референсных объектах (полученные смывы и отпечатки), и из иного полученного из референсных объектов биологического материала (см. п. 1.3) проводили с помощью сорбентных технологий в ручном и автоматизированном формате.
2.2.1. Фрагменты скотча (объекты № 5 и № 6) инкубировали 2 ч при температуре 56 °C в буфере PrepFiler BTATM Lysis Buffer («Applied Biosystems», США) с добавлением додецилсульфата натрия и протеиназы К. Полученный лизат процессировали на роботизированной станции AutoMate Express DNA Extraction System («Applied Biosystems», США) с применением штатного набора реагентов PrepFiler Express Forensic DNA Extraction Kit («Applied Biosystems», США).
2.2.2. Остальные смывы и иные объекты процессировали в ручном формате с использованием специализированного набора реагентов EZ1 DNA Investigator Kit («QIAGEN GmbH», Германия).
Для мониторинга возможной контаминации при выделении ДНК в схему эксперимента в обязательном порядке включали соответствующий контроль (контроль выделения, К.в.).
Для обеспечения достоверности результата процедуру экстрагирования ДНК из исходных объектов проводили в двух повторах.
Полученные препараты использовали в качестве матричных препаратов ДНК для постановки полимеразной цепной реакции (ПЦР).
3. Генотипирование
3.1. Типирование полиморфных STR-локусов аутосомной ДНК и ДНК Y-хромосомы проводили с помощью ПЦР, с использованием энзиматической амплификации нескольких мультилокусных панелей:
— 17-локусной панели AmpFlSTR® NGMSElect PCR Amplification Kit («Applied Biosystems», США): D10S1248, vWA, D16S539, D2S1338, D8S1179, D21S11, D18S51, D22S1045, D19S433, THO1, FGA, D2S441, D3S1358, D1S1656, D12S391, SE33 и локуса амелогенина;
— 17-локусной панели Investigator ESSplex SE Plus («QIAGEN GmbH», Германия): ТНО1, D3S1358, vWA, D21S11, D16S539, D1S1656, D19S433, SE33, D10S1248, D22S1045, D12S391, D8S1179, D2S1338, D2S441, D18S51, FGA и локуса амелогенина;
— 17-локусной панели AmpFlSTR® Yfiler™ PCR Amplification Kit («Applied Biosystems», США): DYS458, DYS19, DYS385, DYS393, DYS391, DYS439, DYS635, DYS392, DYS456, DYS389I, DYS390, DYS389II, YGATAH4, DYS437, DYS438 и DYS448;
— 11-локусной панели PowerPlex® Y System («Promega», США): DYS391, DYS389I, DYS439, DYS389II, DYS438, DYS437, DYS19, DYS392, DYS393, DYS390, DYS385;
— 23-локусной панели PowerPlex® Y23 System («Promega», США): DYS576, DYS389I, DYS448, DYS389II, DYS19, DYS391, DYS481, DYS549, DYS533, DYS438, DYS437, DYS570, DYS635, DYS390, DYS439, DYS392, DYS643, DYS393, DYS458, DYS385, DYS456, YGATAH4;
— 12-локусной панели Investigator Argus Y-12 System QS («QIAGEN GmbH», Германия): DYS439, DYS437, DYS390, DYS385, DYS391, DYS389−1, DYS19, DYS389−2, DYS393, DYS438, DYS392.
Продукты ПЦР фракционировали электрофоретически с использованием системы капиллярного электр