Миома матки (ММ) — это доброкачественная, моноклональная опухоль, происходящая из гладкомышечных клеток шейки или тела матки [1]. В 1955 г. M. Norman и P. Ludovici первыми обнаружили, что источником формирования ММ является гладкомышечная клетка.

Факторами риска развития ММ являются семейная предрасположенность (генетическая природа) [2], раннее начало первой менструации, обильные менструации, высокая частота искусственных прерываний беременности, наличие экстрагенитальных и гинекологических заболеваний [1, 3, 4].

Течение ММ может быть симптомным и бессимптомным [5]. Основными клиническими проявлениями являются аномальные маточные кровотечения, нарушение функции смежных органов, хронические тазовые боли, увеличение объема живота, бесплодие и невынашивание беременности [6].

Основным методом лечения ММ до настоящего времени остается хирургический [7]. Однако проблема рецидивов миомы матки (РММ) неразрывно связана с этиологическими факторами и не может быть решена только хирургическим путем. Изучение молекулярно-биологических процессов в миометрии и в самих миоматозных узлах при помощи метаболомного анализа вышеуказанных тканей позволит выявить индивидуальные нарушения структур, участвующих в патогенезе заболевания. Исследование образцов тканей миометрия и миоматозных узлов с использованием современных молекулярно-биологических методов является перспективным для изучения патогенеза заболевания. Усиление пролиферации, снижение апоптоза, ростовые факторы (инсулиноподобные факторы роста, фактор роста эндотелия сосудов, фактор роста фибробластов, тромбоцитарный фактор роста, ангиогенин, эпидермальный фактор роста, оксид азота, интерлейкин IL-8, матриксные металлопротеиназы), стероидные гормоны (эстрогены и прогестерон) традиционно рассматривают как стимуляторы роста лейомиомы. Доказано, что эти факторы играют важную роль в развитии, росте, рецидивировании ММ [8].

В настоящее время проводятся многочисленные исследования по поиску маркеров заболевания, выявлению пусковых механизмов развития ММ.

A. Plewka и соавт. изучили роль провоспалительных факторов в патогенезе развития ММ. Целью исследования было определение уровня экспрессии NF-kB, IL-1β, фактора некроза опухоли альфа (TNF-α), циклооксигеназы-2 (COX-2) в миометрии и миоматозных узлах женщин различного возраста. Экспрессия исследуемых белков была выше в ММ, чем в миометрии пациенток контрольной группы, и зависела от размера ММ и возраста женщин [9].

Иммуногистохимическим фактором благоприятного прогноза является высокий уровень TIMP-1 в окружающем миометрии, а также низкие показатели Ki-67, PR и VEGF в лейомиоме и окружающем миометрии [10]. В поисках новых биомаркеров лидирующие позиции занимают метаболомные и протеомные технологии, позволяющие с высокой точностью определить молекулярный состав любого биологического образца [11]. Масс-спектрометрия основана на разделении в пространстве и/или времени различающихся по величине отношения массы к заряду предварительно ионизированных частиц. Разделение проводится в условиях вакуума за счет воздействия на частицы статических или изменяющихся во времени электрических, магнитных или комбинированных полей. Это наиболее универсальный способ определения не только состава исследуемых смесей, но также термодинамических или структурных характеристик компонентов.

Методами полного протеомного профилирования идентифицированы потенциальные белки-биомаркеры хронического лимфолейкоза (ХЛЛ) и острого лимфолейкоза (ОЛЛ). К белкам-биомаркерам ХЛЛ можно отнести антиген плоскоклеточной карциномы, распознаваемый Т-клетками 3; гетерогенные ядерные рибонуклеопротеины F, H, H2, K; белок 1 фактора удлинения транскрипции А; гомолог 5 белка хромобокса; 40S рибосомальный белок S3a; 60S рибосомальный белок L12; нуклеофозмин; рентгено-восстанавливающий кросс-комплементный белок 6; нуклеолин.

Среди потенциальных белков — биомаркеров ОЛЛ в качестве наиболее характерных выявлены: субъединица 6 фактора специфичности расщепления и полиаденилирования; белки нуклеопорина Nup43, Nup85, Nup88, Nup160; 40кДа малый ядерный рибонуклеопротеиновый белок U5; гомолог субъединицы 6 комплекса ТНО; SNW-домен содержащий белок 1; суперкиллер виралицидной активности 2 [12].

