Сайт издательства «Медиа Сфера»
содержит материалы, предназначенные исключительно для работников здравоохранения. Закрывая это сообщение, Вы подтверждаете, что являетесь дипломированным медицинским работником или студентом медицинского образовательного учреждения.

Дедов И.И.

ФГБУ «Эндокринологический научный центр» Минздрава России

Марова Е.И.

ФГУ Эндокринологический научный центр, Москва

Абросимов А.Ю.

ФГУ Эндокринологический научный центр, Москва

Лапшина А.М.

ФГУ Эндокринологический научный центр, Москва

Григорьев А.Ю.

ФГУ Эндокринологический научный центр, Москва

 Аблицов Ю.А.

Национальный медико-хирургический центр им. Н.И. Пирогова, Москва

Кузнецов Н.С.

ФГУ Эндокринологический научный центр, Москва

Гончаров Н.П.

ФГУ Эндокринологический научный центр, Москва

Арапова С.Д.

ФГУ Эндокринологический научный центр, Москва

Рожинская Л.Я.

ФГУ Эндокринологический научный центр, Москва

Экспрессия рецепторов соматостатина и дофамина в АКТГ-продуцирующих опухолях

Авторы:

Дедов И.И., Марова Е.И., Абросимов А.Ю., Лапшина А.М., Григорьев А.Ю.,  Аблицов Ю.А., Кузнецов Н.С., Гончаров Н.П., Арапова С.Д., Рожинская Л.Я.

Подробнее об авторах

Журнал: Проблемы эндокринологии. 2010;56(1): 14‑18

Просмотров: 480

Загрузок: 14

Как цитировать:

Дедов И.И., Марова Е.И., Абросимов А.Ю., Лапшина А.М., Григорьев А.Ю.,  Аблицов Ю.А., Кузнецов Н.С., Гончаров Н.П., Арапова С.Д., Рожинская Л.Я. Экспрессия рецепторов соматостатина и дофамина в АКТГ-продуцирующих опухолях. Проблемы эндокринологии. 2010;56(1):14‑18.
Dedov II, Marova EI, Abrosimov AIu, Lapshina AM, Grigor'ev AIu,  Ablitsov IuA, Kuznetsov NS, Goncharov NP, Arapova SD, Rozhinskaia LIa. Expression of somatostatin and dopamine receptors in ACTH-producing tumours. Problemy Endokrinologii. 2010;56(1):14‑18. (In Russ.).

?>

Рецепторы соматостатина (РС) и рецепторы дофамина (РД) широко распространены в нейроэндокринных новообразованиях [1, 2], которыми являются адренокортикотропин (АКТГ)-секретирующие опухоли гипофиза — кортикотропиномы (болезнь Иценко—Кушинга, БИК) и АКТГ-секретирующие опухоли негипофизарной локализации (АКТГ-эктопический синдром, АКТГ-ЭС) [3].

Методом выбора лечения пациентов с БИК и АКТГ-ЭС является хирургическое удаление опухолей [4, 5]. После нейрохирургического удаления кортикотропином длительная ремиссия достигается в 65—83% случаев, тогда как в остальных развивается рецидив или продолженный рост опухоли [6]. У пациентов с АКТГ-ЭС прогноз после лечения может зависеть от характера опухоли, степени злокачественности и распространенности метастазирования [7, 8]. Для больных с карциноидами различной локализации характерны относительно благоприятные результаты хирургического удаления опухоли. У пациентов с мелкоклеточным раком легких или медуллярным раком щитовидной железы могут развиваться регионарные и отдаленные метастазы. Результаты хирургического удаления таких новообразований во многом зависят от продолжительности ремиссии заболевания и возможности рецидива опухоли или развития метастазов с клиническими проявлениями АКТГ-зависимого гиперкортицизма [9].

По данным разных авторов [10, 11], наиболее перспективным консервативным методом лечения пациентов с БИК и АКТГ-ЭС, особенно тех, у кого не достигнута ремиссия после хирургического удаления АКТГ-секретирующих опухолей, является терапия аналогами соматостатина и/или агонистами дофамина. Эти препараты имеют сродство к РС 1, 2, 3, 5-го подтипов и РД 2-го подтипа (РД2) соответственно. Для выбора препарата необходима информация о наличии или отсутствии рецепторов определенных подтипов в опухолевых клетках, степени их экспрессии и распределении в опухоли [11, 12].

