Методы изучения гамма-дельта-T-лимфоцитов в дерматологии
Журнал: Клиническая дерматология и венерология. 2026;25(3):383-389.
DOI: 10.17116/klinderma202625031383
Прочитано: 286 раз
Резюме
ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ
Систематизировать современные методы выделения и анализа γδ-T-лимфоцитов из кожи человека, оценить их преимущества, ограничения и применимость в исследованиях дерматологических заболеваний.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
Проведен анализ научных публикаций, посвященных протоколам выделения γδ-T-клеток из кожи, включая механическую и ферментативную диссоциацию, магнитную и флуоресцентную сортировку, методы эксплантатов и спонтанной миграции. Рассмотрены особенности работы с кожей человека.
РЕЗУЛЬТАТЫ
Выделение кожных γδ-T-лимфоцитов сопряжено с рядом методических сложностей, включая низкую представленность клеток, необходимость сохранения их жизнеспособности и функциональной активности, а также риск повреждения поверхностных маркеров при ферментативной обработке. Оптимальные протоколы варьируют в зависимости от целей исследования: для иммунофенотипирования предпочтительны щадящие ферменты (коллагеназа D, либеразы), тогда как для функциональных тестов и культивирования эффективны методы эксплантатов и кратковременного восстановления клеток после диссоциации.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Выбор метода выделения γδ-T-лимфоцитов должен учитывать специфику исследования. Перспективными направлениями являются стандартизация протоколов, минимизация повреждения клеток и разработка новых подходов, таких как 3D-культуры. Дальнейшие исследования в этой области могут способствовать углубленному пониманию роли γδ-T-клеток в патогенезе кожных заболеваний и разработке методов таргетной терапии.
Ключевые слова
- γδ-T-лимфоциты
- кожа
- методы выделения клеток
- кожные заболевания
- ферментативная диссоциация
- клеточная культура
Дата поступления: 30.07.2025
Дата принятия в печать: 24.03.2026
Дата публикации: 03.07.2026
- Hu Y, Hu Q, Li Y, Lu L, Xiang Z, Yin Z, Kabelitz D, Wu Y. γδ T cells: origin and fate, subsets, diseases and immunotherapy. Signal Transduct Target Ther. 2023 Nov 22;8(1):434. https://doi.org/10.1038/s41392-023-01653-8
- Ribot JC, Lopes N, Silva-Santos B. γδ T cells in tissue physiology and surveillance. Nat Rev Immunol. 2021 Apr;21(4):221-232. https://doi.org/10.1038/s41577-020-00452-4
- Qu G, Wang S, Zhou Z, Jiang D, Liao A, Luo J. Comparing Mouse and Human Tissue-Resident γδ T Cells. Front Immunol. 2022 Jun 8;13:891687. https://doi.org/10.3389/fimmu.2022.891687
- Nestle FO, Di Meglio P, Qin JZ, Nickoloff BJ. Skin immune sentinels in health and disease. Nat Rev Immunol. 2009 Oct;9(10):679-91. https://doi.org/10.1038/nri2622
- Zhang W, Pajulas A, Kaplan MH. γδ T Cells in Skin Inflammation. Crit Rev Immunol. 2022;42(5):43-56. https://doi.org/10.1615/CritRevImmunol.2022047288
- Cruz MS, Diamond A, Russell A, Jameson JM. Human αβ and γδ T Cells in Skin Immunity and Disease. Front Immunol. 2018 Jun 6;9:1304. https://doi.org/10.3389/fimmu.2018.01304