Таким образом, использование масс-спектрометрии позволит выявить потенциальные биомаркеры ММ, прогнозировать темпы роста и рецидивирование ММ. Представлены результаты исследования метаболомного профилирования образцов миометрия, миоматозных узлов у пациенток с миомой матки и рецидивом заболевания.

Цель исследования — определить роль липидомного анализа тканей миометрия и миоматозных узлов в предикции рецидива миомы матки.

В исследование включено 66 пациенток: 35 пациенток с впервые выявленной ММ и 31 пациентка с РММ. Вес пациентки обследованы и прооперированы в гинекологическом отделении ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова».

Все пациентки подписали информированное согласие на участие в исследовании. Исследование одобрено этическим комитетом ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. акад. В.И. Кулакова» Минздрава России.

Критерии включения для пациенток групп ММ и РММ: репродуктивный возраст (18—45 лет); наличие миомы матки; заинтересованность пациентки в сохранении репродуктивной функции, отсутствие гормональной терапии более 6 мес до операции.

Критерии исключения: наличие системных аутоиммунных заболеваний, тяжелой соматической патологии, онкологических заболеваний; инфекций, в том числе передающихся половым путем; сопутствующей гинекологической патологии.

Показаниями к оперативному лечению были обильные менструации, приводящие к анемии, выраженный болевой синдром, отсутствие эффекта от ранее проведенной консервативной терапии, бесплодие. Всем женщинам проведено хирургическое лечение. Во всех случаях оперативное вмешательство проводилось с лапароскопическим доступом.

У пациенток группы РММ отмечены бóльшая продолжительность операции (ММ — 93,1±39,8 мин, РММ — 111,4±57,2 мин), что указывает на сложность проведения повторной органосохраняющей операции; бóльшая интраоперационная кровопотеря (ММ — 201,6±234,9 мл, РММ — 240,7±289,3 мл), в связи с чем чаще (27% случаев) прибегали к реинфузии аутоэритроцитов (<0,001).

В группе РММ больше количество удаленных миоматозных узлов (ММ — 4±4 узла, РММ — 5±5 узлов), <0,0001.

Забор тканей (миометрия и миоматозных узлов) проводили во время оперативного вмешательства. Образцы тканей помещали в стерильную пробирку, в жидком азоте транспортировали в биобанк, где хранили в морозильной камере при температуре –80 С до проведения исследования.

Экстракты липидов получали в соответствии с модифицированным методом J. Folch и соавт. [13]. В ходе данного исследования брали 50 мг ткани, гомогенизировали (в азоте), добавляли 5 мл внутреннего стандарта, 700 мл смеси хлороформ—метанол (2:1), переносили в пробирки Эппендорфа. После центрифугирования смеси в нее добавляли 700 мл смеси хлороформ—метанол (2:1) и переносили в пробирку Эппендорфа. Полученная смесь подвергалась действию ультразвука на протяжении 10 мин, после чего к смеси добавляли 440 мл раствора хлорида натрия (NaCl) и пропускали в течение 10 сек через Vortex («IKA», Германия).

Смесь центрифугировали в течение 5 мин при 15000 об/мин и температуре окружающей среды. Отбирали органический слой, содержащий липиды, подвергали вакуумной сушке, затем повторно растворяли в смеси 250 мл изопропанола и 250 мл ацетонитрила для последующего масс-спектрометрического анализа.

Определение молекулярного состава образцов проводили с помощью масс-спетрометрии с электрораспылительной ионизацией на масс-спектрометре Maxis Impact qTOF (Bruker Daltonics, Германия). Масс-спектры получали в режиме положительных и в режиме отрицательных ионов в диапазоне 100—1800 со следующими настройками: напряжение на капилляре 4,1 кВ в режиме положительных ионов (3,0 кВ в режиме отрицательных ионов), давление распыляющего газа 0,7 бар, скорость потока осушающего газа 6 л/мин, температура осушающего газа 200 С [14, 15].

Для предварительной обработки масс-спектрометрических данных использовали распространяемые программы msConvert из Proteowizard 3.0.9987 для преобразования файлов в MzXml и MzMine для выделения пиков, нормирования на полный ионный ток и создания таблицы, содержащей информацию о пике — массе иона и площади пика.

Липиды идентифицировали посредством созданного в лаборатории R-скрипта по точной массе с помощью генерируемой базы данных масс-липидов по заданному иону, классу, суммарной длине остатков жирных кислот и по характерным тандемным масс-спектрам (МС/МС).

