Исследование in vitro эффективности антисептических веществ для поверхностной дезинфекции зубов, инокулированных Escherichia coli

Авторы:

Макеева И.М.,

Франко А.,

Андрей Михайлович Семенов,

Бякова С.Ф.,

Новожилова Н.Е.,

Дежурко-Король В.А.

Журнал: Стоматология. 2018;97(4):8-10.

DOI: 10.17116/stomat2018970418

Прочитано: 1323 раза

Скачать PDF

Резюме

Цель исследования: оценить возможность проникновения бактерий Escherichia coli внутрь дентинных канальцев образцов и определить антимикробную эффективность 3% HO(группы I и II — экспозиция 5 и 20 мин соответственно) и 3% NaOCl (группы III и IV — экспозиция 1 и 5 мин соответственно) при поверхностной дезинфекции бычьих зубов. Образцы инокулировали суспензией E. coli. Производили поверхностный отмыв образцов от инокулянта с последующей поверхностной дезинфекцией. Качество дезинфекции проверяли тремя методами. Поверхностная дезинфекция образцов была эффективной только во II и IV группах, при высевах всех разведений суспензий опилок в группах I, III и V был рост E. coli в виде сплошного газона. В группе II был обнаружен рост E. coli только в исходном разведении в количестве 1,8·10 КОЕ/мл, а в группе IV роста не было. Применение 3% раствора HOс экспозицией 20 мин обеспечивает качественную поверхностную дезинфекцию зубов без уничтожения бактерий, которые проникли в дентинные канальцы, что необходимо при проведении экспериментов in vitro.

Ключевые слова

эндодонтия
дезинфекция
дентинные опилки
Escherichia coli

Дата публикации: 04.05.2020

Эффективность медикаментозной обработки системы корневых каналов зубов при эндодонтическом лечении является сложной и актуальной проблемой стоматологии. Целью эндодонтического лечения зубов является ликвидация бактерий из системы корневых каналов, имеющих сложную анатомию [1, 6]. Анализ антимикробной эффективности веществ, используемых при лечении корневых каналов зубов путем их дезинфекции, является ключевым аспектом. Для подбора дезинфицирующих веществ, используемых в клинической практике in vivo, необходимо испытать их в экспериментах in vitro. При этом необходимо доказать проникновение бактерий в глубину дентинных канальцев, а также подтвердить их жизнеспособность. В исследовании была использована культура Escherichia coli, поскольку данный микроорганизм хорошо изучен и может вызывать инфекционный процесс [3, 4]. Во избежание загрязнения бактериями с поверхности образца при изъятии материала дентина необходимо провести дезинфекцию образцов. Это позволит предотвратить инфицирование с поверхности образцов и выявить жизнеспособные бактерии непосредственно внутри дентинных канальцев. Для этой цели были использованы растворы 3% перекиси водорода и 3% гипохлорита натрия с разной экспозицией. Выбор дезинфицирующих средств для поверхностной дезинфекции образцов обусловлен их широким применением в стоматологической практике при эндодонтическом лечении зубов [2]. В исследовании были использованы бычьи зубы, поскольку они имеют схожую морфологию с человеческими зубами [1, 5].

Цель исследования — оценка возможности проникновения бактерий E. coli внутрь дентинных канальцев корней зубов и антимикробной эффективности веществ при поверхностной дезинфекции образцов.

Материал и методы

Для исследования из 16 бычьих зубов были изготовлены образцы в форме цилиндров (с помощью токарно-винторезного станка TOS SV18RA TOS, Чехия) высотой 4 мм, наружный диаметр 6 мм и внутренний диаметр 2 мм (рис. 1).

Рис. 1. Схема цилиндра, полученного из бычьего зуба.

Все образцы хранились в стерильной дистиллированной воде. Удаление смазанного слоя с поверхности зубов проводили ультразвуком, последовательно погружая образцы в ультразвуковые ванночки (UltraEst, GeoSoft) со следующими растворами и временем экспозиции: 1) 3% NaOCl, 10 мин; 2) стерильная дистиллированная вода, 1 мин; 3) 17% ЭДТА (MD-Cleanser, METABIOMED, PRC), 10 мин; 4) стерильная дистиллированная вода, 1 мин; 5) 3% NaOCl («Технодент», Россия), 10 мин; 6) стерильная дистиллированная вода, 5 мин. Оценка эффективности удаления смазанного слоя с поверхности корневого канала зуба показана на рис. 2.