Иммуногистохимическое исследование (ИГХИ) позволяет выявить конкретные подтипы РС и РД, их локализацию, степень экспрессии, гомогенное (все опухолевые клетки имеют рецепторы) или гетерогенное (часть опухолевых клеток не экспрессирует рецепторы) распределение в опухоли [1, 12]. ИГХИ дает возможность выявить локализацию рецепторов в опухолевых клетках или клетках окружающей неопухолевой ткани, сосудов, клетках воспалительной инфильтрации и др., где также могут встречаться РС. Таким образом, использование ИГХИ позволяет избежать возможных ложноположительных результатов при исследовании in vivo (фармакологическая проба с окреотидом [13], сцинтиграфия с введением меченых, аналогов соматостатина [14]).

В настоящем исследовании с помощью ИГХИ проведен сравнительный анализ экспрессии РС 1—5-го подтипов и РД2 в клетках кортикотропином и опухолей с эктопической продукцией АКТГ.

Материал и методы

Материалом исследования служили данные медицинских карт и парафиновые блоки хирургически удаленной опухолевой ткани у 35 больных: 21 — с БИК и 14 — с АКТГ-ЭС.

Пациенты были обследованы, оперированы и наблюдались в течение от 3 мес до 8 лет после операции в Эндокринологическом научном центре или Национальном медико-хирургическом центре им. Н.И. Пирогова. Возраст больных с кортикотропиномами (БИК) составил от 24 до 52 лет. По данным гормонального анализа крови у всех пациентов выявлено нарушение ритма суточной секреции АКТГ и кортизола, повышение уровня свободного кортизола в моче. После проведения малой пробы с дексаметазоном у всех больных отмечали снижение уровня кортизола в крови менее чем на 50% (отрицательный результат), после большой пробы с дексаметазоном — более чем на 50% (положительный результат). По данным магнитно-резонансной томографии (МРТ) головного мозга у всех больных диагностированы опухоли гипофиза, из них у 15 (62,5%) — микроаденомы, у 9 (37,5%) — макроаденомы. Всем больным выполнена трансназальная транссфеноидальная аденомэктомия. При гистологическом исследовании удаленной ткани аденом с применением ИГХИ с антителами к АКТГ выявлены кортикотропиномы гипофиза у всех больных (см. рисунок на цв. вклейке).

Рисунок 1. Гистологическая и иммуногистохимическая характеристика АКТГ-продуцирующих аденом гипофиза (A, C, E, G) и карциноидных опухолей легких (B, D, F, H). Окраска гематоксилином и эозином (A, B), иммуногистохимические реакции опухолевых клеток с антителами к АКТГ (C, D), рецепторам соматостатина 1-го подтипа (E, F), рецепторам дофамина 2-го подтипа (G, H). Увеличение микроскопа: ×60 (A, B, H); ×150 (C, D, F); ×300 (E, G).

Возраст больных с АКТГ-ЭС составил от 19 до 55 лет. У больных данной категории было обнаружено нарушение ритма суточной секреции АКТГ и кортизола, повышение уровня свободного кортизола в моче. Малая и большая пробы были отрицательными у всех больных. При топической диагностике с использованием мультиспиральной компьютерной томографии у 12 из 14 (85,7%) пациентов были выявлены объемные образования в ткани легких. В правом легком образования (8) размерами от 1,0 до 5,1 см в максимальном измерении локализовались в верхней (1), средней (3) и нижней (4) долях, в левом легком (4) — в верхней (2) и нижней (2) долях. У одной пациентки диагностировано объемное образование в правой почке, еще у одной — в вилочковой железе. При гистологическом исследовании удаленных образований диагностированы мелкоклеточный рак (1), атипичные карциноиды (8), типичные карциноиды легких (3), атипичный карциноид вилочковой железы (1) и типичный карциноид почки (1) (рисунок В).

Все больные с кортикотропиномами, включенные в исследование, были отобраны «случайным» образом. Все случаи хирургически удаленных опухолей, ассоциированных с АКТГ-ЭС, собраны за период с 2000 до 2008 г.

