Распределение генов и гаплотипов главного комплекса гистосовместимости человека у новорожденных с гемолитической болезнью и задержкой внутриутробного развития

Гемолитическая болезнь новорожденных (ГБН) и задержка внутриутробного развития плода (ЗВУР) являются частыми патологиями перинатального периода в России и в мире [1—3]. Из числа детей, родившихся в 2016 г. в нашем Центре, ГБН имели 1,4%, а ЗВУР — 4,2%. Несмотря на большое число работ, посвященных изучению патогенеза ЗВУР, причины ее развития до сих пор до конца не установлены. Одним из изучаемых в этой связи феноменов является фетальный микрохимеризм — явление циркуляции в крови матери до 1% клеток плода [4]. В рамках исследования микрохимеризма генов системы HLA у детей с патологией перинатального периода и их матерей [5, 6] нами был проведен анализ генетических характеристик исследуемых групп.

Целью настоящей работы была оценка распределения генов и гаплотипов HLA у новорожденных с ГБН и ЗВУР и выявление возможных взаимосвязей наследования изучаемых генов и перинатальной патологии.

В исследование были включены 45 младенцев с патологией перинатального периода, из них 23 новорожденных с ГБН и 22 – с ЗВУР. Для оценки соответствия основных антропометрических показателей (масса тела и рост) гестационному возрасту детей были использованы перцентильные таблицы

Группа ЗВУР: из 22 детей — 12 (54,5%) мальчиков и 10 (45,5%) девочек. Средняя оценка по шкале Апгар составила на 1-й минуте 8 баллов, на 5-й минуте — 9 баллов. Доношенных новорожденных — 20, недоношенных со сроком гестации 33 и 35 нед — 2 ребенка. При оценке основных антропометрических показателей при рождении асимметричная форма ЗВУР (гипотрофия) диагностирована у 19 доношенных и 1 недоношенного ребенка, симметричная форма (гипостатура) — у 1 доношенного и 1 недоношенного. У детей с асимметричной формой ЗВУР масса тела при рождении в среднем соответствовала второму центильному интервалу (ЦИ), у новорожденных с симметричной формой ЗВУР — первому Ц.И. Осложненное течение раннего неонатального периода отмечено у 15 доношенных и 2 недоношенных детей данной группы.

Группа ГБН: из 23 новорожденных — 9 (39,1%) мальчиков и 14 (60,8%) девочек. Средняя оценка по шкале Апгар составила на 1-й минуте 7 баллов, на 5-й минуте — 8 баллов. Все дети данной группы были доношенными. Масса тела и рост при рождении в среднем соответствовали четвертому Ц.И. Все дети имели осложненное течение раннего неонатального периода в виде желтушной и/или анемической формы ГБН по АВ0- и/или Rh-системе. Внутриутробное переливание крови было проведено в 12 случаях, в том числе двукратное внутриутробное переливание — в 3 случаях, однократная гемотрансфузия после рождения потребовалась 4 детям (в 2 случаях проведено заменное переливание крови), многократные гемотрансфузии — 2 детям.

Контрольную группу (108 человек) составили матери пациентов из 1-й и 2-й групп (45 человек), а также пары мать–новорожденный без указанной перинатальной патологии (63 человека, в числе которых была одна двойня). У всех включенных в данное исследование пациентов было получено информированное согласие.

Исследуемым материалом служила геномная ДНК, выделенная из периферической крови автоматическим методом на станции выделения ДНК KingFisher 96 Purification System («Thermo Fisher Scientific», США) с использованием готовых наборов реагентов («Protrans Agatha», Германия). Взятие образцов крови у женщин выполняли до родов, у новорожденных — в первые 3—4 дня жизни. Типирование генов системы HLA (локусы А, В, С, DRB1, DQB1) выполняли методом полимеразной цепной реакции с аллель-специфическими праймерами (ПЦР-SSP), с использованием коммерческих тест-систем («Protrans Cyclerplate System», Германия) в условиях, рекомендованных производителем. Разделение продуктов амплификации ДНК проводили методом электрофореза в 2% агарозном геле с последующей визуализацией в проходящем ультрафиолетовом свете. Для анализа результатов HLA-типирования использовали таблицы интерпретации, поставляемые вместе с наборами реагентов. Расчет частоты генов и распределения гаплотипов выполняли с помощью компьютерной программы Arlequin (версия 3.5.1.3), доступной в сети Интернет. Оценку значимости различий встречаемости генов и гаплотипов проводили на основании точного критерия Фишера.

Данные о распределении генов HLA в исследуемых группах пациентов представлены в табл. 1. Проведенное молекулярно-генетическое типирование генов HLA у новорожденных с ГБН показало статистически значимое повышение частоты генов HLA-A*25 и A*32 по сравнению с КГ (13,0% и 4,2%, р=0,03 для HLA-A*25; 6,5% и 0,9%, р=0,04 для HLA-A*32). Так как ГБН характеризуется несовместимостью по антигенам эритроцитов систем АВ0 и/или Rh, наследование которых происходит независимо от генного комплекса HLA, а на поверхности эритроцитов антигены системы HLA не представлены, выявленная особенность распределения генов HLA в данной группе пациентов является, скорее всего, случайной находкой и не связана с патогенезом ГБН.

Вопрос взаимосвязи наследования генов системы HLA и задержки внутриутробного развития плода давно представляет интерес для исследователей [7, 8], однако до сих пор не получено однозначных данных о влиянии отдельных HLA-специфичностей на риск развития ЗВУР. В нашей работе мы обнаружили более чем двукратное снижение частоты гена HLA-A*02 у детей с ЗВУР по сравнению с группой контроля (15,9 и 35,2% соответственно; р=0,01). Кроме того, ген HLA-C*04 выявлялся у этих пациентов в 2,2 раза чаще, чем у представителей КГ (29,6 и 13,4% соответственно, р=0,01). Учитывая небольшую численность исследуемой группы, говорить о защитной или, наоборот, предрасполагающей роли выявленных генов HLA в возникновении ЗВУР пока преждевременно. Данные находки нуждаются в подтверждении на более обширном материале. Однако известно, что ряд молекул HLA I класса являются лигандами иммуноглобулиноподобных рецепторов киллерных клеток (KIR). Взаимодействие между этими молекулами играет ключевую роль в формировании как врожденного, так и адаптивного иммунитета [9]. Различные комбинации HLA I класса и KIR влияют на устойчивость организма к инфекциям, предрасположенность к аутоиммунным заболеваниям и осложнениям беременности, а также на исход аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток [10]. Кроме того, исследователи показали четкую корреляцию между наследованием генов KIR-рецепторов и их HLA-C-лигандов с массой тела новорожденных [11]. В связи с этим представляется целесообразным в дальнейшем типировать гены KIR у наших пациентов с ЗВУР с целью изучения данной зависимости.

Распределение гаплотипов HLA в исследуемых группах представлено в табл. 2.

Несмотря на полученные статистически значимые различия частоты отдельных специфичностей генов HLA у пациентов с ГБН и ЗВУР, говорить об установленной ассоциации между данными патологиями перинатального периода и наследованием генов HLA было бы преждевременно. Выявленные взаимосвязи нуждаются в дальнейшем изучении на большей группе пациентов.

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

*e-mail: a.polyakova9285@gmail.com;