Рис. 2. Открытые дентинные канальцы в образце зуба после удаления смазанного слоя. Снимок сделан с помощью сканирующего электронного микроскопа.

Образцы были простерилизованы в автоклаве в бульоне («Биомед», Питательная среда № 8, Россия) при 121 °C, 1 атм. в течение 30 мин. Инокуляцию образцов проводили погружением в 10 мл суспензии E. coli в дистиллированной воде (10⁹ клеток на 1 мл, что соответствовало 10 по стандарту мутности). Инкубировали в течение 24 ч при 37 °C в стационарных условиях. Образцы были распределены на пять групп: I — 3% H₂O₂в течение 5 мин, II — 3% H₂O₂в течение 20 мин, III — 3% NaOCl в течение 1 мин, IV — 3% NaOCl в течение 5 мин, V группа — контроль, стерильный физиологический раствор в течение 5 мин. Дезинфекцию образцов проводили погружением их в дезинфицирующие растворы. 1 мл физиологического раствора после финального отмыва образцов добавляли в 9 мл бульона, корневые каналы образцов высушивали стерильными бумажными штифтами, которые затем помещали на поверхность агаризованной среды чашки Петри. Механическую обработку поверхности корневых каналов образцов проводили с помощью стерильных шаровидных боров с диаметром 1,4 мм. Содержимое с поверхности корневых каналов из каждого образца в виде частиц дентина высевали в виде суспензии на среду чашки Петри. Все образцы инкубировали в течение 24 ч при 37 °C. Цилиндры взвешивали на аналитических весах («Sartorius», Германия) до и после получения дентинных опилок. Дентинные опилки получали c глубины до 500 мкм с помощью стерильных шаровидных боров с диаметром 3 мм (NTI, Германия). Опилки каждого образца переносили в пробирки с 10 мл стерильного бульона, перемешивали на вортексе («Heidolph Reax Top», Германия) в течение 30 с и проводили десятикратные последовательные разведения в бульоне до 1·10⁵. Производили высевы из всех разведений в трех повторностях по 0,05 мл на среды чашек Петри. Посевы инкубировали в течение 24 ч при 37 °C. Определение количества бактерий производили через 24 ч путем подсчета КОЕ и методом предельных разведений (МПР).

Результаты и обсуждение

Только использование 3% раствора NaOCl в течение 5 мин и 3% раствора H₂O₂ в течение 20 мин обеспечивало поверхностную дезинфекцию образцов. В группах I, III и V на чашках Петри из всех разведений был получен сплошной рост, в группе IV роста не было. В группе II на чашках обнаружили рост Escherichia coli в количестве 1,8·10¹. При количественной оценке бактерий внутри дентинных канальцев методом предельных разведений выявили аналогичное количество бактерий, как и при подсчете КОЕ. Использование 3% раствора NaOCl с экспозицией 5 мин показало эффективную поверхностную дезинфекцию образцов, однако данный вариант дезинфекции не может быть использован для исследований in vitro, так как уничтожает бактерии, находящиеся внутри дентинных канальцев. Обработка образцов с помощью 3% раствора H₂O₂ в течение 20 мин позволяет провести эффективную поверхностную дезинфекцию и выявлять жизнеспособные бактерии внутри дентинных канальцев, что необходимо при проведении экспериментов in vitro.

Благодарность

Благодарим сотрудников кафедры микробиологии биологического факультета МГУ им. М.В. Ломоносова А.М. Семенова, М.Р. Леонтьеву и Е.В. Семенову за помощь в организации и проведении исследования.

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Сведения об авторах

Макеева Ирина Михайловна — д.м.н., проф., директор Института стоматологии, заведующая кафедрой терапевтической стоматологии Первого МГМУ им. И.М. Сеченова; тел.: +7(499)248-3875; e-mail: irina_makeeva@inbox.ru; https://orcid.org/0000-0002-7878-0452