Продукция АКТГ клетками опухолей различной локализации подтверждена с помощью ИГХИ с соответствующими первичными моноклональными антителами к АКТГ (NeoMarkers, США; разведение 1:100) (рисунок С, D). Характеристика первичных антител, использованных для выявления экспрессии РС и РД2, представлена в табл. 1.

В качестве вторичных антител и системы визуализации использован чувствительный комплекс универсальных антител с авидин-стрептавидинпероксидазной системой, не содержащей биотин (Nichirei, Япония).

Экспрессию рецепторов различных типов определяли как положительную при позитивной реакции более 30% опухолевых клеток и как отрицательную — в отсутствие реакции или позитивной реакции менее 30% опухолевых клеток.

В качестве положительного контроля использовали для РС ткань инсулиномы, для РД2 — ткань соматотропиномы. Негативным контролем служили срезы ткани исследуемых АКТГ-продуцирующих опухолей, на которые вместо первичных антител наносили раствор фосфатного буфера.

Статистическую обработку полученных данных проводили с помощью программы Statistica for Windows, Statsoft Inc, версия 6,0. Анализ качественных признаков (частота экспрессии РС и РД2) в независимых группах (кортикотропиномы и эктопические АКТГ-продуцирующие опухоли) проводили с помощью критерия χ2 с поправкой Йетса (для РС 1-го типа), точного критерия Фишера (односторонний тест) — для РС 2—5-го подтипов, РД2. Статистически значимыми считали различия при р<0,05.

Результаты

Иммуноэкспрессия РС 1—5-го подтипов (с преобладанием 1-го подтипа) и РД2 обнаружена с различной частотой во всех кортикотропиномах (см. рисунок E, G). Результаты определения частоты экспрессии рецепторов различных подтипов представлены в табл. 2.

В 17 из 21 (81%) кортикотропиномы отмечена коэкспрессия 2 подтипов РС и более. Результаты анализа коэкспрессии РС и РД2 отражены в табл. 3.
Экспрессия РД2 выявлена в 11 из 21 случая кортикотропиномы (см. табл. 2). В 6 (29%) кортикотропиномах констатирована коэкспрессия РС различных подтипов и РД2. В 12 из 14 (86%) опухолей с эктопической продукцией АКТГ обнаружены РС 1—5-го подтипов (в 8 атипичных и 4 типичных карциноидах легких, тимуса и почки) с преобладанием 3-го подтипа (см. рисунок, F и табл. 2). Клетки мелкоклеточного рака и одного атипичного карциноида легких не экспрессировали РС. В 50% всех РС-позитивных случаев опухолей с эктопической продукцией АКТГ выявлена коэкспрессия 2 подтипов РС и более. Экспрессия РД2 обнаружена в 50% всех исследованных опухолей с эктопической продукцией АКТГ (см. рисунок, H). Коэкспрессия РС различных подтипов и РД2 обнаружена в 3 случаях из 8 (38%).

В кортикотропиномах и опухолях с эктопической продукцией АКТГ выявлено преимущественно гетерогенное распределение РС- и РД2-позитивных клеток, характеризующихся цитоплазматической и мембранной реакцией.

Статистический анализ различий частоты экспрессии РС и РД2 в кортикотропиномах и опухолях с эктопической продукцией АКТГ позволил выявить в основном отсутствие статистически значимых различий (для РС1 р=0,62, для РС2 р=0,58, для РС3 р=0,08, для РС4 р=0,04, для РС5 р=0,58, для РД2 р=0,5). Не обнаружено клинических и морфологических особенностей опухолей, демонстрирующих коэкспрессию рецепторов различных типов и подтипов.

Обсуждение

В настоящей работе показано, что в АКТГ-продуцирующих опухолях гипофиза и негипофизарной локализации экспрессированы и коэкспрессированы РС и РД2 в различных сочетаниях. Полученные результаты подтверждают данные ранее проведенных исследований D. Batista и соавт. [10] о том, что иммуногистохимический метод является весьма эффективным в обнаружении экспрессии рецепторов опухолевыми клетками, в частности нейроэндокринных новообразований. Теми же авторами [10] выявлена корреляция результатов ИГХИ с результатами, полученными при количественной полимеразной цепной реакции (ПЦР) при определении РС 1—5-го подтипов.

