Для оценки влияния остеопластического материала Коллост (ЗАО «Биофармахолдинг», Россия) на регенерацию костной ткани и биорезорбируемой мембраны Коллост на заживление слизистой оболочки проведено экспериментальное исследование на животных [1]. В задачи настоящего исследования входила сравнительная характеристика остеопластического средства Коллост на основе коллагена как в искусственно созданном дефекте нижней челюсти кролика в эксперименте, так и при заполнении костных дефектов после удаления ретенированных дистопированных нижних третьих моляров (рис. 1).

Необходимость экспериментального исследования продиктована особенностью проведения патоморфологической части исследования при изучении процесса регенерации костной ткани в динамике, чего в клинических исследованиях добиться невозможно [1, 5-7].

В качестве метода оценки влияния остеопластического материала Коллост на заживление костных дефектов в эксперименте было выбрано создание искусственного дефекта в нижней челюсти кролика с последующим изучением динамики заживления костной ткани [1, 2]. Исследование проведено на 24 годовалых кроликах. Под гексеналовым наркозом в области дистального отдела нижней челюсти с помощью шаровидного бора воспроизводили дефекты диаметром на поверхности до 10 мм и глубиной около 3-5 мм. В зависимости от условий эксперимента животные были разделены на 3 группы по 8 кроликов в каждой: 1-я - в костные дефекты вводили препарат Коллост, ушивали рану наглухо; 2-я - в костные дефекты вводили препарат Коллост, изолировали рану биорезорбируемой мембраной Коллост, затем ушивали; 3-я - контрольная - костный дефект заживал под кровяным сгустком. Операцию производили в асептических условиях. Сроки выведения животных из опытов - 15, 30, 60 и 90-е сутки. Тканевые блоки декальцинировали в трилоне-Б и подвергали стандартной гистологической обработке с заливкой в парафин и окраской парафиновых срезов гематоксилином и эозином и по Маллори. Интенсивность и характер новообразования костных структур оценивали с помощью гистологического и морфометрического методов сравнения. Изолируя костную рану от периостального источника регенерации, его закрывали тонкой коллагеновой пленкой Коллост (ЗАО «Биофармахолдинг», Россия). Кроме этого, для изучения тканевой реакции на подкожное введение остеопластического материала под гексеналовым наркозом Коллост имплантировали кроликам под кожу спины. Операцию производили в асептических условиях. Животных декапитировали на 15, 30, 60, 90-е сутки (табл. 1).

В соответствии с существующими рекомендациями проводили описание микрофотограмм с полученных срезов и оценку морфологических признаков на каждом исследуемом препарате при разном увеличении микроскопа [3, 4]. Полученные данные суммировали и усредняли по группам животных, выведенных из эксперимента в определенный срок.

Экспериментальная модель, выбранная для исследования, заключалась в создании у подопытных животных - кроликов в области нижней челюсти стандартных дефектов, которые под кровяным сгустком заполнялись костной мозолью в течение 90 сут чуть менее чем на ¹/3. Таким образом, превышение этого параметра в присутствии препарата Коллост в сроки от 30 до 90 сут после операции позволяло оценивать эффект действия материала на костно-репаративный процесс как положительный.

Динамика развития костного регенерата в ране при использовании материала Коллост в 1-й группе имела ряд особенностей. Тяжи коллагена материала подвергались резорбции достаточно быстро - на 15-е сутки, сначала соединение вновь образованной костной ткани происходило лишь по краям дефекта. В центре наблюдалось отслоение вновь образованной костной ткани от дна дефекта, снаружи - напластование базофильного костного вещества, имеющего вид коротких и прямых остеоидных балочек. Среди клеток преобладали фибробласты, лимфоциты и макрофаги (рис. 2).

На 30-е сутки эксперимента (рис. 3)

Темп регенерации костной ткани в ране при использовании Коллоста достаточно высокий. Степень полного резорбирования материала по срокам наблюдения составила 55,4% в срок 15-30 сут и 86,8% в срок 60-90 сут.

На 30-е сутки эксперимента в области дефекта отмечается появление остеокластов и молодой костной ткани, превосходящее по интенсивности этот процесс в других группах. К этому сроку наблюдения обнаружена костная мозоль, которая возвышается над поверхностью неповрежденной костной ткани. В костной мозоли выявляются сформировавшиеся остеоны. Они имеют различные размеры и форму - от округлой до вытянутой в виде овала.

