Нарушение фертильности сперматозоидов при хроническом трихомониазе

Возбудитель урогенитального трихомониаза Trichomonas vaginalis часто выявляется при обследовании мужчин, страдающих бесплодием [1, 2]. Вирулентность патогена связана с инвазивностью и токсигенностью. К факторам инвазии можно отнести железозависимый синтез трихомонадами адгезинов (АР65, АР51, АР33, АР23). Кроме того, описаны многочисленные секреторные гидролазы трихомонад с молекулярной массой от 20 до 110 кД, из которых наиболее важны цистеиновые протеиназы [3]. Патоген может вырабатывать ряд молекул с цитотоксической активностью, например, молекулу с перфоринподобной активностью, литический фактор и др. [4]. Факторы патогенности, характерные для трихомонад, кроме достаточно высокой вирулентности, способны приводить к токсическому повреждению сперматозоидов, что доказано в экспериментах in vitro [5].

Однако единой оценки влияния хронической трихомонадной инфекции на морфофункциональное состояние сперматозоидов человека in vivo пока нет. Это связано с тем, что в ряде случаев на фоне хронического трихомониаза параметры стандартной спермограммы остаются в пределах нормы, это дает основание подвергать сомнению возможную роль Trichomonas vaginalis в патогенезе мужского бесплодия.

Углубленное исследование сперматозоидов человека и их биохимического микроокружения, выходящее за рамки стандартной спермограммы, стало целью настоящей работы.

Исследован эякулят 127 мужчин в возрасте от 24 до 45 лет (средний возраст 30,5±5,8 года) с подтвержденным диагнозом «хронический трихомониаз» (МКБ-10 А59.0), у которых патоген был выделен из спермы.

Спермограмму проводили по стандартной методике в соответствии с рекомендациями Руководства ВОЗ 5-го издания [6].

Лейкоциты в сперме определяли одноступенчатым методом окраски на пероксидазу с бензидином. Использовали коммерческий диагностический набор LeucoScreen (фирма «FertiPro N.V.», Бельгия).

Жизнеспособность сперматозоидов оценивали с помощью теста с окрашиванием эозином и нигрозином (коммерческий диагностический набор VitalScreen фирмы «FertiPro N.V.», Бельгия) и теста на гипоосмотическое набухание сперматозоидов, HOS-тест (диагностический набор HOS-test, фирмы «FertiPro N.V.», Бельгия).

Для оценки антител, покрывающих сперматозоиды, применяли MAR-тест с IgA, IgG и IgM. Тесты проводили по стандартным методикам в соответствии с рекомендациями Руководства ВОЗ 5-го издания [6] с применением коммерческих наборов. Для выявления на поверхности сперматозоидов антиспермальных антител IgA и IgG использовали наборы SpermMar IgA Test и SpermMar IgG Test (фирма «FertiPro N.V.», Бельгия), антител IgM — наборы MarScreen IgM (фирма «Bioscreen Inc.», США).

В спермоплазме определяли лимонную кислоту — стандартным фотометрическим методом с FeCl₃ с помощью коммерческого набора Citric Acid Test (фирма «FertiPro N.V.», Бельгия); цинк — стандартным фотометрическим методом с Nitro-PAPS, коммерческий набор Zinc Sp-DAC.Lq (фирма «DAC-SpectroMed S.R.L.», Молдова) в соответствии с рекомендациями Руководства ВОЗ 5-го издания [6]; фруктозу — стандартным фотометрическим методом с индолом с применением коммерческого набора Fructose Test (фирма «FertiPro N.V.», Бельгия) в соответствии с рекомендациями Руководства ВОЗ 5-го издания [6]; нейтральную альфа-гликозидазу — спектрофотометрическим методом с PNPG и глюкозой в качестве ингибитора, коммерческий набор EPISCREEN PLUS (фирма «FertiPro N.V.», Бельгия); гликоделин — методом твердофазного иммуноферментного анализа с использованием коммерческого набора АМГФ Фертитест-М (фирма ООО «Диатекс-ЭМ», Россия).