Полученные в нашем исследовании данные о высокой частоте экспрессии РС и РД2 в кортикотропиномах и опухолях с эктопической продукцией АКТГ можно использовать в обосновании целесообразности назначения пациентам аналогов соматостатина и агонистов дофамина. Известно [1], что среди РС выделяют 5 подтипов, которые отличаются по структуре, филогенетическим и фармакологическим свойствам, распределению в органах и тканях человека. РД подразделяют на Д1-подобные (к ним относятся подтипы РД1 и РД5), при активации которых происходит стимуляция аденилатциклазы и цАМФ, и Д2-подобные рецепторы (к ним относятся подтипы РД2, РД3, РД4), которые ассоциируются с подавлением активности аденилатциклазы и снижением цАМФ [2]. РС и РД являются рецепторами, функционально связанными с белками G. Стимуляция этих рецепторов приводит к подавлению секреции гормонов в гормонпродуцирующих опухолях, угнетению пролиферации клеток, уменьшению синтеза факторов роста и ангиогенеза в новообразованиях [10, 15]. При назначении аналогов соматостатина и агонистов дофамина с терапевтической целью необходимо учитывать ряд особенностей, в частности функционирования РС. Известно [2], что при избыточном уровне кортизола в крови в кортикотропиномах, с одной стороны, нарушается экспрессия РС 2-го подтипа, а с другой, изменяется присоединение соматостатина к РС 2-го подтипа за счет уменьшения участков связывания. Это подтверждается более выраженным эффектом октреотида (снижение уровней АКТГ и кортизола в крови, уменьшение размера опухоли) у пациентов с синдромом Нельсона по сравнению с таковым у больных с БИК. В данной ситуации возрастает роль РС 5-го подтипа, и лечение пазиреотидом больных с БИК может быть более эффективным [2].

В новообразованиях с эктопической продукцией АКТГ обнаружена экспрессия РС 2-го подтипа. Данный феномен можно объяснить особенностями пути передачи внутриклеточного сигнала от рецепторов глюкокортикоидов, отличного от такового, функционирующего в клетках кортикотропином [16]. Подтверждением тому могут служить результаты некоторых авторов [14], показавших, что при сцинтиграфии у ряда больных с АКТГ-ЭС возникают очаги накопления октреоскана в опухолях с эктопической продукцией АКТГ, в отличие от кортикотропином. Октреотид также угнетает продукцию АКТГ у таких больных эффективнее, чем у пациентов с БИК. Однако длительное лечение АКТГ-ЭС октреотидом может вызывать тахифилаксию [17].

R. Pivonello и соавт. [15] показали положительный лечебный эффект при назначении каберголина (1—3 мг в неделю в течение 20 мес) у пациентов с БИК, в кортикотропиномах которых была обнаружена экспрессия РД 2-го подтипа. У 3 больных из 11 была отмечена полная нормализация уровня свободного кортизола в моче, у 3 — значительное снижение. В остальных случаях в отсутствие экспрессии РД 2-го подтипа не наблюдали значительного снижения уровня кортизола в моче. Таким образом, необходимы дальнейшие исследования с участием большего числа пациентов и длительным приемом препарата для подтверждения возможной корреляции между экспрессией РД 2-го подтипа в АКТГ-продуцирующих опухолях гипофиза и положительным эффектом лечения каберголином.

В исследовании R. Pivonello и соавт. [18] особенностей экспрессии РД 2—4-го подтипов и их изоформ (длинные и короткие) при помощи ИГХИ и ПЦР в опухолях с эктопической продукцией АКТГ (4 карциноида легких и по одному карциноиду вилочковой и поджелудочной железы) показано, что у 2 пациентов с экспрессией опухолевыми клетками РД2 (ИГХИ) и длинной изоформы РД2 (ПЦР), а также у одного пациента с экспрессией РД4 и короткой и длинной изоформ РД2 и РД4 выявлено значительное снижение уровня АКТГ в крови, кортизола в крови и моче через 3 мес после назначения каберголина. Через 5 мес после отмены препарата вновь был зарегистрирован рост уровня гормонов. У одного пациента, не ответившего на лечение каберголином, при ИГХИ опухоли выявлено незначительное количество клеток, экспрессирующих РД2, а при ПЦР — длинная изоформа РД2. Следовательно, необходимо дальнейшее исследование взаимосвязи экспрессии РД с терапевтическим эффектом агонистов дофамина.

