Карташов В.А.

Кафедра фармации Майкопского государственного технологического университета, Майкоп, Россия, 385000

Чернова Л.В.

ФГАОУ ВО «Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова» Минздрава России, Москва, Россия, Институт фармации, кафедра фармацевтической технологии, Москва, Россия

Определение оланзапина в трупной крови и ткани печени

Авторы:

Карташов В.А., Чернова Л.В.

Подробнее об авторах

Прочитано: 822 раза


Как цитировать:

Карташов В.А., Чернова Л.В. Определение оланзапина в трупной крови и ткани печени. Судебно-медицинская экспертиза. 2014;57(4):40‑43.
Kartashov VA, Chernova LV. Determination of olanzapine in cadaveric blood. Forensic Medical Expertise. 2014;57(4):40‑43. (In Russ.)

Рекомендуем статьи по данной теме:

Оланзапин - представитель атипичных антипсихотических лекарственных средств нового поколения. Он обладает рядом преимуществ перед типичными нейролептиками. Применяется для лечения больных шизофренией, при психических расстройствах с различной симптоматикой, для купирования острых маниакальных приступов и психомоторного возбуждения. Препарат обладает высокой фармакотерапевтической активностью. Оланзапин оказывает побочные действия, приводящие к отравлениям, часто заканчивающимся летальным исходом. Описано большое количество передозировок и смертных случаев, причиной которых явился оланзапин [1-5]. При интоксикациях оланзапином клиническая и патоморфологическая картина не характерны. Для установления причины отравления значение имеют результаты химико-токсикологического (судебно-химического) анализа. В настоящее время методы выделения оланзапина из биологических объектов, очистки, идентификации и количественного определения разработаны недостаточно.

Цель исследования - разработка методики определения оланзапина в трупной крови и ткани печени для использования в химико-токсикологическом анализе.

1. Определение оланзапина в трупной крови. В результате предварительных экспериментов были получены спектры абсорбции оланзапина, максимальное поглощение которого в этаноле наблюдалось при длинах волн 225 и 271 нм (последнюю длину волны выбрали в качестве аналитической). При использовании этанольных растворов 3 разных концентраций оланзапина в 3 повторностях установлена линейность УФ-спектрофотометрического определения, которая соблюдалась в пределах 2-15 мкг оланзапина в 1 мл раствора (длина волны 271 нм). При проведении ТСХ-скрининга [6] оланзапин попадает во ІІ хроматографичесую группу с индексом удерживания, равным 0,34±0,016. Определены потери оланзапина при хроматографировании и элюировании, которые составили около 7%.

Теоретические и экспериментальные исследования, проведенные ранее В.А. Карташовым [7] и Л.В. Черновой [8], показали преимущества амфифильных растворителей (метанол, этанол, ацетон, ацетонитрил и др.) для экстрагирования из биологического материала ряда веществ кислотного и основного характера. В связи с этим при выделении оланзапина из биологических объектов использовали ацетон как наиболее доступный, дешевый и менее токсичный (по сравнению с ацетонитрилом) растворитель.

Методика. По 5 г трупной крови помещали в пенициллиновые флаконы вместимостью 20 мл и добавляли по 0,5 мл рабочего стандартного образца, содержащего 400 мкг оланзапина в 1 мл раствора (к контрольным образцам печени добавляли 0,5 мл воды). Проводили по 5 параллельных и одному контрольному опыту. Содержимое флаконов перемешивали на аппарате для встряхивания при 70 колебаний в 1 мин в течение 2 ч при комнатной температуре. Далее в каждый флакон добавляли 10 мл ацетона и экстрагировали путем перемешивания на аппарате для встряхивания при 150 колебаний в 1 мин в течение 10 мин. В каждом случае ацетоновый экстракт отделяли от ткани центрифугированием при 2000 об/мин, фильтровали через небольшой ватный тампон в пенициллиновый флакон и выпаривали на водяной бане при температуре 40 °С и слабом потоке воздуха до удаления растворителя. К остатку во флаконе добавляли по 5 мл 0,1 н. раствора соляной кислоты и диэтилового эфира, содержимое тщательно встряхивали в течение 2 мин.

После разделения фаз отделяли водную фазу, подщелачивали раствором гидроксида аммония до рН 9 и экстрагировали 5 мл хлороформа. Хлороформный слой отделяли, выпаривали, сухой остаток растворяли в небольшом количестве хлороформа и количественно в виде полосы наносили на стартовую линию пластины Сорбфил. Хроматографирование проводили в системе ацетон параллельно со смесью 5 метчиков в камере, не насыщенной парами растворителя. Оказалось, что оланзапин, выделенный из крови, имеет такие же хроматографические характеристики, как стандартный образец оланзапина (рис. 1, а).