- Girardi M. Immunosurveillance and immunoregulation by gammadelta T cells. J Invest Dermatol. 2006 Jan;126(1):25-31. https://doi.org/10.1038/sj.jid.5700003
- Hu W, Shang R, Yang J, Chen C, Liu Z, Liang G, He W, Luo G. Skin γδ T Cells and Their Function in Wound Healing. Front Immunol. 2022 Apr 11;13:875076. PMID: 35479079; PMCID: PMC9035842. https://doi.org/10.3389/fimmu.2022.875076
- Sumaria N, Roediger B, Ng LG, Qin J, Pinto R, Cavanagh LL, Shklovskaya E, Fazekas de St Groth B, Triccas JA, Weninger W. Cutaneous immunosurveillance by self-renewing dermal gammadelta T cells. J Exp Med. 2011 Mar 14;208(3):505-518. https://doi.org/10.1084/jem.20101824
- Castillo-González R, Cibrian D, Sánchez-Madrid F. Dissecting the complexity of γδ T-cell subsets in skin homeostasis, inflammation, and malignancy. J Allergy Clin Immunol. 2021 Jun;147(6):2030-2042. https://doi.org/10.1016/j.jaci.2020.11.023
- Munoz LD, Sweeney MJ, Jameson JM. Skin Resident γδ T Cell Function and Regulation in Wound Repair. Int J Mol Sci. 2020 Dec 5;21(23):9286. https://doi.org/10.3390/ijms21239286
- Marshall AS, Silva JR, Bannerman CA, Gilron I, Ghasemlou N. Skin-Resident γδ T Cells Exhibit Site-Specific Morphology and Activation States. J Immunol Res. 2019 Jan 6;2019:9020234. https://doi.org/10.1155/2019/9020234
- Chojnacka-Purpurowicz J, Owczarczyk-Saczonek A, Nedoszytko B. The Role of Gamma Delta T Lymphocytes in Physiological and Pathological Condition-Focus on Psoriasis, Atopic Dermatitis, Autoimmune Disorders, Cancer and Lymphomas. Int J Mol Sci. 2024 Jul 21;25(14):7960. https://doi.org/10.3390/ijms25147960
- Cai Y, Shen X, Ding C, Qi C, Li K, Li X, Jala VR, Zhang HG, Wang T, Zheng J, Yan J. Pivotal role of dermal IL-17-producing γδ T cells in skin inflammation. Immunity. 2011 Oct 28;35(4):596-610. https://doi.org/10.1016/j.immuni.2011.08.001
- Macleod AS, Havran WL. Functions of skin-resident γδ T cells. Cell Mol Life Sci. 2011 Jul;68(14):2399-2408. https://doi.org/10.1007/s00018-011-0702-x
- MacLeod AS, Hemmers S, Garijo O, Chabod M, Mowen K, Witherden DA, Havran WL. Dendritic epidermal T cells regulate skin antimicrobial barrier function. J Clin Invest. 2013 Oct;123(10):4364-4374. https://doi.org/10.1172/JCI70064
- Сорокина Е.В., Бишева И.В., Мишина Н.В., Столпникова В.Н. Роль γδ T-лимфоцитов в патогенезе аутоиммунных заболеваний с поражением кожи. Успехи современной биологии. 2023;143(1):16-21. https://doi.org/10.31857/S0042132423010088
- Laggner U, Di Meglio P, Perera GK, Hundhausen C, Lacy KE, Ali N, Smith CH, Hayday AC, Nickoloff BJ, Nestle FO. Identification of a novel proinflammatory human skin-homing Vγ9Vδ2 T cell subset with a potential role in psoriasis. J Immunol. 2011 Sep 1;187(5):2783-2793. https://doi.org/10.4049/jimmunol.1100804
- He X, de Oliveira VL, Keijsers R, Joosten I, Koenen HJ. Lymphocyte Isolation from Human Skin for Phenotypic Analysis and Ex Vivo Cell Culture. J Vis Exp. 2016 Apr 8;(110):e52564. https://doi.org/10.3791/52564
- Hailer AA, Wu D, El Kurdi A, Yuan M, Cho RJ, Cheng JB. Isolation of human cutaneous immune cells for single-cell RNA sequencing. STAR Protoc. 2023 Apr 28;4(2):102239. https://doi.org/10.1016/j.xpro.2023.102239