Нейроэндокринные новообразования могут коэкспрессировать РС и РД, в настоящем исследовании подтверждением тому могут служить 6 кортикотропином и 4 опухоли, ассоциированные с АКТГ-ЭС. Ранее была выдвинута гипотеза, что РС и РД могут функционировать синергично [2]. М. Rocheville и соавт. [19] показали возможность гетеродимеризации РС5 и РД2 на примере стабильной культуры клеток СНО-К1. При стимуляции рецепторов двух подтипов соответствующими агонистами были обнаружены усиление их биологического влияния на подавление секреции АКТГ и антипролиферативный эффект. В связи с этим предложена концепция, обосновывающая одновременное назначение аналогов соматостатина и агонистов дофамина с лечебной целью пациентам с БИК и АКТГ-ЭС. Синтезирована молекула, содержащая структурные компоненты РС и РД и обладающая сродством в большей степени к РС2 и РД2, в меньшей степени — к РС5, а также способная подавлять выработку АКТГ и пролиферацию опухолевых клеток [2, 11]. При связывании гибридной молекулы происходит взаимодействие рецепторов между собой, что, возможно, обеспечивает развитие более выраженного терапевтического эффекта. Полагают [11], что эффект одновременной стимуляции рецепторов превзойдет воздействие на РС и РД по отдельности. В доступной литературе не найдено сведений о крупных испытаниях комбинированного препарата у больных с БИК и АКТГ-ЭС. Однако опубликовано описание случая [11], в котором пациенту было выполнено неполное удаление карциноида легкого, продуцирующего АКТГ, и, соответственно, не была достигнута ремиссия заболевания. В образце удаленной опухоли обнаружили коэкспрессию РС5 и РД2. В послеоперационном периоде был назначен ланреотид, после чего наблюдали лишь временную нормализацию уровня кортизола с последующим его ростом. После отмены ланреотида и назначения каберголина отмечали тот же результат. Дальнейшее одновременное применение двух препаратов привело к полной и продолжительной ремиссии заболевания.

Таким образом, определение экспрессии РС и РД в АКТГ-секретирующих опухолях гипофиза и негипофизарной локализации, а также изучение особенностей функционирования этих рецепторов в различных условиях и установление корреляции между экспрессией и лечебным эффектом соответствующих лекарственных препаратов может иметь не только теоретическое, но и практическое значение с точки зрения выбора адекватных методов лечения пациентов.

Выводы

1. Во всех кортикотропиномах выявлена экспрессия РС 1—5-го подтипов с преобладанием по частоте экспрессии 1-го подтипа (57%). Коэкспрессия 2 подтипов РС и более констатирована в 81% кортикотропином. Экспрессия РД2 обнаружена в 52%, а коэкспрессия РС и РД2 — в 29% кортикотропином.

2. В 85% опухолей, ассоциированных с АКТГ-ЭС, выявлена экспрессия РС с преобладанием РС 3-го подтипа (72%). Коэкспрессия 2 подтипов РС и более обнаружена в 50% новообразований, 50% опухолей экспрессировали РД2. Коэкспрессия РС и РД2 констатирована в 38% случаев.

3. Не выявлено различий характера и частоты экспрессии РС и РД в кортикотропиномах и опухолях, ассоциированных с АКТГ-ЭС.

4. Полученные результаты экспрессии и коэкспрессии РС и РД могут служить теоретическим обоснованием для назначения аналогов соматостатина и агонистов дофамина с терапевтической целью у пациентов с АКТГ-продуцирующими опухолями гипофиза и негипофизарной локализации.

Подтверждение e-mail

На test@yandex.ru отправлено письмо с ссылкой для подтверждения e-mail. Перейдите по ссылке из письма, чтобы завершить регистрацию на сайте.

Подтверждение e-mail