The in vitro examination of the effectiveness of antiseptic substances for a surface disinfection of teeth inoculated with Escherichia coli

Makeeva I.M.; Franko A.; Semenov A.M.; Biakova S.F.; Novozhilova N.E.; Dezhurko-Korol V.A.

doi:https://doi.org/10.17116/stomat2018970418

Макеева И.М.

ФГАО «Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова» Минздрава России, Москва, Россия

Франко А.

Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России, Москва, Россия

Семенов А.М.

Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия

Бякова С.Ф.

Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова, Москва, Россия

Новожилова Н.Е.

ГБОУ ВПО «Первый МГМУ им. И.М. Сеченова», Москва, Россия

Дежурко-Король В.А.

Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России, Москва, Россия

Исследование in vitro эффективности антисептических веществ для поверхностной дезинфекции зубов, инокулированных Escherichia coli

Авторы:

Макеева И.М., Франко А., Семенов А.М., Бякова С.Ф., Новожилова Н.Е., Дежурко-Король В.А.

Подробнее об авторах

Журнал: Стоматология. 2018;97(4): 8‑10

DOI: 10.17116/stomat2018970418

Прочитано: 1031 раз

Скачать PDF

Связаться с автором

Оглавление

Как цитировать:

Макеева И.М., Франко А., Семенов А.М., Бякова С.Ф., Новожилова Н.Е., Дежурко-Король В.А. Исследование in vitro эффективности антисептических веществ для поверхностной дезинфекции зубов, инокулированных Escherichia coli. Стоматология. 2018;97(4):8‑10.
Makeeva IM, Franko A, Semenov AM, Biakova SF, Novozhilova NE, Dezhurko-Korol VA. The in vitro examination of the effectiveness of antiseptic substances for a surface disinfection of teeth inoculated with Escherichia coli. Stomatology. 2018;97(4):8‑10. (In Russ.)
https://doi.org/10.17116/stomat2018970418

Подписка 2026 Стоматология (Stomatology)

Использование инфографики авторами научных работ

Закрыть метаданные

Резюме / Abstract:

Цель исследования: оценить возможность проникновения бактерий Escherichia coli внутрь дентинных канальцев образцов и определить антимикробную эффективность 3% HO(группы I и II — экспозиция 5 и 20 мин соответственно) и 3% NaOCl (группы III и IV — экспозиция 1 и 5 мин соответственно) при поверхностной дезинфекции бычьих зубов. Образцы инокулировали суспензией E. coli. Производили поверхностный отмыв образцов от инокулянта с последующей поверхностной дезинфекцией. Качество дезинфекции проверяли тремя методами. Поверхностная дезинфекция образцов была эффективной только во II и IV группах, при высевах всех разведений суспензий опилок в группах I, III и V был рост E. coli в виде сплошного газона. В группе II был обнаружен рост E. coli только в исходном разведении в количестве 1,8·10 КОЕ/мл, а в группе IV роста не было. Применение 3% раствора HOс экспозицией 20 мин обеспечивает качественную поверхностную дезинфекцию зубов без уничтожения бактерий, которые проникли в дентинные канальцы, что необходимо при проведении экспериментов in vitro.

Ключевые слова / Keywords:

эндодонтия

дезинфекция

дентинные опилки

Escherichia coli

Авторы / Authors:

Макеева И.М.

Франко А.

Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России, Москва, Россия

Семенов А.М.

Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия

Бякова С.Ф.

Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова, Москва, Россия

Новожилова Н.Е.

ГБОУ ВПО «Первый МГМУ им. И.М. Сеченова», Москва, Россия

Дежурко-Король В.А.

Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России, Москва, Россия

Закрыть метаданные

Эффективность медикаментозной обработки системы корневых каналов зубов при эндодонтическом лечении является сложной и актуальной проблемой стоматологии. Целью эндодонтического лечения зубов является ликвидация бактерий из системы корневых каналов, имеющих сложную анатомию [1, 6]. Анализ антимикробной эффективности веществ, используемых при лечении корневых каналов зубов путем их дезинфекции, является ключевым аспектом. Для подбора дезинфицирующих веществ, используемых в клинической практике in vivo, необходимо испытать их в экспериментах in vitro. При этом необходимо доказать проникновение бактерий в глубину дентинных канальцев, а также подтвердить их жизнеспособность. В исследовании была использована культура Escherichia coli, поскольку данный микроорганизм хорошо изучен и может вызывать инфекционный процесс [3, 4]. Во избежание загрязнения бактериями с поверхности образца при изъятии материала дентина необходимо провести дезинфекцию образцов. Это позволит предотвратить инфицирование с поверхности образцов и выявить жизнеспособные бактерии непосредственно внутри дентинных канальцев. Для этой цели были использованы растворы 3% перекиси водорода и 3% гипохлорита натрия с разной экспозицией. Выбор дезинфицирующих средств для поверхностной дезинфекции образцов обусловлен их широким применением в стоматологической практике при эндодонтическом лечении зубов [2]. В исследовании были использованы бычьи зубы, поскольку они имеют схожую морфологию с человеческими зубами [1, 5].