- Saluzzo S, Gail LM, Neuwirth T, Pandey RV, Farlik M, Stary G. Processing human skin samples for single-cell assays. STAR Protoc. 2022 Jun 17;3(3):101470. https://doi.org/10.1016/j.xpro.2022.101470
- Song J, Deng T. The Adipocyte and Adaptive Immunity. Front Immunol. 2020 Nov 27;11:593058. doi: 10.3389/fimmu.2020.593058. Erratum in: Front Immunol. 2021 Oct 08;12:784125. https://doi.org/10.3389/fimmu.2021.784125
- https://www.miltenyibiotec.com/US-en/products/whole-skin-dissociation-kit-human.html
- Robinson JP. Flow cytometry: past and future. Biotechniques. 2022 Apr;72(4): 159-169. https://doi.org/10.2144/btn-2022-0005
- Cossarizza A, Chang HD, Radbruch A, et al. Guidelines for the use of flow cytometry and cell sorting in immunological studies (second edition). Eur J Immunol. 2019;49(10):1457-1973. https://doi.org/10.1002/eji.201970107
- Willasch A, Eing S, Weber G, Kuçi S, Schneider G, Soerensen J, Jarisch A, Rettinger E, Koehl U, Klingebiel T, Kreyenberg H, Bader P. Enrichment of cell subpopulations applying automated MACS technique: purity, recovery and applicability for PCR-based chimerism analysis. Bone Marrow Transplant. 2010 Jan;45(1):181-189. https://doi.org/10.1038/bmt.2009.89
- Polakova A, Hudemann C, Wiemers F, Kadys A, Gremke N, Lang M, Zwiorek L, Pfützner W, Hertl M, Möbs C, Zimmer CL. Isolation of Lymphocytes from Human Skin and Murine Tissues: A Rapid and Epitope-Preserving Approach. JID Innov. 2022 Sep 7;3(1):100155. https://doi.org/10.1016/j.xjidi.2022.100155
- Du W, Lenz D, Köhler R, Zhang E, Cendon C, Li J, Massoud M, Wachtlin J, Bodo J, Hauser AE, Radbruch A, Dong J. Rapid Isolation of Functional ex vivo Human Skin Tissue-Resident Memory T Lymphocytes. Front Immunol. 2021 Mar 22;12:624013. https://doi.org/10.3389/fimmu.2021.624013
- Salimi M, Subramaniam S, Selvakumar T, Wang X, Zemenides S, Johnson D, Ogg G. Enhanced isolation of lymphoid cells from human skin. Clin Exp Dermatol. 2016 Jul;41(5):552-556. https://doi.org/10.1111/ced.12802
- Maitre E, Le-Page AL, Comoz F, Truquet F, Damaj G, Cornet E, Verneuil L, Salaün V, Troussard X. Usefulness of Flow Cytometry for the Detection of Cutaneous Localization in Malignant Hematologic Disorders. Cytometry B Clin Cytom. 2019 Jul;96(4):283-293. https://doi.org/10.1002/cyto.b.21784
- Watanabe R, Gehad A, Yang C, Scott LL, Teague JE, Schlapbach C, Elco CP, Huang V, Matos TR, Kupper TS, Clark RA. Human skin is protected by four functionally and phenotypically discrete populations of resident and recirculating memory T cells. Sci Transl Med. 2015 Mar 18;7(279): 279ra39. https://doi.org/10.1126/scitranslmed.3010302
- Reitermaier R, Ayub T, Staller J, Kienzl P, Fortelny N, Vieyra-Garcia PA, Worda C, Fiala C, Staud C, Eppel W, Scharrer A, Krausgruber T, Elbe-Bürger A. The molecular and phenotypic makeup of fetal human skin T lymphocytes. Development. 2022 Apr 15;149(8):dev199781. https://doi.org/10.1242/dev.199781