Статистический анализ для определения липидов, потенциально значимых для различий в метаболизме клеток миометрия и ММ при впервые выявленной миоме и при РММ, проводили с помощью непараметрического двустороннего теста Манна—Уитни. Интенсивности пиков, относящихся к липидам, описывали в виде медианы (Me) и квартилей Q1 и Q3 в формате Me (Q1; Q3). Величину критического уровня значимости принимали равной 0,05.

Анализ метаболических путей, в которых задействованы обнаруженные потенциально значимые липиды, проводился с использованием онлайн-ресурса Metaboanalyst 4.0 (/) методами гипергеометрического теста для анализа избыточного представления и относительной степени посредничества для топологического анализа путей и библиотеки KEGG для .

Более точными отражениями каскада процессов, приводящих к развитию ММ, являются изменения в миометрии и миоматозных узлах. Всего в исследовании участвовало 66 пациенток. Средний возраст пациенток с ММ составил 37,9±5,5 года, а пациенток с РММ — 39,9±5,2 года. Диагноз ММ установлен при влагалищном исследовании, подтвержден данными ультразвукового исследования органов малого таза, лапароскопии, окончательно верифицирован при гистологическом исследовании.

При изучении тканей миометрия и миомы идентифицировано 213 липидов в режиме положительных ионов и 180 липидов в режиме отрицательных ионов. Уровни липидов, выявленные при сравнении групп ММ и РММ в тканях миометрия и миоматозных узлов, представлены в .

При сравнении липидного профиля образцов тканей при впервые выявленной ММ и РММ определено 69 соединений липидов, квалифицированных как значимые . При сравнении липидного профиля образцов миометрия в группах ММ и РММ выявлено 42 соединения липидов, определенных как значимые . Статистически значимые изменения уровней липидов в образцах миоматозных узлов и миометрия при РММ зарегистрированы для 20 липидов, при этом для 19 из них уровень липидов изменялся в сторону увеличения, кроме триацилглицерола TG 42:1 .

Анализ метаболических путей показал высокую задействованность значимых липидов в образцах миоматозных узлов в метаболизме линолевой кислоты, метаболизме глицерофосфолипидов, эфирных липидов, сфинголипидов с достаточным уровнем статистической значимости (<0,05) . У пациенток групп ММ и РММ в образцах миометрия выявлены различные уровни липидов (<0,05), участвующих в метаболизме глицерофосфолипидов, эфирных липидов, сфинголипидов.

Соединения липидов, значимые для тканей миометрия и миоматозных узлов, преимущественно задействованы в метаболизме глицерофосфолипидов и сфинголипидов , что свидетельствует об общих метаболических процессах для миометрия и миомы при рецидиве миомы. В то же время метаболизм линолевой кислоты претерпевает изменения только в клетках миомы. Изменения в метаболизме линолевой кислоты в клетках миомы по сравнению с клетками миометрия, а также с изменением жирнокислотного профиля клеток отмечены M. Islam и соавт. [16].

В связи с современной тенденцией к планированию беременности в более позднем репродуктивном периоде увеличивается доля пациенток с гинекологической патологией, в том числе и с миомой матки. Учитывая высокую частоту выявления заболевания и возрастающую потребность женщин в решении репродуктивных проблем, следует отметить, что органосохраняющее лечение при миоме матки является одним из приоритетных направлений гинекологии. Однако реконструктивно-пластические операции сопряжены с высоким риском рецидива и повторной операции. Для повышения эффективности функциональной хирургии матки при миоме у пациенток репродуктивного возраста принципиально важным является не только выявление заболевания на ранних этапах развития, но и оценка возможности рецидивирования.

В настоящее время нет точных критериев оценки вероятности рецидива миомы матки, в связи с чем отсутствует возможность подбора индивидуальной программы восстановительного лечения, в том числе и планирования репродуктивных задач. Сравнительное изучение масс-спектрометрических профилей тканей миоматозных узлов и миометрия определит новые молекулярные маркеры для ранней диагностики и прогноза течения заболевания.

Проблема поиска маркеров социально значимых заболеваний относится к основополагающим направлениям развития биомедицинской науки, поскольку маркеры позволяют не только детализировать молекулярные механизмы развития патологических процессов, но и разработать алгоритмы для их диагностики и контроля лечения.

Концепция и дизайн исследования — Л.А., Н.С.

Сбор и обработка материала — Н.Т., И.К., В.Ф., В.Ч., А.Т., Н.С.

Статистический анализ данных — Н.Т., И.К., В.Ф., В.Ч., А.Т., Н.С.

Написание текста — Н.Т., И.К., В.Ф., В.Ч., А.Т., Н.С.

Редактирование — Л.А.