Сайт издательства «Медиа Сфера»
содержит материалы, предназначенные исключительно для работников здравоохранения. Закрывая это сообщение, Вы подтверждаете, что являетесь дипломированным медицинским работником или студентом медицинского образовательного учреждения.

Микитенко Д.А.

ГУ "Институт гигиены и медицинской экологии им. А.Н. Марзеева Национальной академии медицинских наук Украины", Киев, Украина

Зукин В.Д.

Клиника репродуктивной медицины "Надия", Киев, Украина

Эффективность применения сравнительной геномной гибридизации в преимплантационных исследованиях эмбрионов у пациенток с многократными неудачными попытками ВРТ

Авторы:

Микитенко Д.А., Зукин В.Д.

Подробнее об авторах

Журнал: Проблемы репродукции. 2013;(5): 68‑70

Прочитано: 424 раза


Как цитировать:

Микитенко Д.А., Зукин В.Д. Эффективность применения сравнительной геномной гибридизации в преимплантационных исследованиях эмбрионов у пациенток с многократными неудачными попытками ВРТ. Проблемы репродукции. 2013;(5):68‑70.
Mikitenko DA, Zukin VD. Effectiveness of array-comparative genomic hybridization application for preimplantation genetic testing of embryos in patients with multiple ivf failures. Russian Journal of Human Reproduction. 2013;(5):68‑70. (In Russ.)

Применение вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) очень часто становится единственным путем, позволяющим пациентам с бесплодием иметь генетически родных детей. Однако кумулятивная частота наступления беременности после года лечения методами ВРТ составляет в среднем 27,4% [1] и зависит от причин бесплодия, возраста женщины, конкретного ВРТ-центра. Это обусловливает необходимость дальнейшего поиска путей повышения эффективности лечения. В частности, это относится к прогностически неблагоприятной группе пациентов в отношении достижения беременности — супружеских пар с множественными неудачными попытками ВРТ, на долю которых в структуре обращаемости в репродуктивные клиники приходится около 20—30%. Многократное отсутствие имплантации может быть обусловлено комплексом причин, среди которых основными являются генетические, анатомические и гормональные факторы. Эмбриональный фактор является ключевым, так как он на 70% определяет вероятность имплантации [2]. Как правило, у таких пациентов возникает дополнительный фактор риска — длительность бесплодия [3], которая ассоциируется с повышением риска получения анеуплоидных эмбрионов, что позволяет предположить: группа пациентов с множественными неудачными циклами ВРТ характеризуется повышенной частотой получения генетически аномальных эмбрионов. В этой связи целесообразно применение методов преимплантационного генетического скрининга (ПГС) с целью селекции эуплоидных эмбрионов и повышения эффективности ВРТ-процедур.

Имплементация технологий преимплантационной диагностики в клиническую практику дала возможность проводить хромосомный анализ эмбрионов до переноса в полость матки, тем самым исключая основную причину спонтанных абортов на ранних сроках и повторных нарушений имплантации — хромосомные аберрации.

Цель работы — анализ эффективности применения метода сравнительной геномной гибридизации на микрочипах (aCGH) для преимплантационной диагностики эмбрионов у супружеских пар, характеризующихся множественными неудачными попытками ВРТ.

Материал и методы

Преимплантационные исследования эмбрионов проводили в рамках циклов ВРТ с информированного согласия пациентов. В выборку вошли 182 эмбриона в 33 циклах ПГС пациентов с множественными неудачными циклами ВРТ (3,9±0,8 цикла), нормальным кариотипом супругов и возрастом женщины 33,9±5,4 года. Все пациенты имели нормальный кариотип. Оплодотворение ооцитов осуществлялось методом ICSI независимо от показателей спермограммы. Лазерная биопсия эмбрионов проводилась на стадии бластоцисты (5-е сутки развития), исследуемый материал — клетки трофэктодермальной оболочки. Биопсия проводилась при условии наличия не менее 3 эмбрионов качества не ниже 3ВВ и начавшегося хэтчинга. Эмбрионы после биопсии витрифицировались для дальнейшего использования в криоциклах. ПГС проводился методом тотального геномного скрининга — aCGH. С целью проведения анализа клетки трофэктодермы эмбрионов лизировали с последующим проведением полногеномной амплификации (SurePlex DNA Amplification system, «BlueGnome, Ltd.», UK). Пробы и референсную ДНК метили различными красителями (Су3 и Су5) (Fluorescent Labelling System [dCTP], «BlueGnome, Ltd.», UK), после чего комбинировали согласно протоколу производителя, смешивали с COT Human DNA (1 мг/мл, «BlueGnome, Ltd.», UK), DS Hybridization buffer («BlueGnome, Ltd.», UK), денатурировали на протяжении 10 мин при температуре 75 °С и гибридизировали на протяжении 18 ч на чипах 24sureV3 («BlueGnome, Ltd.», UK) при температуре 47 °С. После отмывки чипы сканировали с помощью Innocsan 710 («Innopsys», Франция), полученные изображения обрабатывали программным обеспечением BlueFuseMulti v. 3.1 («BlueGnome, Ltd.», UK). Наложение «сетки», количественную оценку, нормализацию и пост-процессинг проводили в автоматическом режиме. Хромосомный профиль оценивали на предмет наличия дополнительного либо потери генетического материала (gain & loss) на основании отклонения сегмента от изолинии на величину 3×SD и/или 0,3 log2-ratio [4].