Тест на связывание сперматозоидов с гиалуроновой кислотой (НВА-тест) выполняли на слайдах с иммобилизованной гиалуроновой кислотой по стандартной методике с использованием коммерческого набора HBA Assay (фирма «Biocoat Inc.», США).

Для статистической обработки результатов эксперимента проводили расчет с применением параметрических методов анализа [7, 8].

Всем больным (n=127), страдающим трихомониазом, была выполнена стандартная спермограмма в соответствии с рекомендациями экспертной группы ВОЗ [6]. Оказалось, что у 71 (55,9%) пациента имелись различные отклонения от референсных значений показателей стандартной спермограммы, классифицируемые как патозооспермия. Однако у 56 (44,1%) пациентов показатели стандартной спермограммы соответствовали критериям «нормозооспермии» (табл. 1). Дальнейшие исследования были посвящены именно этой группе пациентов.

У всех пациентов с «нормозооспермией» было проведено расширенное исследование эякулята: MAR-тесты (с IgA, IgG и IgM), тест на гипоосмотическое набухание сперматозоидов (HOS-тест), тест на связывание сперматозоидов с гиалуроновой кислотой (HBA-тест). Кроме того, определяли в сперме концентрацию цинка, лимонной кислоты, фруктозы, гликоделина и ферментативную активность нейтральной альфа-гликозидазы. Полученные результаты сравнивали с референсными значениями для соответствующих параметров (табл. 2). Оказалось, что во всех образцах эякулятов, классифицированных как «нормозооспермия», были отклонения по одному или нескольким дополнительным параметрам. Частота встречаемости отклонений по каждому из дополнительных параметров и тестов представлена в табл. 3.

В целом частота встречаемости отклонений от референсных значений для большинства дополнительных параметров оказалась ожидаемой и сопоставимой с таковой при воспалительных заболеваниях мужской репродуктивной системы другой этиологии. Однако отклонения со стороны двух параметров оказались значительно выше, чем при других инфекционно-воспалительных заболеваниях. Так, уровень гликоделина выходил за референсные пределы более чем в 30% случаев, а HBA-тест — в 37,5%, что не характерно для воспалительных заболеваний мужской репродуктивной системы нетрихомонадной этиологии.

Вероятно, Trichomonas vaginalis, кроме уже описанных в литературе механизмов [3, 4, 9, 10], может оказывать влияние на местный иммунитет и через нарушение синтеза и/или секреции гликоделина, так как недостаток этого белка может препятствовать нормальному протеканию процесса оплодотворения и последующему течению беременности. Низкий процент связывания сперматозоидов в HBA-тесте свидетельствует о нарушении взаимодействия сперматозоидов с cumulus oophorous (основным компонентом матрикса которого является гиалуроновая кислота) и соответственно указывает на крайне низкую вероятность оплодотворения яйцеклетки как при естественных условиях, так и при проведении ВРТ (искусственная инсеминация, экстракорпоральное оплодотворение и др.) [11—13].

Таким образом, Trichomonas vaginalis не только неблагоприятно воздействуют на сперматозоиды в экспериментальных условиях, что было показано в предыдущей нашей работе и работах других исследователей [5, 14], но и могут приводить к нарушению морфофункциональных характеристик сперматозоидов и их биохимического микроокружения in vivo. Учитывая высокую частоту встречаемости неблагоприятных результатов HBA-теста, мы считаем возможным рекомендовать проведение теста на взаимодействие сперматозоидов с гиалуроновой кислотой всем пациентам с хроническим трихомониазом в анамнезе, для которых планируется ВРТ и, в частности, ЭКО в рамках лечения бесплодия.

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Источник финансирования: ООО «РЕПРОДИАМЕД» (Астрахань, Российская Федерация).