- Schaerli P, Ebert L, Willimann K, Blaser A, Roos RS, Loetscher P, Moser B. A skin-selective homing mechanism for human immune surveillance T cells. J Exp Med. 2004 May 3;199(9):1265-1275. https://doi.org/10.1084/jem.20032177
- Hailer AA, Wu D, El Kurdi A, Yuan M, Cho RJ, Cheng JB. Isolation of human cutaneous immune cells for single-cell RNA sequencing. STAR Protoc. 2023 Apr 28;4(2):102239. https://doi.org/10.1016/j.xpro.2023.102239
- Sato T, Ogawa Y, Ishikawa A, Nagasaka Y, Kinoshita M, Shiokawa I, Shimada S, Momosawa A, Kawamura T. Revisiting the Experimental Methods for Human Skin T-Cell Analysis. JID Innov. 2022 Mar 23;2(4):100125. https://doi.org/10.1016/j.xjidi.2022.100125
- Botting RA, Bertram KM, Baharlou H, Sandgren KJ, Fletcher J, Rhodes JW, Rana H, Plasto TM, Wang XM, Lim JJK, Barnouti L, Kohout MP, Papadopoulos T, Merten S, Olbourne N, Cunningham AL, Haniffa M, Harman AN. Phenotypic and functional consequences of different isolation protocols on skin mononuclear phagocytes. J Leukoc Biol. 2017 Jun;101(6):1393-1403. https://doi.org/10.1189/jlb.4A1116-496R
- McCully ML, Ladell K, Andrews R, Jones RE, Miners KL, Roger L, Baird DM, Cameron MJ, Jessop ZM, Whitaker IS, Davies EL, Price DA, Moser B. CCR8 Expression Defines Tissue-Resident Memory T Cells in Human Skin. J Immunol. 2018 Mar 1;200(5):1639-1650. https://doi.org/10.4049/jimmunol.1701377
- Clark RA, Chong BF, Mirchandani N, Yamanaka K, Murphy GF, Dowgiert RK, Kupper TS. A novel method for the isolation of skin resident T cells from normal and diseased human skin. J Invest Dermatol. 2006 May; 126(5):1059-1070. https://doi.org/10.1038/sj.jid.5700199
- Gargas S, Bshara-Corson S, Cruz M, Jameson J. Isolation and Analysis of Mouse and Human Skin γδ T Cells. Curr Protoc Immunol. 2019 Dec; 127(1):e92. https://doi.org/10.1002/cpim.92
- Ferry GM, Agbuduwe C, Forrester M, Dunlop S, Chester K, Fisher J, Anderson J, Barisa M. A Simple and Robust Single-Step Method for CAR-Vδ1 γδT Cell Expansion and Transduction for Cancer Immunotherapy. Front Immunol. 2022 May 31;13:863155. https://doi.org/10.3389/fimmu.2022.863155
Рекомендуем статьи по данной теме:
Лекарственно-индуцированная саркоидоподобная реакция на фоне терапии ингибиторами BRAF/MEK метастатической меланомы.Клиническая дерматология и венерология. 2026;25(4):632-640
Экспрессия LYVE-1 в коже при некротической форме липоидного некробиоза.Клиническая дерматология и венерология. 2026;25(4):547-553
Оценка влияния перорального применения коллагена гидролизата на изменение морфологических характеристик и биологическое разнообразие микробиоты кожи.Клиническая дерматология и венерология. 2026;25(2):218-224
Реакция тканевых клеток миелоидного ряда и изменение внеклеточного матрикса кожи в условиях моделирования физической нагрузки.Клиническая дерматология и венерология. 2025;24(6):784-788
Профилактика и лечение кожной токсичности у детей, получающих противоопухолевую лучевую терапию.Клиническая дерматология и венерология. 2025;24(4):470-480
Возможности применения кожно-жирового лоскута передней брюшной стенки при острой травме верхних конечностей.Пластическая хирургия и эстетическая медицина. 2024;(4):51-59