На 60-е сутки эксперимента отмечается новообразованная костная структура в промежуточном слое, которая имеет довольно рыхлое строение (рис. 4, а, б). Помимо роста крупноволокнистой соединительной ткани со стороны надкостницы, соединительная ткань прорастает в область дефекта от адвентиции сосудов гаверсовых каналов.

На периферии отслоенной вновь образованной костной ткани находятся круглые клетки (предположительно, иммунные - плазмоциты) (см. рис. 4, в). Во вновь образованной костной ткани хорошо просматриваются остеоны как по периферии, так и в толще отслоившейся костной ткани.

Вместе с тем по периферии в присоединившейся костной ткани остеоны более сформированные (см. рис. 4, г), а в центре отсоединившейся костной ткани они не имеют четкой формы (см. рис. 4, д).

К 90-м суткам опыта костный регенерат занимает более 2/3 объема дефекта и на его периферии он неразличим с нативной костью. К данному сроку становятся отчетливо видны значительные по толщине коллагеновые волокна, толщина которых на 30-60-е сутки эксперимента была еще совсем незначительной. На 90-е сутки эксперимента в отсоединившейся костной ткани между остеонами видны большие участки оставшегося нерезорбированным материала (рис. 5, а).

Наблюдается уплотнение тяжей клеточноволокнистой соединительной ткани с явлениями напластовывания вновь образованных костных структур вокруг остатков материала (см. рис. 5, б).

Таким образом, динамика развития костного регенерата в ране при использовании остеопластического материала Коллост в 1-й группе имеет ряд особенностей. Тяжи коллагена материала подвергались резорбции достаточно быстро - на 15-30-е сутки, однако соединение с костной тканью вновь образованной костной структуры происходило лишь по краям. В центре наблюдалось отслоение вновь образованной костной ткани от дна дефекта, снаружи - напластование базофильного костного вещества, имеющего вид коротких и прямых остеоидных балочек, там же по периферии отслоенной вновь образованной костной ткани находились плазмоциты. Среди клеток преобладали фибробласты, а также встречались лимфоциты. Местами между тяжами материала обнаруживались мигрировавшие сюда макрофаги и лимфоидные элементы (в незначительном количестве).

К 60-м суткам эксперимента во вновь образованной костной ткани хорошо просматривались остеоны, однако по периферии в присоединившейся костной ткани остеоны были более сформированные, а в центре отсоединившейся костной ткани они не имели четкой формы. К 90-м суткам между остеонами еще были видны участки оставшегося нерезорбированным материала, однако обращало на себя внимание изменение структуры костного репарата, элементы которого уже были подвергнуты вторичной перестройке и созреванию.

Использованный в 1-й группе эксперимента материал Коллост обладает достаточной биосовместимостью и способствует развитию репаративного остеогенеза. Темп регенерации костной ткани при использовании данного материала и в ранние (15-30-е сутки) и в более поздние (60-90-е сутки) сроки наблюдения достаточно высокий. Степень полного резорбирования материала по срокам наблюдения составила 55,4% (15-30-е сутки) и 86,8% (60-90-е сутки) (табл. 2).

При исследовании костных срезов 2-й группы с использованием остеопластического препарата Коллост и биомембраны Коллост на 15-е сутки обнаружено, что из надкостницы между фрагментами материала врастает крупноволокнистая соединительная ткань, богатая как клетками, так и коллагеновыми волокнами. В ней хорошо видны сформированные кровеносные сосуды, входящие в материал и расслаивающие его. Уже в это время на фрагментах Коллоста образуется молодая костная ткань, которая совмещается с дном дефекта.

1. Тканевая реакция при подкожной имплантации препарата Коллост в эксперименте на кроликах характеризуется образованием фиброзной капсулы, прорастанием соединительной ткани через поры материала, клеточной резорбцией и ферментативным лизисом без признаков выраженного воспаления.

2. Экспериментальные данные, полученные с применением материала Коллост, позволяют обосновать новый способ костной пластики при удалении ретенированного дистопированного третьего нижнего моляра, создают условия для оптимальной регенерации кости и снижают количество воспалительных осложнений на 65,7% по сравнению с группой контроля.