Группу контроля составили ретроспективно выбранные 134 пары с нормальным кариотипом и множественными неудачными попытками ВРТ (3,2±0,4 цикла), возрастом женщины 34,3±4,3 года, которым ПГС не проводился.

Статистический анализ выполнен с использованием F-теста и непараметрического критерия Пирсона (χ2). Критическим уровнем значимости статистических критериев считали значение p≥0,05.

Результаты и обсуждение

Проведение ПГС методом aCGH позволило установить, что 52,7% 5-дневных эмбрионов в группе с множественными неудачными циклами ВРТ не имели несбалансированных хромосомных аномалий, что позволяло считать их эуплоидными/сбалансированными. Соответственно 47,3% были с хромосомными аномалиями. По данным [5], среди 3-дневных эмбрионов в аналогичной группе пациентов анеуплоидные эмбрионы составили 53,9% при исследовании методом aCGH и 36,2% — методом FISH. По данным [6], доля анеуплоидных эмбрионов в группе пациентов с множественными неудачными попытками ВРТ при исследовании методом FISH колеблется от 25,4 до 67,5% и зависит от количества детектируемых хромосом и также свидетельствует о возможных различиях в подходах к формированию выборки. В отношении aCGH, то в силу новизны метода еще не накоплена детальная статистика в научной литературе. Например, авторы [7] отмечают, что у пациенток с хорошим прогнозом в отношении достижения беременности анеуплоидия эмбрионов методом aCGH определяется на 5-й день развития в 44,9% случаев. По данным [8], в общей (безвыборочной) группе доля анеуплоидных эмбрионов составляет 69 и 51% на 3-й и 5-й дни развития соответственно.

Проведенное нами исследование позволило установить значительные различия в эффективности циклов ВРТ в зависимости от применения ПГС (см. таблицу).

Как видно из таблицы, в группе пациенток, которым проводился ПГС, частота наступления беременности была достоверно выше, чем в контрольной группе (63,6% против 13,6%). То же относится и к показателю имплантации (48,6% против 8,6%). Частота невынашивания беременности в нашем исследовании статистически значимо не различалась между группами. А более высокий процент оконченных циклов в контрольной группе связан с тем, что в группе с проведением ПГС были случаи отмены переноса эмбрионов по причине отсутствия эуплоидных эмбрионов. В контрольной же группе эмбриотрансфер не производился лишь в случае отсутствия морфологически нормальных эмбрионов на день предполагаемого переноса.

Сопоставляя собственные данные с результатами, опубликованными в доступной научной литературе, касающимися пациенток с множественными неудачными попытками ВРТ, отметим, что в работе [5] удалось достичь частоты беременности на перенос 21% при частоте имплантации 15% в случае использования aCGH. В случае использования FISH аналогичные показатели составляли 11 и 7% соответственно. Обзорные данные [6] свидетельствуют о том, что при применении FISH с целью ПГС в аналогичной группе пациентов частота беременности на перенос составляет, как правило, 14—34,7% при частоте имплантации 10—24,2%. В безвыборочной группе пациенток, по данным Reprogenetics [8], применение aCGH при использовании 3-дневных эмбрионов с целью ПГС позволяет достичь частоты наступления беременности 39 и 54% на цикл и перенос соответственно при частоте имплантации 39%. В случае анализа 5-дневных эмбрионов эти показатели составляют соответственно 50% (с разбросом 26—73% в зависимости от клиники) и 67% (53—94%) при частоте имплантации 61%. В группе пациенток с хорошим прогнозом [7] отмечают частоту наступления беременности в расчете на перенос 71%.

Выводы

Анализируя приведенную информацию, можно подытожить, что применение aCGH-ПГС в группе пациенток с множественными неудачными циклами ВРТ является действенным механизмом повышения эффективности лечения. Однако при переносе хромосомно «нормального» эмбриона мы не можем иметь абсолютной гарантии адекватного функционирования генетического аппарата и элиминировать целый ряд причин невынашивания беременности, о чем может свидетельствовать обнаружение нормального кариотипа в материале спонтанных выкидышей и замерших беременностей. Не следует также абсолютизировать роль генетических факторов в имплантации. Да, этот аспект является одним из основных. Однако помимо него необходимо учитывать и морфологические характеристики эмбрионов, готовность эндометрия, гормональный статус женщины. Становится понятным, что частота наступления беременности является интегральным показателем эффективности и слаженности работы отдельных подразделений клиники и применение aCGH с целью ПГС в группе пациенток с множественными неудачными циклами ВРТ является одним из возможных путей повышения результативности работы репродуктивной клиники.

Подтверждение e-mail

На test@yandex.ru отправлено письмо со ссылкой для подтверждения e-mail. Перейдите по ссылке из письма, чтобы завершить регистрацию на сайте.

Подтверждение e-mail

Мы используем файлы cооkies для улучшения работы сайта. Оставаясь на нашем сайте, вы соглашаетесь с условиями использования файлов cооkies. Чтобы ознакомиться с нашими Положениями о конфиденциальности и об использовании файлов cookie, нажмите здесь.