Цель исследования — оценка возможности проникновения бактерий E. coli внутрь дентинных канальцев корней зубов и антимикробной эффективности веществ при поверхностной дезинфекции образцов.

Материал и методы

Для исследования из 16 бычьих зубов были изготовлены образцы в форме цилиндров (с помощью токарно-винторезного станка TOS SV18RA TOS, Чехия) высотой 4 мм, наружный диаметр 6 мм и внутренний диаметр 2 мм (рис. 1).

Рис. 1. Схема цилиндра, полученного из бычьего зуба.

Все образцы хранились в стерильной дистиллированной воде. Удаление смазанного слоя с поверхности зубов проводили ультразвуком, последовательно погружая образцы в ультразвуковые ванночки (UltraEst, GeoSoft) со следующими растворами и временем экспозиции: 1) 3% NaOCl, 10 мин; 2) стерильная дистиллированная вода, 1 мин; 3) 17% ЭДТА (MD-Cleanser, METABIOMED, PRC), 10 мин; 4) стерильная дистиллированная вода, 1 мин; 5) 3% NaOCl («Технодент», Россия), 10 мин; 6) стерильная дистиллированная вода, 5 мин. Оценка эффективности удаления смазанного слоя с поверхности корневого канала зуба показана на рис. 2.

Рис. 2. Открытые дентинные канальцы в образце зуба после удаления смазанного слоя. Снимок сделан с помощью сканирующего электронного микроскопа.

Образцы были простерилизованы в автоклаве в бульоне («Биомед», Питательная среда № 8, Россия) при 121 °C, 1 атм. в течение 30 мин. Инокуляцию образцов проводили погружением в 10 мл суспензии E. coli в дистиллированной воде (10⁹ клеток на 1 мл, что соответствовало 10 по стандарту мутности). Инкубировали в течение 24 ч при 37 °C в стационарных условиях. Образцы были распределены на пять групп: I — 3% H₂O₂в течение 5 мин, II — 3% H₂O₂в течение 20 мин, III — 3% NaOCl в течение 1 мин, IV — 3% NaOCl в течение 5 мин, V группа — контроль, стерильный физиологический раствор в течение 5 мин. Дезинфекцию образцов проводили погружением их в дезинфицирующие растворы. 1 мл физиологического раствора после финального отмыва образцов добавляли в 9 мл бульона, корневые каналы образцов высушивали стерильными бумажными штифтами, которые затем помещали на поверхность агаризованной среды чашки Петри. Механическую обработку поверхности корневых каналов образцов проводили с помощью стерильных шаровидных боров с диаметром 1,4 мм. Содержимое с поверхности корневых каналов из каждого образца в виде частиц дентина высевали в виде суспензии на среду чашки Петри. Все образцы инкубировали в течение 24 ч при 37 °C. Цилиндры взвешивали на аналитических весах («Sartorius», Германия) до и после получения дентинных опилок. Дентинные опилки получали c глубины до 500 мкм с помощью стерильных шаровидных боров с диаметром 3 мм (NTI, Германия). Опилки каждого образца переносили в пробирки с 10 мл стерильного бульона, перемешивали на вортексе («Heidolph Reax Top», Германия) в течение 30 с и проводили десятикратные последовательные разведения в бульоне до 1·10⁵. Производили высевы из всех разведений в трех повторностях по 0,05 мл на среды чашек Петри. Посевы инкубировали в течение 24 ч при 37 °C. Определение количества бактерий производили через 24 ч путем подсчета КОЕ и методом предельных разведений (МПР).

Результаты и обсуждение

Только использование 3% раствора NaOCl в течение 5 мин и 3% раствора H₂O₂ в течение 20 мин обеспечивало поверхностную дезинфекцию образцов. В группах I, III и V на чашках Петри из всех разведений был получен сплошной рост, в группе IV роста не было. В группе II на чашках обнаружили рост Escherichia coli в количестве 1,8·10¹. При количественной оценке бактерий внутри дентинных канальцев методом предельных разведений выявили аналогичное количество бактерий, как и при подсчете КОЕ. Использование 3% раствора NaOCl с экспозицией 5 мин показало эффективную поверхностную дезинфекцию образцов, однако данный вариант дезинфекции не может быть использован для исследований in vitro, так как уничтожает бактерии, находящиеся внутри дентинных канальцев. Обработка образцов с помощью 3% раствора H₂O₂ в течение 20 мин позволяет провести эффективную поверхностную дезинфекцию и выявлять жизнеспособные бактерии внутри дентинных канальцев, что необходимо при проведении экспериментов in vitro.

Благодарность

Благодарим сотрудников кафедры микробиологии биологического факультета МГУ им. М.В. Ломоносова А.М. Семенова, М.Р. Леонтьеву и Е.В. Семенову за помощь в организации и проведении исследования.

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Сведения об авторах

Макеева Ирина Михайловна — д.м.н., проф., директор Института стоматологии, заведующая кафедрой терапевтической стоматологии Первого МГМУ им. И.М. Сеченова; тел.: +7(499)248-3875; e-mail: irina_makeeva@inbox.ru; https://orcid.org/0000-0002-7878-0452