Рисунок 1. Рис. 1. Хроматограммы оланзапина, выделенного из трупной крови (а), печени (б) и крови крысы (в).

После хроматографирования оланзапин, обнаруженный с помощью реактива Драгендорфа, элюировали путем экстракции хлороформом из щелочной среды. Остаток после удаления хлороформа растворяли в 10 мл этанола, раствор спектрофотометрировали в диапазоне 200-400 нм (раствор сравнения - этанол). Полученные спектральные кривые (рис. 2, кривые 2-6)

Рисунок 2. Рис. 2. Спектры абсорбции стандартного образца оланзапина (1), оланзапина, выделенного из трупной крови (2-6), контрольной пробы (7).
соответствовали стандартному раствору оланзапина (см. рис. 2, кривая 1).

Количественное определение оланзапина проводили согласно стандарту. Использовали величины оптических плотностей, измеренных при длине волны 271 нм (максимум поглощения оланзапина). Данные экспериментов показали, что при одноступенчатом экстрагировании в трупной крови определяется в среднем 55% оланзапина (см. таблицу).

2. Определение оланзапина в крови и печени лабораторных животных. Для апробации разработанной методики выполнили эксперименты на лабораторных животных. Использовали 3 беспородные лабораторные крысы, каждой из которых с помощью зонда в желудок вводили суспензию таблеточной массы, содержащей 50 мг оланзапина. Через 1,5 ч крыс умертвили путем передозировки эфирного наркоза и вскрыли. По 5 г печени и средней пробы крови крыс исследовали по разработанной методике.

Далее провели ТСХ-скрининг экстрактов из печени и анализ хроматограмм в УФ-свете (254 нм). Обнаружили флюоресцирующую полосу в V хроматографической группе. После обработки хроматограммы реактивом Драгендорфа проявились 3 полосы желто-оранжевого цвета (см. рис. 1, б): две полосы (1, 2) во ІІ и одна (3) в V хроматографической группе (флюоресцирующая до проявления). Следует отметить, что полоса 1 во II группе через некоторое время приобрела слабую желтоватую окраску. Вещества из каждой отмеченной полосы после элюирования исследовали УФ-спектрофотометрическим методом (рис. 3).

Рисунок 3. Рис. 3. Спектры абсорбции стандартного образца оланзапина (2), оланзапина, выделенного из печени крысы (3), примесного соединения (1).
Оказалось, что спектр вещества полосы 2 полностью соответствует спектральной кривой оланзапина, а спектр вещества полосы 3, по-видимому, является спектром метаболита оланзапина: имеет 2 максимума поглощения, первый из которых смещен несколько гипсохромно (λm 220 нм), а второй - батохромно (λm 295) по сравнению с максимумами абсорбции оланзапина. Спектральная кривая вещества полосы 1, не имеющей экстремумов, и с учетом данных ТСХ-анализа, может быть отнесена к спектру примесного соединения.

При исследовании экстракта из крови крыс методом ТСХ-скрининга и рассматривании хроматограммы в УФ-свете флюоресцирующей полосы в V хроматографической группе не наблюдали. После обработки этой хроматограммы реактивом Драгендорфа обнаружили 2 полосы оранжевого цвета во ІІ и ІV группах (см. рис. 1, в). Спектральные кривые веществ после элюирования с хроматограммы приведены на рис. 3. Спектр абсорбции вещества II хроматографической группы (кривая 2) совпал со спектром оланзапина. Спектральная кривая 3 вещества IV хроматографической группы была аналогична спектру поглощения метаболита оланзапина, выделенного из печени крыс.

Следовательно, из крови и печени крыс выделены два разных метаболита, которые имеют одинаковые спектральные характеристики, но различаются по хроматографической подвижности.

Были определены количества оланзапина, выделенного из печени и крови крыс, которые составили 67,6, 109,5, 105,5 и 31,1 мкг соответственно.

Выводы

Показана возможность применения разработанной методики для экстракционного выделения оланзапина из трупных крови и ткани печени, его обнаружения и количественного определения. Методика апробирована в экспериментах на лабораторных животных и может быть рекомендована для определения оланзапина при химико-токсикологических исследованиях.

Подтверждение e-mail

На test@yandex.ru отправлено письмо со ссылкой для подтверждения e-mail. Перейдите по ссылке из письма, чтобы завершить регистрацию на сайте.

Подтверждение e-mail

Мы используем файлы cооkies для улучшения работы сайта. Оставаясь на нашем сайте, вы соглашаетесь с условиями использования файлов cооkies. Чтобы ознакомиться с нашими Положениями о конфиденциальности и об использовании файлов cookie, нажмите здесь.